COPD并發(fā)感染患者PSGL?1、IL?6、膜聯(lián)蛋白A1的臨床價值研究

李國干 程宏寧 周安燕 林良奮

流行病學(xué)研究表明，慢性阻塞性肺?。╟hronic obstructive pulmoriary disease，COPD）并發(fā)感染的發(fā)病率可超過697/1 萬人左右［1］。臨床上COPD 合并感染的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊咧匕Y肺炎、敗血癥或者感染性休克的發(fā)生，增加了COPD 合并感染患者病死的風(fēng)險［2］。對COPD 合并感染的病情評估能夠?yàn)榕R床上相關(guān)患者的診療提供理論方面的參考。白介素?6（Interleukin? 6，IL?6）的表達(dá)上升，能夠通過誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞的功能紊亂，進(jìn)而加劇肺泡上皮組織的免疫性損傷［3］；外周血中性粒細(xì)胞表面P?選擇素糖蛋白配體1（P?selectinglycoproteinli?gand1，PSGL?1）能夠提高選擇素家族因子的激活程度，促進(jìn)下游趨化因子的激活，最終促進(jìn)其對于肺泡間質(zhì)組織的浸潤，促進(jìn)感染性病情的進(jìn)展［4］；外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 是炎癥調(diào)控的相關(guān)因子，對于下游中性粒細(xì)胞或者單核細(xì)胞的募集程度具體提高作用，最終促進(jìn)感染的發(fā)生［5］。為了揭示PSGL?1、IL?6、膜聯(lián)蛋白A1 的表達(dá)與COPD 合并感染的病情的相關(guān)性，以期為臨床診療提供參考依據(jù)，本文探討了PSGL?1、IL?6、膜聯(lián)蛋白A1 的表情況，進(jìn)行如下報道。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年6月至2020年11月期間在定安縣人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科治療的COPD 患者84 例及COPD并發(fā)感染患者85 例，同時將83 例健康體檢者作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有入組患者均符合COPD 穩(wěn)定期的診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］。②受試者及其家屬知情并同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他嚴(yán)重性疾??；②排除2周內(nèi)應(yīng)用過抗生素者。3 組受試者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 3 組受試者一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data of three groups（±s）

表1 3 組受試者一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data of three groups（±s）

組別對照組COPD 組COPD 并發(fā)感染組χ2/F 值P 值n 83 84 85男/女49/34 44/40 46/39 0.804 0.669年齡（歲）64.58±9.23 63.74±9.96 63.97±9.53 0.301 0.740

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用淋巴細(xì)胞分離液體進(jìn)行外周血的分離，去除外周血單個核細(xì)胞（Peripheral blood mononu?clear cell，PBMC）血漿，PBS 重新懸浮后取取白細(xì)胞層于離心管中，1 000 r/min 離心15 min，加入紅細(xì)胞膜裂解液，室溫下放置20 min，1 000 r/min 離心15 min，去除上清液體，PBS 洗滌2 次，加入100 μL生理鹽水預(yù)混，準(zhǔn)備進(jìn)行PSG?1 檢測；取患者肘部靜脈血5 mL 自然放置，然后測試IL?6 水平。將上述搜集的液體加入96 孔的酶標(biāo)板中，采用ELISA法進(jìn)行PSG?1 及IL?6 的檢測。

抽取受檢者的肘部靜脈血并離心取上層液體，使用由北京奧維亞生物公司生產(chǎn)的試劑盒對其進(jìn)行RNA 的提取，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA 后進(jìn)行基因的擴(kuò)增；基因的合成和引物設(shè)計(jì)使用primer 5 軟件，其中GADPH 是內(nèi)參，膜聯(lián)蛋白A1 引物5′CAAGGACCAACTACAACC 3′：下游5′TGCCTC TTCTTTAATTG3′，經(jīng)歷45 個循環(huán)后進(jìn)行曲線溶解，每個孔設(shè)置3 個復(fù)孔，取其平均值。抽取受檢者的肘部靜脈血并離心取上層液體，使用由貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的UniCel DxI 800 免疫發(fā)光儀器對膜聯(lián)蛋白進(jìn)行檢測，配套試劑盒由北京九強(qiáng)生物公司生產(chǎn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 23.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（±s）描述，多組間的比較為單因素方差分析，兩兩比較t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以n（%）描述，行χ2檢驗(yàn)。有關(guān)指標(biāo)對生存預(yù)后的評估價值分析ROC。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組患者血清中IL?6 水平比較

