動物源性食品中60種農藥殘留檢測的前處理方法比較研究

孫華國

（長海縣食品檢驗檢測中心，遼寧大連116599）

通過飼料、飲水、環(huán)境、消毒等途徑引入的農藥殘留，嚴重威脅動物源性食品的安全，已經引發(fā)社會與公眾關注。動物源性食品中農藥殘留檢測的前處理經常采用QuEChERS方法，如GB 23200.37－2016《食品安全國家標準 食品中烯啶蟲胺、呋蟲胺等20種農藥殘留量的測定 液相色譜－質譜/質譜法》等。QuEChERS方法具有適用性廣、操作便捷等優(yōu)點，但與此同時，也存在一些問題。一是石墨化炭黑除了吸附色素外，還會少量吸附農殘目標物；二是經常會出現(xiàn)漏液的問題，如乙腈、乙酸乙酯的漏液，導致結果偏差；三是操作過程需要反復擰離心管螺蓋；四是需要離心機等輔助設備。

本文對動物源性食品中60種農藥殘留檢測的前處理方法進行研究，分別采用QuEChERS方法和固相萃取柱法（SPE方法），其中，對QuECh-ERS方法進行改進，主要是沒有加入石墨化炭黑；SPE小柱采用的是含有二氧化鋯填料的復合柱。進而對兩種方法的準確度、精密度、操作便捷性等因素進行對比研究。

一、材料與方法

（一）材料、試劑與儀器樣品：豬肉、牛奶。試劑：乙腈（色譜級）、氯化鈉（分析純）、乙酸鉛（分析純）、超純水。QuEChERS（Cat.No：EQ－053）：含50 mgPSA、100 mgC18、50 mg二氧化硅、100 mg無水硫酸鎂，購于大連沈源檢驗檢測咨詢有限公司。固相萃取柱（Cat.No：E31－6－1000）：購于大連沈源檢驗檢測咨詢有限公司。儀器：氣相色譜－質譜聯(lián)用儀（GC－MS）。

標準品：敵敵畏、滅線磷、氟樂靈、甲拌磷、a－六六六、六氯苯、樂果、β－六六六、林丹、五氯硝基苯、乙拌磷、δ－六六六、百菌清、氯唑磷、異稻瘟凈、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、七氯、甲基立枯磷、皮蠅磷、殺螟硫磷、甲基嘧啶磷、艾氏劑、馬拉硫磷、倍硫磷、三氯殺螨醇、毒死蜱、對硫磷、嘧啶磷、環(huán)氧七氯、三唑醇、腐霉利、殺撲磷、a－硫丹、氯丹、狄氏劑、丙溴磷、p，p'－DDE、異狄氏劑、β－硫丹、p，p'－DDD、o，p－DDT、乙硫磷、三唑磷、硫丹硫酸鹽、p，p'－DDT、苯硫磷、伏殺硫磷、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲環(huán)唑、溴氰菊酯對照品，純度≥98%。

儲備液配置：精確稱取上述53種農藥對照品，用甲苯分別配制成10 mg/mL的標準儲備液，2～8℃冷藏保存，有效期6個月。

（二）儀器參數(shù)條件氣相色譜條件如下。色譜柱：Agilent－5MS，30 m×0.32 mm×0.25μm。進樣口溫度：240℃。升溫程序：初始溫度70℃，保持2 min，以25℃/min升溫至150℃，再以3℃/min升溫至200℃，再以8℃/min升溫至280℃，保持12 min。載氣：氦氣，流速為1.46 mL/min。進樣方式：不分流進樣。進樣量：1.0μL。離子源溫度：230℃。接口溫度：280℃。溶劑延遲：5.9 min。電子轟擊電離源（EI）：選擇離子監(jiān)測模式（SIM），分組監(jiān)測見表1。

