消痔洗劑提取工藝研究

丁美林 宗陽(yáng) 徐玲玲 周建華 蔣勇 江建國(guó)

【摘要】目的：優(yōu)選消痔洗劑的提取工藝，為該制劑制備工藝提供參考。方法：采用揮發(fā)油測(cè)定法，提取魚(yú)腥草揮發(fā)油，通過(guò)單因素考察試驗(yàn)，優(yōu)選魚(yú)腥草提取工藝。以君藥中鹽酸小檗堿的含量、干膏率的綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法，考察水提取最佳工藝。結(jié)果：魚(yú)腥草揮發(fā)油最佳提取工藝為：加入14倍量的水，浸泡2h，提取5h。水提取最佳工藝為：加入12倍量的水，浸泡1.5h，提取1.5h，煎煮2次。結(jié)論：該提取工藝穩(wěn)定、合理、可行，適用于消痔洗劑的制備。

【關(guān)鍵詞】消痔洗劑;揮發(fā)油;鹽酸小檗堿;正交試驗(yàn)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R94【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）18-0042-05

Study on Extraction Technology of Xiaozhi LotionDING Meilin1ZONG Yang2XU Lingling3ZHOU Jianhua1JIANG Yong1JIANG Jianguo1*

1.Rudong County Hospital of Traditional Chinese Medicine，Rudong 226400，China;

2.Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Suzhou 215000，China;

3.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200120，ChinaAbstract：Objective To optimize the extraction process of Xiaozhi Lotion，and to provide reference for the preparation process of this preparation.Methods The volatile oil of Houttuynia cordata was extracted by the determination of volatile oil，and the extraction process was optimized by single factor test. With the content of berberine hydrochloride and the comprehensive score of dry paste rate as evaluation indexes，orthogonal extraction was used to investigate the optimal process of water extraction.Results The optimal extraction process of volatile oil from Houttuynia cordata was as follows：adding 14 times amount of water，soaking for 2h and extracting for 5h. The optimal process of water extraction was as follows：adding 12 times of water，soaking for 1.5 h，extracting for 1.5 h，decocting for 2 times.Conclusion The extraction process is stable，reasonable and feasible. It is suitable for the preparation of Xiaozhi lotion.

Keywords：Xiaozhi Lotion; Volatile Oil; Berberine Hydrochloride;Orthogonal Extraction

消痔洗劑為江蘇省如東中醫(yī)院的外用經(jīng)驗(yàn)方，由黃柏、虎杖、敗醬草、魚(yú)腥草等六味藥組成，具有清熱利濕解毒、散瘀止痛、去腐消腫的功效，臨床用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面疼痛、出血、肛緣水腫、創(chuàng)面恢復(fù)。經(jīng)多年臨床應(yīng)用并驗(yàn)證，該洗劑使用方便、療效良好，尚未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，年使用量大于12000瓶。方中黃柏為君藥，魚(yú)腥草為臣藥?，F(xiàn)代藥理研究[1-3]表明黃柏對(duì)皮膚有抗菌、抗炎、抗氧化等作用，其中鹽酸小檗堿抗炎作用研究較多。魚(yú)腥草揮發(fā)油是發(fā)揮抗炎、抗菌作用重要成分[4-5]。

研究根據(jù)《中國(guó)藥典》（2020年版）四部項(xiàng)下?lián)]發(fā)油測(cè)定法[6]，以揮發(fā)油提取體積、提取量為考察指標(biāo)，通過(guò)單因素考察，確定魚(yú)腥草揮發(fā)油最佳提取工藝。水提取工藝提取，根據(jù)處方分析以君藥黃柏中鹽酸小檗堿為指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法（HPLC）法結(jié)合正交試驗(yàn)，以鹽酸小檗堿含量、干膏率的綜合評(píng)價(jià)為指標(biāo)，考察加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)對(duì)消痔洗劑指標(biāo)成分含量的影響，優(yōu)選出最佳提取工藝，以期為醫(yī)院制劑的質(zhì)量控制和制備工藝提供參考。

1儀器與材料

1.1儀器LC-20AT島津高效液相色譜儀（日本島津公司）;AE-240電子分析天平（上海賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;QCD3120超聲波清洗器（天津旗美科技有限公司）;HN101-1A鼓風(fēng)干燥箱（南通滬南科學(xué)儀器有限公司）;HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國(guó)宇儀器制造有限公司）。

1.2材料鹽酸小檗堿（批號(hào)：110713-202015，中國(guó)食品藥品鑒定研究院）。高效液相色譜所用試劑為色譜純，水為去離子水，其他試劑為分析純。所用中藥飲片均購(gòu)自南通市三越飲片有限公司，并由本院主任中藥師鑒定。

