鐵皮石斛多糖軟膏制備工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

朱朋艷 喬妙 劉海楊 張瑩霜 朱強強 袁文娟 王宣軍

【摘要】目的：制備鐵皮石斛多糖軟膏并建立其質(zhì)量控制方法。方法：以鐵皮石斛多糖濃縮粉為主藥，PEG400和PEG3350為基質(zhì)，薄荷腦，苯氧乙醇等為輔料采用水包油的方法制備軟膏。紫外分光光度法建立鐵皮石斛多糖的含量方法，采用加速試驗和長期試驗進一步考察其穩(wěn)定性。結(jié)果：確定鐵皮石斛多糖軟膏的最佳制備工藝，PEG400和PEG3350的比例為2∶1時，軟膏的黏度最佳，易于涂展;多糖含量在20～100μg/mL呈良好的線性關(guān)系，回歸方程y=0.0101x+0.0971（r2=0.9997），平均回收率為107.8%，RSD=2.1%。該軟膏在高溫、高濕、強光下均具有良好的穩(wěn)定性。結(jié)論：該軟膏制備工藝簡便可行，穩(wěn)定性良好，可用于鐵皮石斛多糖軟膏的制備;建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)專屬性強，重復(fù)性好，可作為該軟膏的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】鐵皮石斛多糖;軟膏;制備工藝;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號】R285【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2021）18-0026-05

Study on Development and Quality Standard of Dendrobium Candidum Polysaccharide OintmentZHU Pengyan1，3QIAO Miao1，3LIU Haiyang2ZHANG Yinshuang2ZHU Qiangqiang3YUAN Wenjuan1，2*WANG Xuanjun1，2

1.Key laboratory of Puer Tea Science，Ministry of Education，Yunnan Agricultural University，Kunming 650201，China;

2.College of Science，Yunnan Agricultural University， Kunming 650201，China;

3.College of Food Science and Technology，Yunnan Agricultural University，Kunming 650201，ChinaAbstract：Objective To prepare Dendrobium candidum polysaccharide （DOP） ointment and establish its quality standard. Methods The ointment was prepared by oil in water method with Dendrobium officinale polysaccharide concentrated powder as main drug，PEG400 and PEG3350 as matrix，menthol and phenoxyethanol as excipients. The content of DOP in ointment was determined by UV. The stability of DOP ointment was further investigated by the accelerated test and long-term test.Results The optimum preparation technology of DOP ointment was determined. When the ratio of PEG400 and PEG3350 was 2∶1，the viscosity of the ointment was the best and easy to spread. The DOP content showed a good linear relationship in the range of 20～100μg/mL，and the regression equation was y=0.0101x+0.0971（r2=0.9997）. The average recovery was 107.8%，RSD was 2.1%. The ointment had good stability under high temperature，high humidity and strong light irradiation.Conclusion The optimized process of the DOP ointment was simple and feasible; the quality standard of the DOP ointment is specific and controllable.

Keywords：Dendrobium candidum polysaccharide （DOP）;Ointment; Preparation Process; Quality Standard

鐵皮石斛是蘭科草本植物，集藥用、食用、美容于一身的名貴中藥材，可單方和配伍使用，與“雪蓮、人參、首烏、茯苓、野靈芝、珍珠、冬蟲夏草、蓯蓉”并稱為中華九大仙草[1]，主要分布在我國安徽、浙江、福建、云南等地[2]。目前，鐵皮石斛收載于《中國藥典》2020年版一部，具有益胃生津，滋陰清熱之功效。用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟[4-5]。文獻[3]報道其主要成分包括多糖、生物堿、聯(lián)芐類、菲類化合物、黃酮類物質(zhì)、氨基酸及微量元素等，其中鐵皮石斛多糖類物質(zhì)占41.1%[6]，除了增強免疫力和抗腫瘤作用外[7-8]，還具有清除自由基和抗脂質(zhì)過氧化作用[9]、保濕[10]以及抑菌消炎等護膚功效[11]，可用于化妝品的開發(fā)[12-14]。

軟膏劑是皮膚科常用制劑之一，具有良好的附著性、涂展性，使用方便，安全可靠[15]。本文利用鐵皮石斛多糖為原料，以PEG400和PEG3350為基質(zhì)，制備含鐵皮石斛多糖的軟膏，建立其質(zhì)量控制方法，并對藥物的穩(wěn)定性進行了考察，為鐵皮石斛多糖應(yīng)用于化妝品提供前期基礎(chǔ)。

1儀器與材料

1.1材料鐵皮石斛多糖（批號20190427，實驗室自制）、PEG400（山東優(yōu)索化工科技有限公司）、PEG3350（北京索萊寶科技有限公司）、硬脂醇（化妝品級）、甘油（北京索萊寶科技有限公司）、無水葡萄糖（分析純）、苯酚（分析純）、濃硫酸（分析純 重慶川東化工有限公司）、三乙醇胺（分析純）、苯氧乙醇（日化級）、薄荷油（日化級）;其他輔料均為藥用規(guī)格或分析純。

