糖周靈膠囊對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠下肢神經(jīng)機(jī)械痛閾的影響

晏和國(guó) 侯建婷 尹朝蘭 楊博 陳婉麗 李軍

【摘要】目的：糖周靈膠囊對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠下肢神經(jīng)機(jī)械痛閾的影響。方法：將60只雄性SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和造模組，其中正常組（10只），造模組分為糖尿病組、糖周靈小劑量組、中劑量組、高劑量組、維生素c組各10只;造模成功后，糖周靈小劑量組以糖尿病0.44g/（kg·d）給藥;中劑量組按0.88g/（kg·d）給藥;大劑量組按1.75g/（kg·d）給藥，維生素C組按0.05g/（kg·d）給藥，糖尿病組及對(duì)照組給予等量蒸餾水，給藥時(shí)間為16周，16周后用Von Frey測(cè)量?jī)x測(cè)定機(jī)械痛閾值，觀(guān)察糖周靈膠囊對(duì)糖尿病大鼠下肢神經(jīng)機(jī)械痛閾的影響。結(jié)果：正常對(duì)照組與維生素C組存在明顯差異（P<0.05）;正常對(duì)照組、模型組與小劑量組存在明顯差異（P<0.01）;模型組與小劑量組、中劑量組、大劑量組存在顯著差異（P<0.01），與維C組相比，糖周靈小、中、大劑量組存在明顯差異（P<0.05），與糖周靈大劑量相比，糖周靈小、中劑量無(wú)明顯差異（P<0.05）。結(jié)論：糖尿病模型組機(jī)械痛閾值最低，糖周靈糖周靈膠囊一定程度上可以提高糖尿病大鼠機(jī)械痛閾值，改善糖尿病神經(jīng)病變神經(jīng)功能，對(duì)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變具有一定保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】糖周靈膠囊;糖尿病;機(jī)械痛閾值

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）18-0012-04

Effects of? Tangzhouling Capsule on Stz-induced Neuromechanical Pain Threshold in Lower Extremity of Diabetic RatsYAN Heguo1HOU Jianting2YIN Chanlan1YANG Bo1CHEN Wangli1LI Jun2*

1.Zhaotong hospital of traditional Chinese medicine，Zhaotong 657000，China;

2.Kunming hospital of traditional Chinese medicine，Kunming 650011，ChinaAbstract：Objective to study the effects of tangzhouling capsule on stz-induced neuromechanical pain threshold in lower extremity of diabetic rats.Methods 60 male SD rats were randomly divided into a normal control group and a modeling group after 1 week of adaptive feeding，including a normal group （10 rats），a modeling group （10 rats），a diabetes group，a low-dose group，a medium-dose group，a high-dose group，and a vitamin c group.After the model was successfully constructed，diabetes was administered to the tangzhouling group at a dose of 0.44g/（kg·d）.The medium dose group was given 0.88g/（kg·d）.The high-dose group was given 1.75g/（kg·d），the vitamin C group was given 0.05g/（kg·d），and the diabetes group and the control group were given the same amount of distilled water for 16 weeks. After 16 weeks，the mechanical pain threshold was measured with the Von Frey meter，and the effects of tangzhouling capsule on the mechanical pain threshold of the lower limbs of diabetic rats were observed.Results there were significant differences between normal control group and vitamin C group （P<0.05）.There were significant differences between normal control group，model group and small dose group （P<0.01）.There were significant differences between the model group and the low-dose group，the medium-dose group and the high-dose group （P<0.01）. Compared with the vitamin C group，there were significant differences between the low-dose group，the medium-dose group and the high-dose group （P<0.05）.Conclusion in the diabetic model group，the mechanical pain threshold was the lowest，tangzhouling tangzhouling capsule could improve the mechanical pain threshold of diabetic rats to some extent，improve the neurological function of diabetic neuropathy，and have a protective effect on diabetic peripheral neuropathy.