COPD 并發(fā)感染組血清IL?6、PSG?1、膜聯(lián)蛋白A1 mRNA 和膜聯(lián)蛋白A1 水平明顯高于COPD 組和對照組，COPD 組血清IL?6、PSG?1、膜聯(lián)蛋白A1 mRNA 和蛋白水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 3 組血清IL?6 水平比較（±s）Table 2 Comparison of serum IL?6 levels among 3 groups（±s）

表2 3 組血清IL?6 水平比較（±s）Table 2 Comparison of serum IL?6 levels among 3 groups（±s）

注：與對照組比較，a P<0.05；與COPD 組比較，bP<0.05。

n對照組COPD 組COPD 并發(fā)感染組F 值P 值83 84 85 IL?6（ng/L）10.84±1.79 101.70±20.42a 132.85±27.54ab 847.958 0.000 PSG?1 437.21±19.83 513.87±21.37a 532.69±24.71ab 442.592 0.000膜聯(lián)蛋白A1 mRNA 相對表達(dá)量1.15±0.53 1.35±0.78a 2.87±1.23ab 94.604 0.000膜聯(lián)蛋白A1 蛋白相對表達(dá)量0.74±0.06 0.81±0.12a 1.57±0.64ab 118.923 0.000

2.2 COPD 合并感染不同預(yù)后患者IL?6、PSG?1 等水平比較

COPD 合并感染組死亡患者血清IL?6、PSG?1、膜聯(lián)蛋白A1 mRNA 相對表達(dá)量和膜聯(lián)蛋白A1 蛋白相對表達(dá)量明顯高于存活患者（P<0.05）。見表3。

表3 COPD 合并感染不同預(yù)后患者IL?6、PSG?1 等水平比較（±s）Table 3 Comparison of IL?6 and PSG?1 levels in COPD patients with different prognosis（±s）

表3 COPD 合并感染不同預(yù)后患者IL?6、PSG?1 等水平比較（±s）Table 3 Comparison of IL?6 and PSG?1 levels in COPD patients with different prognosis（±s）

預(yù)后n IL?6（ng/L）PSG?1死亡存活t 值P 值15 70 70 150.02±23.33 120.02±21.12 4.902 0.000 550.03±21.13 520.03±20.01 5.219 0.000膜聯(lián)蛋白A1 mRNA相對表達(dá)量2.91±0.92 2.42±0.82 2.056 0.043膜聯(lián)蛋白A1蛋白相對表達(dá)量1.71±0.42 1.40±0.30 3.369 0.001

2.3 A1 mRNA、蛋白水平和IL?6、PSG?1 等4 指標(biāo)對COPD 合并感染患者不同預(yù)后的評估價值

以死亡組為陽性樣本，以存活組為陰性樣本，建立ROC 曲線診斷分析模型，結(jié)果顯示：聯(lián)合應(yīng)用對COPD 合并感染患者不同預(yù)后的評估價值明顯高于各指標(biāo)單獨(dú)應(yīng)用，AUC（0.95CI）為0.845（0.733～0.951），準(zhǔn)確度為0.847（72/85）（P<0.05）。見表4、圖1。

表4 A1 mRNA、蛋白水平和IL?6、PSG?1 等4 指標(biāo)對COPD 合并感染患者不同預(yù)后的評估價值Table 4 the value of A1 mRNA and protein levels，IL?6，PSG?1 and other four indicators in evaluating different prognosis of COPD patients with infection

