lncRNA UCA1、VEGF、PKCα于腎上腺良惡性腫瘤中表達(dá)變化及與預(yù)后的關(guān)系

吳悠悠 任巧霞 徐柳汀

腎上腺腫瘤是常見泌尿外科腫瘤之一，具有良惡性之分，腎上腺惡性腫瘤具有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、包膜浸潤等多種生物學(xué)行為特點(diǎn)，受腎上腺組織學(xué)特性與解剖學(xué)特點(diǎn)影響，30%患者確診時已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，5年生存率僅約為44.0%，預(yù)后較差［1?2］。既往研究表明，長鏈非編碼RNA（long non?coding RNA，lncRNA）在結(jié)直腸癌［3］、膀胱癌［4］等多種腫瘤組織中均過度上調(diào)，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，已成為新的腫瘤標(biāo)志物的關(guān)注焦點(diǎn)，而尿路上皮相關(guān)基因（urothelial carcinoma antigen 1，UCA1）是與泌尿系統(tǒng)相關(guān)的lncRNA。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）參與病理血管生成、新生血管重塑等過程，在腫瘤病理進(jìn)程中起著重要作用。蛋白激酶Cα（Protein Kinase?α，PKCα）通過調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡過程，參與腫瘤的形成、發(fā)生及發(fā)展。既往研究顯示，lncRNA UCA1、VEGF、PKCα在腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤的鑒別診斷中均起著十分重要的作用［5?6］。然而關(guān)于lncRNA UCA1、VEGF、PKCα同時在腎上腺良惡性腫瘤患者中表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系研究較少。本研究嘗試探討lncRNA UCA1、VEGF、PKCα于腎上腺良惡性腫瘤中表達(dá)變化及與預(yù)后的關(guān)系，旨在為臨床診治、預(yù)測預(yù)后提供循證支持。詳情如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2014年1月至2018年5月本院腎上腺惡性腫瘤患者74 例為惡性組、良性腫瘤患者31 例為良性組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①兩組經(jīng)手術(shù)病理組織學(xué)檢查證實(shí)分別為惡性腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤、良性腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤；②術(shù)前均未接受放化療、激素治療；③研究對象均簽署知情同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝癌、腦膠質(zhì)瘤等其他部位惡性腫瘤者；②合并全身感染性疾病或自身免疫系統(tǒng)疾病者；③嚴(yán)重心腦血管疾病者；④凝血機(jī)制紊亂或存在活動性出血傾向者；⑤伴有嚴(yán)重心理障礙或精神行為異常者。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法

所有行手術(shù)治療切除的腎上腺良、惡性腫瘤患者入院手術(shù)時均留有病理組織（3 cm×3 cm），利用液氮迅速解凍組織，置于-80℃冰箱中待檢。采用上海欽誠生物科技有限公司實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法試劑盒測定組織中l(wèi)ncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 表達(dá)。

1.2.2 治療方法

腎上腺腫瘤患者行腹腔鏡手術(shù)治療。腎上腺惡性腫瘤患者手術(shù)切除腫瘤后4 周實(shí)施輔助治療或化療。

1.2 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)，計量資料以（±s）描述，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間用方差分析；計數(shù)資料用n（%）表示、χ2檢驗(yàn)；lncRNA UCA1、VEGF、PKCα相對表達(dá)量與惡性組病理特征的相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)系數(shù)模型；lncRNA UCA1、VEGF、PKCα相對表達(dá)量對腎上腺惡性腫瘤的鑒別效能分析采用受試者工作特征（ROC）曲線；lncRNA UCA1、VEGF、PKCα相對表達(dá)量與腎上腺惡性腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系采用卡普蘭?邁耶曲線（KM）分析，組間比較采用Log?rank 檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 相對表達(dá)量

惡性組lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 表達(dá)水平高于良性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 表達(dá)量比較（±s）Table 1 lncrna UCA1，VEGF，PKCα in 2 groups α Comparison of relative expression（±s）

表1 兩組lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 表達(dá)量比較（±s）Table 1 lncrna UCA1，VEGF，PKCα in 2 groups α Comparison of relative expression（±s）

組別惡性組良性組t 值P 值n 74 31 lncRNA UCA1 5.49±1.40 3.27±1.02 7.977<0.001 VEGF mRNA 3.49±1.10 1.98±0.75 6.984<0.001 PKCα mRNA 1.23±0.36 0.89±0.20 4.940<0.001