Keywords：Tangzhouling Capsule;Diabetes Mellitus;Mechanical Pain Threshold

糖尿病周?chē)窠?jīng)病變（Diabetic peripheral neuropathy，DPN）是指周?chē)窠?jīng)功能障礙，是糖尿病最常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥之一，亦是DPN中最常見(jiàn)的類(lèi)型。研究報(bào)道我國(guó)DPN患病率為52.97%。DPN臨床癥狀[1]早期常表現(xiàn)肢體麻木、疼痛、感覺(jué)異常等，并隨著糖尿病病程逐漸進(jìn)展[2-3]，可出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)、感覺(jué)神經(jīng)、自主神經(jīng)均可受累，常表現(xiàn)為感覺(jué)缺失、腱反射消失，同時(shí)也可出現(xiàn)其他并發(fā)癥。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)DPN發(fā)病機(jī)制尚不明確，糖尿病并發(fā)癥統(tǒng)一機(jī)制學(xué)說(shuō)認(rèn)為：高糖狀態(tài)引起線(xiàn)粒體中超氧陰離子生成過(guò)多，從而導(dǎo)致組織細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激是糖尿病周?chē)窠?jīng)病變發(fā)病機(jī)制[4-5]。西醫(yī)對(duì)DPN的治療主要是針對(duì)病因治療和針對(duì)神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制治療，針對(duì)病因治療包括積極嚴(yán)格地控制高血糖并保持血糖穩(wěn)定和使用甲鈷胺、神經(jīng)生長(zhǎng)因子進(jìn)行神經(jīng)修復(fù)，針對(duì)神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制治療包括抑制醛糖還原酶抑制劑、多元醇通路增強(qiáng)等對(duì)癥治療[6-8]。前期研究[9-12]表明糖周靈膠囊可以改善DPN大鼠坐骨神經(jīng)的傳導(dǎo)性、降低血糖、恢復(fù)對(duì)熱輻射敏感性、抑制正常大鼠體內(nèi)血栓形成作用及鎮(zhèn)痛作用;糖周靈膠囊中的多種藥物均具有抑制神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用。本研究針對(duì)糖周靈膠囊低、中、高劑量與抗氧化劑維生素C、模型組、正常對(duì)照組相比，對(duì)機(jī)械性痛閾的影響進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1動(dòng)物8～9周的SPF級(jí)雄性SD大鼠，體重：220～260 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司， 動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK （湘）2016-0002，在云南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)公共平臺(tái)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，許可證：SYXK（滇）K2017-0005。

1.2材料糖周靈膠囊（主要由黃芪、三七、全蟲(chóng)等藥物組成）由昆明市中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。 維生素C 片（100mg/片，昆明振華制藥廠(chǎng)有限公司），鏈脲佐菌素（STZ，批號(hào)：CAS1883-66-4，美國(guó)Sigma公司），4279血糖試紙（批號(hào)：TD-18F130-BED，中國(guó)臺(tái)灣泰博科技股份有限公司）。Von Frey觸覺(jué)刺痛套件。

2方法

2.1實(shí)驗(yàn)分組及培養(yǎng)將60只雄性SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，采用隨機(jī)對(duì)照方法-用電子計(jì)算機(jī)隨機(jī)編碼法隨機(jī)分為正常對(duì)照組和造模組，其中正常組（10只），造模組分為糖尿病組、糖周靈小劑量組、中劑量組、高劑量組、維生素c組各10只;造模成功后，糖周靈小劑量組以糖尿病0.44 g/（kg·d）給藥;中劑量組按0.88 g/（kg·d）給藥;大劑量組按1.75 g/（kg·d）給藥，維生素C組按0.05 g/（kg·d）給藥，糖尿病組及對(duì)照組給予等量蒸餾水，給藥時(shí)間為16周，16周后用Von Frey測(cè)量?jī)x測(cè)定機(jī)械痛閾值。

2.2指標(biāo)檢測(cè)及方法觀(guān)察SD大鼠一般情況（毛色、精神狀態(tài)等），測(cè)定治療前、治療后4周、8周、12周、16周大鼠體重、大鼠尾尖血血糖，用Von Frey儀測(cè)量測(cè)定灌胃16周后大鼠機(jī)械痛閾值并記錄。

2.3數(shù)據(jù)錄入和處理采用SPSS21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入、分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）描述，釆用單因素方差分析、非參數(shù)檢驗(yàn)方法進(jìn)行比較，各種檢驗(yàn)的顯著性水平均設(shè)定為P<0.05。