圖1 ROC 曲線圖Figure 1 ROC curve

3 討論

長期的支氣管哮喘、慢性支氣管炎，均能夠促進(jìn)COPD 的發(fā)生，在合并有基礎(chǔ)性的糖尿病或者其他代謝性疾病的患者中，COPD 合并感染的發(fā)生率可進(jìn)一步的上升［7］。臨床上COPD 合并感染的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊叨嗥鞴俟δ芩ソ叩陌l(fā)生，增加了COPD 患者致殘或者病死的風(fēng)險［8］?，F(xiàn)階段缺乏對于COPD 合并感染患者病情評估的血清學(xué)指標(biāo)，雖然降鈣素原能夠在COPD 合并感染的診療過程中發(fā)揮作用。但部分研究發(fā)現(xiàn)，采用降鈣素原評估COPD 合并感染患者病情的靈敏度較低，其評估患者病情的靈敏度不足35%，評估的假陽性率較低［9］。

PSGL?1 是中性粒細(xì)胞調(diào)控相關(guān)因子，其能夠通過募集下游中性粒細(xì)胞酶，促進(jìn)下游趨化因子的釋放，最終促進(jìn)炎癥反應(yīng)的播散；IL?6 是炎癥性相關(guān)因子，其不僅能夠參與到炎癥反應(yīng)過程中，同時IL?6 還能夠誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞的功能紊亂，加劇自然殺傷性T 淋巴細(xì)胞的毒性作用?；A(chǔ)方面的研究還顯示，IL?6 的上升能夠?qū)е路闻菅軆?nèi)皮細(xì)胞的損傷，增加了炎癥因子的擴(kuò)散風(fēng)險；膜聯(lián)蛋白A1 是炎癥調(diào)控因子，其對于下游粘附素的激活，能夠提高膜蛋白的結(jié)合程度，提高相關(guān)炎癥性因子對于肺泡上皮細(xì)胞的粘附和損傷程度。有研究者在對IL?6 的表達(dá)與COPD 患者的病情關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，合并感染的COPD 患者中，IL?6 的表達(dá)顯著上升［10］。

本文結(jié)果提示了PSGL?1、IL?6、膜聯(lián)蛋白A1 的高表達(dá)均能夠影響到COPD 患者感染的病情進(jìn)展。就其原因，是由于PSGL?1、IL?6、膜聯(lián)蛋白A1的下列方面的病理性損害有關(guān)［11］：①PSGL?1 的上升，能夠提高下游炎癥性信號通路NF?KB 的激活程度，促進(jìn)肺泡支氣管平滑肌細(xì)胞的炎癥性浸潤，最終促進(jìn)支氣管的痙攣和狹窄；②IL?6 的表達(dá)上升，能夠提高巨噬細(xì)胞的激活程度，促進(jìn)其對于肺泡間質(zhì)或者上皮細(xì)胞的損傷；③膜聯(lián)蛋白A1 能夠降低膜結(jié)合蛋白酶的穩(wěn)定性，導(dǎo)致其對于肺泡上皮細(xì)胞膜溶解程度的增加。任芳等［12］研究者也指出，合并感染的COPD 患者中，IL?6 的表達(dá)濃度會平均上升30%以上，且在重癥感染或者合并有其他組織器官感染的患者中，IL?6 的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的上升。對于膜聯(lián)蛋白A1 mRNA 的表達(dá)與COPD 患者臨床預(yù)后的關(guān)系分析也可見，在臨床預(yù)后較差的患者中，膜聯(lián)蛋白A1 mRNA 的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的上升，提示了相關(guān)指標(biāo)與COPD 患者臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系［13?14］。而進(jìn)一步的ROC 分析，則顯示這些指標(biāo)預(yù)測COPD 患者臨床轉(zhuǎn)歸/預(yù)后，均有比較好的應(yīng)用價值，其AUC，無論是多個指標(biāo)的聯(lián)合應(yīng)用，還是各個指標(biāo)的單獨(dú)應(yīng)用，都大于0.7。

綜上所述，在合并感染的COPD患者中，PSGL?1、IL?6、膜聯(lián)蛋白A1 及mRNA 均顯著上 升，同時PSGL?1、IL?6、膜聯(lián)蛋白A1 及mRNA 與COPD 患者的臨床預(yù)后密切相關(guān)。臨床上可以通過檢測PSGL?1、IL?6、膜聯(lián)蛋白A1 及mRNA，進(jìn)而預(yù)測COPD 患者的臨床轉(zhuǎn)歸情況。