2.2 lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 之間相關(guān)性

經(jīng)Pearson 相關(guān)性分析可知，lncRNA UCA1（r=0.621、0.578，P<0.001）與VEGF、PKCαmRNA均呈正相關(guān)性，VEGFmRNA（r=0.591，P<0.001）與PKCαmRNA 呈正相關(guān)性。

2.3 惡性組不同病理特征患者lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 相對表達(dá)量

惡性組不同性別、年齡、腫瘤數(shù)目患者lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；惡性組不同腫瘤最大直徑、T分期、分化程度、有無包膜浸潤、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 惡性組不同病理特征患者lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 比較（±s）Table 2 lncRNA UCA1，VEGF and PKCα in patients with different pathological characteristics in malignant group α compare（±s）

表2 惡性組不同病理特征患者lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 比較（±s）Table 2 lncRNA UCA1，VEGF and PKCα in patients with different pathological characteristics in malignant group α compare（±s）

病理特征性別n lncRNA UCA1 VEGF mRNA PKCα mRNA男女44 30 t/值P 值年齡（歲）<60≥60 t 值P 值腫瘤最大直徑（cm）<5≥5 t 值P 值腫瘤數(shù)目單發(fā)多發(fā)t 值P 值T 分期T1期T2期T3+T4期F 值P 值分化程度高分化中分化低分化F 值P 值包膜浸潤5.61±1.49 5.31±1.65 0.814 0.418 3.56±1.02 3.39±0.96 0.721 0.473 1.29±0.31 1.14±0.40 1.815 0.074 49 25 5.33±1.35 5.80±1.27 1.446 0.153 3.36±1.12 3.74±1.24 1.331 0.187 1.20±0.36 1.27±0.33 0.813 0.419 33 41 4.36±1.29 6.40±1.33 6.647<0.001 2.77±0.86 4.07±1.05 5.730<0.001 0.96±0.27 1.45±0.42 5.802<0.001 32 42 5.18±1.56 5.73±1.09 1.785 0.079 3.27±1.04 3.66±1.20 1.466 0.147 1.21±0.37 1.25±0.32 0.498 0.620 22 32 20 4.08±1.25 5.27±1.59 7.39±2.03 22.012<0.001 2.12±0.77 3.49±0.96 5.00±1.04 50.100<0.001 0.97±0.26 1.24±0.20 1.50±0.15 33.905<0.001 31 19 24 3.97±1.34 5.28±1.66 7.62±2.39 27.413<0.001 2.25±0.74 3.67±0.82 4.95±0.98 69.737<0.001 0.92±0.30 1.33±0.25 1.55±0.19 42.908<0.001有無35 39 t 值P 值遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移6.32±1.42 4.75±1.17 5.211<0.001 4.76±0.92 2.35±0.73 12.543<0.001 1.49±0.38 1.00±0.27 6.444<0.001有無38 36 t 值P 值6.55±1.59 4.37±1.28 6.475<0.001 4.29±1.03 2.65±0.84 7.482<0.001 1.51±0.34 0.93±0.28 7.986<0.001

2.3 lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 相對表達(dá)量與惡性組病理特征的相關(guān)性

經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析可知，lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 與惡性組腫瘤最大直徑、T 分期、包膜浸潤、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性，與分化程度呈負(fù)相關(guān)性（P<0.05）。見表3。

表3 lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 相對表達(dá)量與惡性組病理特征的相關(guān)性Table 3 lncrna UCA1，VEGF，PKCα Correlation between relative expression and pathological features of malignant group

2.4 lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 相對表達(dá)量對腎上腺惡性腫瘤的鑒別效能

繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 及三者聯(lián)合鑒別腎上腺惡性腫瘤的曲線下面積（AUC）分別為0.833、0.865、0.721、0.907。見圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

2.5 lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 相對表達(dá)量與腎上腺惡性腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系

以圖4中l(wèi)ncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 最佳截斷值為界限，將患者分為lncRNA UCA1低表達(dá)（≤4.55）、高表達(dá)（>4.55）、VEGFmRNA 低表達(dá)（≤3.19）、高表達(dá)（>3.19）和PKCαmRNA 低表達(dá)（≤1.07）、高表達(dá)（>1.07）患者。采用K?M法進(jìn)行分析，顯示lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 高表達(dá)患者3年生存率低于低表達(dá)患者（χ2=4.638，P=0.031；χ2=4.728，P=0.039；χ2=7.050，P=0.008）。見圖2。