1.2儀器HITACHI/U-2910紫外分光光度計（天美中國科學(xué)儀器有限公司），PHS-2F型pH計（上海力辰儀器科技有限公司），HH-ZK4恒溫水浴鍋（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司），BSA224S-CW電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司），SIGR/3-18KS離心機（北京科譽興業(yè)科技發(fā)展有限公司），KBF-P240恒溫恒濕箱（德國BINDER）。

2方法與結(jié)果

2.1軟膏劑所用基質(zhì)配比的研究

2.1.1外觀性狀檢測標(biāo)準(zhǔn)軟膏劑應(yīng)均勻，細膩，具有適當(dāng)?shù)酿こ硇?，宜涂布于皮膚上或黏膜上并且無刺激性。均勻性是指取軟膏約1g，置于表面光潔的玻璃板中間，小心再蓋上同樣大小的玻璃板，夾緊四周，對著日光觀察，應(yīng)無顆粒狀，色澤均勻、細膩。

2.1.2pH值測定將1g軟膏稀釋至10mL去離子水中，用PHS-2F型pH計測量pH值。根據(jù)中國藥典二部附錄ⅥH規(guī)定的乳劑型基質(zhì)pH要求，W/O型乳劑基質(zhì)pH應(yīng)小于8.5，由于此次配制的鐵皮石斛軟膏劑用于體表的涂抹，其基質(zhì)pH值應(yīng)與人體組織液pH值（7.0～7.4）相符合，故進行軟膏劑配方篩選pH值應(yīng)控制在7.0 ～ 7.4內(nèi)。

2.1.3黏度測定使用NDJ-1型旋轉(zhuǎn)黏度計，檢測軟膏劑的黏度。鐵皮石斛多糖軟膏用體表的涂抹，適宜黏度控制在102～105mpas范圍內(nèi)。

2.1.4軟膏基質(zhì)配比選擇改變PEG400和PEG3350的配比，按“2.2”項下軟膏劑的制備方法制備。按上述檢測方法檢測軟膏劑的各項指標(biāo)。由表1所給出各組軟膏劑各項指標(biāo)結(jié)果，可知當(dāng)兩者比例為2∶1時，軟膏黏度適宜，易于涂抹，因此確定該比例用于軟膏的制備。

2.2軟膏的制作主藥：鐵皮石斛多糖濃縮粉;油相：PEG3350、PEG400、硬脂醇;水相：甘油、0.1%苯氧乙醇、0.02%三乙醇胺、0.5%薄荷腦、純化水（自制）。在70℃恒溫水浴條件下，將油相緩慢的加入水相中，以乳化機均質(zhì)乳化1h后，以少量多次的方式加入鐵皮石斛多糖濃縮粉，攪拌至多糖完全溶解，充分攪拌均勻，紫外滅菌2h分裝，即得，成品如圖1所示。所得多糖軟膏，質(zhì)地細膩，涂展性好，稠度適宜，氣味清香。

2.3軟膏多糖含量的測定

2.3.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖0.0010g至10mL容量瓶中，加水定容至刻度，制成100μg/mL溶液儲備液。分別精密量取對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置于具塞試管中，各自加水補至1mL，精密加入1mL 5%苯酚（現(xiàn)配現(xiàn)用），搖勻，再精密加入5mL濃硫酸，搖勻，置沸水浴30min，取出放至室溫，于488nm波長測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.0101x+0.0971，r2=0.9997。如圖2所示測定的吸光度與葡萄糖濃度呈良好的線性關(guān)系。圖1鐵皮石斛多糖軟膏成品圖

2.3.2穩(wěn)定性試驗取本品約1g（批號：20201223），精密稱定，于25mL量瓶中，分別加乙醇20mL，使完全溶解，加水定容至刻度，冷藏30min 后，全部置于離心管中，10000rpm離心20min，小心棄去上清液，沉淀加水溶解后，少量多次轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶加水定容至刻度，搖勻;精密量取1mL置于具塞試管中，精密加入1mL 5%苯酚（現(xiàn)配現(xiàn)用），搖勻，再精密加入5mL濃硫酸，搖勻，置沸水浴30min，取出，放冷至室溫，置紫外分光光度計488nm 波長測定吸光度值。結(jié)果RSD為3.4%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表2。

2.3.3重復(fù)性試驗分別同一批號軟膏樣品（批號20201223）約1.000g，6份，精密稱定，置25mL容量瓶中，分別加乙醇20mL，使完全溶解，其余操作同“2.3.2”項下，置紫外分光光度計488nm波長測定吸光度值;計算DOP多糖含量平均值為4.7mg/g;RSD為4.37%（n=6），重復(fù)性實驗符合要求。結(jié)果見表3。