2方法與結(jié)果

2.1魚(yú)腥草揮發(fā)油的提取

2.1.1浸泡時(shí)間與吸水率的考察稱(chēng)取處方量藥材2份，置于燒杯中，分別加入12倍量的水，用保鮮膜封住燒杯口，分別在室溫下靜置0.5、1、1.5、2、2.5、3 h，并稱(chēng)量重量，每次分別倒出被藥材吸收剩下的藥液體積，計(jì)算吸水率[7]，最終確定藥材的浸泡時(shí)間為2 h，藥材吸水率為393%。

2.1.2加水量的考察取4份藥材，分別加入10、12、14、16倍處方量水，浸泡2 h后，加熱提取5 h，收集揮發(fā)油，計(jì)算揮發(fā)油提取率，確定加水量為14倍處方量。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.1.3提取時(shí)間的考察取4份藥材，分別加入14倍處方量水，浸泡2 h后，分別加熱提取揮發(fā)油3、4、5、6 h，收集揮發(fā)油，計(jì)算魚(yú)腥草揮發(fā)油提取率，確定提取時(shí)間為5 h。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.1.4驗(yàn)證試驗(yàn)對(duì)魚(yú)腥草浸泡時(shí)間、加水量、提取時(shí)間進(jìn)行考察，最終確定魚(yú)腥草揮發(fā)油提取工藝，即加入14倍處方量的水，浸泡2 h，提取5h。按照確定最佳提取工藝，稱(chēng)取3份魚(yú)腥草平行操作，結(jié)果表明此工藝合理可行，具有較好的穩(wěn)定性。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.2水提取工藝優(yōu)選

2.2.1浸泡時(shí)間與吸水率的考察稱(chēng)取處方量藥材，置于燒杯中，分別加入7倍量的水，用保鮮膜封住燒杯口，分別在室溫下靜置0.5、1、1.5、2、2.5、3 h，量取體積，稱(chēng)取重量，計(jì)算吸水率，最終確定浸泡時(shí)間為1.5 h，藥材吸水率為156%。

2.2.2溶液配制對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿10.26 mg，用流動(dòng)相溶液定容于10 mL容量瓶，即得。

供試品溶液的制備：按處方量稱(chēng)取藥材，加入8倍量的水，浸泡2 h，煎煮1 h后，精密吸取10 mL提取液，水浴蒸干后，用流動(dòng)相定容10 mL容量瓶中，即得。

陰性供試品溶液的制備：按處方量稱(chēng)取除黃柏外的藥材，按“供試品溶液”項(xiàng)下的方法制備，即得。

2.2.3色譜條件色譜柱：Inertrustain C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（每100 mL加入十二烷基硫酸鈉0.1 g），柱溫30 ℃，流速1 mL/min;對(duì)照品進(jìn)樣量5 μL，供試品進(jìn)樣量20 μL。

2.2.4專(zhuān)屬性分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺黃柏的陰性供試品溶液，按色譜條件進(jìn)樣分析，陰性供試品溶液在對(duì)照品相應(yīng)位置無(wú)吸收，表明鹽酸小檗堿無(wú)陰性干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2.5線(xiàn)性關(guān)系考察精密量取適量的對(duì)照品溶液，加入流動(dòng)相進(jìn)行稀釋至123.39、105.76、83.76、70.51、52.88、32.25、17.63 μg/mL的濃度對(duì)照品溶液。分別吸取各濃度的對(duì)照品溶液5μL，注入高效液相色譜儀中測(cè)定。得到現(xiàn)性方程為y=2440.76x+44273，（r=0.999），鹽酸小檗堿在17.63～123.39 μg/mL間現(xiàn)性關(guān)系良好。

2.2.6精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液，按色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，重復(fù)測(cè)定6次，以峰面積計(jì)算，RSD為0.06%，表明儀器精密度良好。

2.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，按“供試品溶液”制備方法平行制備6份，按色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)定鹽酸小檗堿含量的RSD為0.91%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h分別進(jìn)樣，測(cè)定色譜峰面積，RSD為0.11%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.9加樣回收率精密吸取已知含量的同一批供試品溶液共6份，加入適量鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，按“供試品溶液”制備方法制備供試品溶液，測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，平均回收率為101.98%，RSD為1.59%（n=6）。

2.3正交試驗(yàn)試驗(yàn)根據(jù)臨床用藥方法，確定采用水提方法進(jìn)行提取，影響水提主要因素為A加水量（倍）、B煎煮時(shí)間（h）、C煎煮次數(shù)（次）。采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選最佳提取工藝參數(shù)。因素與水平見(jiàn)表4，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析見(jiàn)表6。

分析表明，在中藥水提過(guò)程中，煎煮時(shí)間為顯著性影響因素（P<0.05），可根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整。因此本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明正交試驗(yàn)優(yōu)選的最佳提取工藝為A3B2C2，即加12倍量的水，煎煮1.5h，提取2次。