表1 選擇離子監(jiān)測組

（三）實驗方法

1.提取方法。（1）SPE方法（豬肉）：稱取2 g豬肉樣品，加入4 g氯化鈉、10 mL乙腈，振蕩5 min，6 000 r/min離心2 min，收集上層清液。再向下層加入10 mL乙腈，重復提取一次，合并兩次上清液，待凈化。（2）SPE方法（牛奶）：稱取2 g牛奶樣品，加入10 mL乙腈，振蕩3 min，再加2 mL 200 g/L乙酸鉛溶液、4 g氯化鈉，振蕩2 min，6 000 r/min離心2 min，收集上層清液。再向下層加入10 mL乙腈，重復提取一次，合并兩次上清液，待凈化。（3）QuEChERS方法（豬肉）：稱取2 g豬肉樣品，加入4 g氯化鈉、10 mL乙腈，振蕩5 min，6 000 r/min離心2 min，收集上層清液。再向下層加入10 mL乙腈，重復提取一次，合并兩次上清液。將上清液在35℃水浴下減壓蒸餾至干，加入1 mL乙腈，超聲溶解，待凈化。（3）QuEChERS方法（牛奶）：稱取2 g牛奶樣品，加入10 mL乙腈，振蕩3 min，再加2 mL 200 g/L乙酸鉛溶液、4 g氯化鈉，振蕩2 min，6 000 r/min離心2 min，收集上層清液。再向下層加入10 mL乙腈，重復提取一次，合并兩次上清液。將上清液在35℃水浴下減壓蒸餾至干，加入1 mL乙腈，超聲溶解，待凈化。

2.凈化方法。（1）QuEChERS方法：將待凈化液轉移到2 mL QuEChERS凈化管，渦旋混合1 min，8 000 r/min離心2 min，取出上清液，供GC－MS分析。（2）SPE方法操作如下。活化：加入10mL乙腈，棄去流出液。上樣：加入待凈化液，收集流出液。洗脫：加入5 mL乙腈，收集流出液。復溶：在35℃水浴下減壓蒸餾至干，加入1 mL乙腈，混勻，供GC－MS分析。

二、結果與分析

（一）檢出限與定量限兩種前處理方法的檢出限與定量限基本一致?？瞻棕i肉和牛奶中添加60種農藥，添加濃度為50μg/kg，信噪比>10，因此定量限確定為50μg/kg；添加濃度為15μg/kg，信噪比>3，因此檢出限為15μg/kg。

（二）方法的準確度為了考察方法的準確度和精密度，在空白豬肉和牛奶中分別進行了50 ug/kg的加標回收率試驗，每種樣品平行測定5份，重復3次，計算平均回收率，結果見表2。總體上看，QuEChERS方法和SPE方法的添加回收率基本上達到了70.0%～115.0%。但對個別農藥有差異，其中，在SPE方法中，六氯苯在豬肉、牛奶中的添加回收率為80.1%和72.1%，優(yōu)于QuECh-ERS方法的67.5%和60.2%；艾氏劑在豬肉、牛奶中的添加回收率為95.6%和78.4%，優(yōu)于QuEChERS方法的87.9%和69.1%；p，p'－DDE在豬肉、牛奶中的添加回收率為101.2%和79.4%，優(yōu)于QuEChERS方法的116.1%和68.0%；百菌清在豬肉、牛奶中的添加回收率為45.8%和52.3%，不及QuEChERS方法的80.6%和100.1%。

表2 豬肉、牛奶中60種農藥留GC-MS檢測的添加回收率結果 （%）

（三）方法的精密度結果表明，在濃度為50 ug/kg的添加回收試驗中，批內的變異系數(shù)在10%范圍內，批間的變異系數(shù)在15%范圍內。

（四）操作便捷性在前處理方法的操作便捷性方面，SPE方法要明顯優(yōu)于QuEChERS方法，而且QuEChERS方法出現(xiàn)了一定程度的乙腈漏液問題。

三、結論

結果表明，方法準確度方面，QuEChERS和SPE方法的添加回收率基本上達到了70.0%～115.0%。但是，六氯苯、艾氏劑、p，p'－DDE適用于SPE方法，不適用于QuEChERS方法；百菌清適用于QuEChERS方法，不適用于SPE方法。方法的精密度方面，QuEChERS和SPE方法均能夠滿足需要。操作便捷性方面，SPE方法明顯優(yōu)于QuEChERS方法，而且QuEChERS方法出現(xiàn)了乙腈漏液問題。