2.3.4回收率試驗取同一批號軟膏樣品（批號：20201223）約0.500g，6份，精密稱定，置25mL容量瓶中，精密加入1mg/mL葡萄糖對照品溶液（2.5mL），氮氣流下吹干，加20mL乙醇，使完全溶解，其余操作同“2.3.2”項下，置紫外分光光度計488nm 波長測定吸光度值;測得DOP多糖平均含量為107.8%，RSD為2.09%（n=6）表明該法回收率較好，符合要求。其結(jié)果見表4。

2.4軟膏的穩(wěn)定性考察

2.4.1加速試驗取3批鐵皮石斛多糖軟膏樣品（批號：20201103、20201107、20201113）置于恒溫恒濕加速箱中，分別進行高溫（60±2℃）、高濕（相對濕度90%±5%）和強光照射試驗（人工光源;強度：4500±500lx），于0 d、5 d、10 d取樣進行測定DOP多糖含量測定。如圖3所示，測定結(jié)果表明在高溫、強光、高濕條件下，鐵皮石斛多糖軟膏中的含量無明顯差異，表明該軟膏具有較好的穩(wěn)定性。

2.4.2長期試驗穩(wěn)定實驗制備3批鐵皮石斛多糖軟膏（批號：20201103、20201107、20201113）置于恒溫恒濕箱中進行加速試驗，溫度為30 ±2 ℃、相對濕度為65%±5%放置3個月，于0d、30d、60d取樣測定DOP含量，結(jié)果表明在該實驗條件下，含量測定結(jié)果無明顯差異，表明軟膏該較穩(wěn)定。其結(jié)果如圖4所示。

3討論

本研究以制劑外觀性狀、穩(wěn)定性、pH、黏度及有效成分含量等作為考察指標(biāo)，對制劑工藝的輔料等進行篩選，得到DOP軟膏的最佳制備工藝條件;繼而采用加速實驗及穩(wěn)定性實驗考察制備所得軟膏的穩(wěn)定性。

3.1檢測波長的確定鐵皮石斛多糖在濃硫酸的作用下，水解、脫水成糖醛衍生物，與苯酚縮合成有色化合物，在488nm處有最大吸收，吸收度與濃度成線性關(guān)系，可用于定量測定。

3.2基質(zhì)的選擇制備鐵皮石斛多糖軟膏時，考慮以PEG為基質(zhì)的軟膏成分簡單，且操作方便。PEG穩(wěn)定、不易變質(zhì)，即使在高溫狀態(tài)也較穩(wěn)定，且是良好的保濕劑。PEG3350水溶性好，比傳統(tǒng)的油脂基質(zhì)刺激小;且石斛多糖在這兩種基質(zhì)中有較好的溶解度;選用這兩種基質(zhì)制作的軟膏具有良好的附著性、涂展性，使用方便，安全可靠。

3.3pH的確定研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)多糖軟膏pH在6～8之間時，多糖含量具有較好的穩(wěn)定性。pH較低或較高時，DOP含量會隨之降低;考慮在酸性條件下，多糖容易發(fā)生水解反應(yīng);在堿性條件下，多糖可能存在烯醇化、異構(gòu)化反應(yīng)。且此次制備的鐵皮石斛軟膏用于體表的涂抹，其pH應(yīng)與人體組織液的pH相近，因此，研究加入三乙醇胺調(diào)節(jié)軟膏pH至7.0～7.5之間。

鐵皮石斛多糖軟膏最初的成品存在DOP分散不勻、顆粒較粗的現(xiàn)象，直接影響藥物的吸收效果。故在制備時將DOP加少量乙醇溶解后配制，取得了較好的效果。成品均勻、細膩、無顆粒感。在處方中加入甘油起保濕作用，同時也有一定的防腐作用，保證了藥品質(zhì)量。此次研究制備的鐵皮石斛多糖軟膏，提供一種抑菌、抗氧化的護膚軟膏，便于人們使用;并以鐵皮石斛多糖含量作為此軟膏劑的質(zhì)量檢測指標(biāo)，采用分光光度法對其進行含量測定，快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為鐵皮石斛軟膏質(zhì)量控制提供了有效的方法。

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基金項目：國家自然科學(xué)基金（32060084），云南省應(yīng)用基礎(chǔ)面上項目（2019FB119）。

作者簡介：朱朋艷（1995-），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向為功能食品研究。E-mail：zhupengyan16@163.com

通信作者：袁文娟（1979-），女，漢族，博士，副主任藥師，研究方向為食品藥品研究。E-mail：1435648569@qq.com