2.4驗(yàn)證試驗(yàn)稱(chēng)取與正交試驗(yàn)等量飲片3份，按優(yōu)選的提取工藝提取，結(jié)果見(jiàn)表7，表明優(yōu)化水提工藝提取率較高，工藝穩(wěn)定。

3討論

肛腸疾病的基本病因病機(jī)一般受風(fēng)濕熱燥等外邪的作用、情志內(nèi)傷、飲食起居等因素的影響，濕熱下注于大腸，經(jīng)絡(luò)阻滯，氣血不暢，淤血濁氣留滯肛門(mén)大腸而衍生諸多病癥[8-9]。西醫(yī)治療多采用高錳酸鉀等坐浴方式，但治療效果并不理想[10]。消痔洗劑為如東縣中醫(yī)院肛腸科臨床經(jīng)驗(yàn)方，具有清熱利濕解毒、散瘀止痛、去腐消腫等功效，臨床上有消除痔瘡炎癥腫脹脫出、嵌頓、抗菌等作用，促進(jìn)痔瘡術(shù)后創(chuàng)面愈合作用，臨床使用超過(guò)十年，臨床研究[11-12]表明患者使用效果良好，值得應(yīng)用推廣，表明該制劑制備工藝可以深入開(kāi)發(fā)。

采用單因素試驗(yàn)考察揮發(fā)油提取工藝時(shí)，曾考察魚(yú)腥草、敗醬草、魚(yú)腥草和敗醬草三組揮發(fā)油提取，在實(shí)驗(yàn)的1 h內(nèi)可清晰看到魚(yú)腥草黃色揮發(fā)油，而敗醬草在實(shí)驗(yàn)的4 h后看到少量的聚集物顯紅色，且聚集物呈白色無(wú)定形粉末狀漂浮于油面，敗醬草的揮發(fā)性成分極其少。魚(yú)腥草和敗醬草共同提取得到棕紅色的揮發(fā)油且油內(nèi)夾雜著白色無(wú)定形粉末。實(shí)驗(yàn)采用的敗醬草為黃花敗醬草，現(xiàn)代研究[13]表明，黃花敗醬草雖含揮發(fā)性成分，但未發(fā)現(xiàn)相關(guān)大量的研究敗醬草中揮發(fā)油，且藥理作用尚未清晰，加之黃花敗醬草提取出難容于水油的白色粉末狀物質(zhì)[14]，為不影響后期的實(shí)驗(yàn)研究，本實(shí)驗(yàn)去除黃花敗醬草的揮發(fā)性成分提取。最終確定魚(yú)腥草揮發(fā)油提取工藝加入14倍量的水，浸泡2 h，提取5 h，該工藝合理可行。

黃柏為方中君藥，具有瀉火解毒，清熱燥濕，除骨蒸、退虛熱等功效，其化學(xué)成分主要有生物堿類(lèi)、酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、多糖類(lèi)等，具有抗菌、抗炎、消腫、止痛等藥理作用[15-16]。水提工藝考察過(guò)程中，根據(jù)處方分析，將君藥黃柏中鹽酸小檗堿、干膏率作為考察指標(biāo)[17-18]，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。參照文獻(xiàn)[19-20]對(duì)色譜條件多次考察，最終確定色譜條件參照2020版《中國(guó)藥典》一部黃柏項(xiàng)下含量測(cè)定[21]，實(shí)驗(yàn)表明該色譜條件分離度良好，陰性供試品對(duì)本法測(cè)定無(wú)干擾。最終確定水提工藝為加入12倍量的水，浸泡1.5 h，提取1.5 h，煎煮2次，該工藝穩(wěn)定可行。

綜上所述，消痔洗劑的提取工藝分兩步提取。第一步考察魚(yú)腥草揮發(fā)油提取工藝，由于魚(yú)腥草揮發(fā)油抗菌抗炎活性較好[22-23]，增強(qiáng)消痔洗劑抗菌抗炎效果，將魚(yú)腥草揮發(fā)油充分得到應(yīng)用。第二步考察魚(yú)腥草藥渣、黃柏、虎杖、芒硝、敗醬草等中藥的提取工藝，采用水提工藝合理可行。結(jié)果表明消痔洗劑提取工藝合理穩(wěn)定可行，后續(xù)開(kāi)發(fā)將繼續(xù)按照外用中藥洗劑的要求，結(jié)合現(xiàn)代化技術(shù)對(duì)該洗劑進(jìn)一步考察開(kāi)發(fā)。

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基金項(xiàng)目：

作者簡(jiǎn)介：丁美林（1993-），女，漢族，碩士研究生，中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┭芯俊-mail：18621831936@163.com

通信作者：江建國(guó)（1972-），男，漢族，本科，主任中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┭芯?。E-mail：1621576957@qq.com