圖2 lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 相對表達(dá)量與腎上腺惡性腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系Figure 2 lncRNA UCA1、VEGF、PKCα Relationship between relative expression and prognosis of patients with adrenal malignant tumor

3 討論

lncRNA UCA1在腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、凋亡、新陳代謝、耐藥等方面起著重要調(diào)控作用。孫青風(fēng)等［7］通過52例腎上腺癌患者手術(shù)切除的腎上腺癌組織及配對癌旁組織標(biāo)本表明，lncRNA UCA1在腎上腺癌組織中顯著上調(diào)，其相對表達(dá)水平與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移和分期有關(guān)，這與本研究觀點(diǎn)相似。推測lncRNA UCA1對腎上腺惡性腫瘤患者預(yù)后亦具有一定預(yù)測價值。

VEGF 主要產(chǎn)生于腫瘤自身分泌及其相關(guān)基質(zhì)，可提高腫瘤血管滲透性，持續(xù)蓄積血漿蛋白外滲和纖維蛋白［8］，大量研究已證實(shí)［9?10］，新基質(zhì)和新血管形成是腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)。本研究結(jié)果與賀亮亮［11］觀點(diǎn)相似。說明VEGF 過度高表達(dá)可能參與腎上腺惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，推測VEGF 可能通過促進(jìn)血管生成，提高血管壁滲透性，從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、浸潤等。另外，杜學(xué)謙等［12］經(jīng)COX 法分析可知，VEGF 高表達(dá)是影響腎上腺腫瘤患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險因素。本研究經(jīng)K?M 曲線分析，腎上腺惡性腫瘤VEGFmRNA 高表達(dá)者3年生存率低于低表達(dá)者，提示VEGF 高表達(dá)可能預(yù)示腎上腺惡性腫瘤患者不良預(yù)后。

PKC 為G 蛋白和酪氨酸激酶介導(dǎo)的細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑中重要信號因子，可介導(dǎo)多種促癌基因信號，PKCα 是傳統(tǒng)型PKC，在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中扮演著重要角色［13］。本研究指出，PKCαmRNA 在腎上腺惡性腫瘤患者中呈異常高表達(dá)，并與腫瘤最大直徑、T 分期、包膜浸潤、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度均存在一定相關(guān)性，結(jié)合張昊等［14］、姜媛等［15］研究考慮機(jī)制可能在于PKC 下游分子P38 信號通路活化，誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶?9 異常高表達(dá)，促進(jìn)惡性腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移。推測抑制PKCα 表達(dá)可能成為一個潛在防治腎上腺惡性腫瘤的靶點(diǎn)。另外，本研究經(jīng)Log?Rank 檢驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，PKCαmRNA 高表達(dá)可能降低腎上腺惡性腫瘤患者3年生存率，這可能歸因于PKCα 表達(dá)升高通過抑制細(xì)胞黏附連接，阻斷9?4 整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的半橋粒形成，防止細(xì)胞基質(zhì)連接，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞活性與侵襲力，誘導(dǎo)腫瘤遷移、侵襲，進(jìn)而上調(diào)患者死亡風(fēng)險。然而lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 單一鑒別腎上腺惡性腫瘤存在一定局限性，敏感性較低，故本研究嘗試?yán)L制聯(lián)合ROC 曲線，結(jié)果顯示，lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA 聯(lián)合鑒別腎上腺惡性腫瘤的AUC 優(yōu)于上述指標(biāo)單一鑒別，敏感性、特異性均有所提升。提示聯(lián)合檢測lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 有助于提高鑒別效能。

綜上所述，lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 在腎上腺惡性腫瘤中呈高表達(dá)，聯(lián)合檢測可為臨床鑒別腎上腺腫瘤良惡性、評估腫瘤惡性程度、預(yù)測預(yù)后提供科學(xué)指導(dǎo)。但本研究樣本量小，lncRNA UCA1、VEGF、PKCα 能否成為腎上腺腫瘤治療的靶位點(diǎn)，還需設(shè)計更為完善的實(shí)驗(yàn)方案深入分析上述指標(biāo)對腎上腺腫瘤的調(diào)控機(jī)制。