3結(jié)果

3.1一般情況正常組大鼠毛色純白，精神狀態(tài)良好，有光澤，動(dòng)作自如，進(jìn)食、飲水量、尿量均正常，體重明顯增加。模型組大鼠出現(xiàn)毛色枯黃，精神萎靡，動(dòng)作遲緩，出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀。維C組、糖周靈低中高劑量組均出現(xiàn)類(lèi)似模型組癥狀，但程度都較輕。為防止各組出現(xiàn)不明原因死亡，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故每組均選取造模成功的12只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。模型組2只死亡，維C組、糖周靈小中高劑量組各1只死亡，均考慮為長(zhǎng)期高血糖導(dǎo)致。糖周靈大劑量組1只大鼠因灌胃操作不當(dāng)死亡。

3.2糖周靈膠囊對(duì)血糖影響在空腹血糖指標(biāo)來(lái)看：在治療4周、8周、12周、16周后，與正常對(duì)照組相比，模型組、維C組、糖周靈小、中、高各治療組均明顯升高（P<0.01）;與模型組相比，維C 組及糖周靈小、中、高劑量組均無(wú)明顯差異差異（P>0.05）。見(jiàn)表1。

3.3糖周靈對(duì)體重影響各組體重在治療前無(wú)明顯的差異（P>0.05），在治療4周、8周、12周、16周后，與正常對(duì)照組相比，模型組、維C組、糖周靈各治療組體重均下降（P<0.01）;與模型組相比，維C 組、糖周靈各濃度組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與維C組相比，糖周靈各濃度組無(wú)明顯差異（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3.4糖周靈膠囊對(duì)糖尿病神經(jīng)病變大鼠感覺(jué)閾值影響正常對(duì)照組與維生素C組存在明顯差異（P<0.05）;正常對(duì)照組、模型組與小劑量組存在顯著差異（P<0.01）;模型組與小劑量組、中劑量組、大劑量組存在顯著差異（P<0.01），與維C組相比，糖周靈小、中、大劑量組存在明顯差異（P<0.05），與糖周靈大劑量相比，糖周靈小、中劑量無(wú)明顯差異（P>0.05）。見(jiàn)表3。

4討論

糖周靈膠囊是云南省昆明市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，主要功用是益氣養(yǎng)血、活血通絡(luò)、搜風(fēng)止痛，其方藥由黃芪、三七、當(dāng)歸、川芎、雞血藤、全蟲(chóng)、牛膝等藥物組成，其中黃芪、三七為君，健脾益氣活血，通絡(luò)止痛;當(dāng)歸、川芎、雞血藤為臣，養(yǎng)血活血，行氣止痛，祛瘀通絡(luò)，舒筋活絡(luò);全蟲(chóng)等為佐藥，搜風(fēng)通絡(luò)，溫經(jīng)止痛，祛風(fēng)散寒等;使以牛膝滋養(yǎng)肝腎，載藥下行。其配伍特點(diǎn)有：其一，先擬扶正，以達(dá)到治療未病，截?cái)嘌泳徃裳Y瘕的形成的目的;其二，在健脾益氣養(yǎng)血的基礎(chǔ)上，施以活血祛瘀，溫陽(yáng)通絡(luò);其三，結(jié)合 DPN絡(luò)脈“以通為用” 的特點(diǎn) ，佐以辛香蟲(chóng)蟻之品搜剔絡(luò)中混處之邪;其四，考慮消渴病多始于陰虛的特點(diǎn)，使以滋養(yǎng)肝腎、引邪下行之品。現(xiàn)代藥理研究[9-12]表明：黃芪、三七、當(dāng)歸、葛根具有降血糖作用;三七、羌活、細(xì)辛等則具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用;牛膝具有改善紅細(xì)胞變形能力，降低纖維蛋白原水平的作用。大部分中藥均具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、抗氧化、抗血栓形成、降低血粘度、抗動(dòng)脈硬化的作用。

糖尿病神經(jīng)病變是一種神經(jīng)退行性疾病，可導(dǎo)致部分糖尿病患者功能、情緒和睡眠的改變。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組機(jī)械痛閾值最低，糖周靈膠囊一定程度上可以提高糖尿病大鼠機(jī)械痛閾值，改善糖尿病神經(jīng)病變神經(jīng)功能，對(duì)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變具有一定保護(hù)作用。糖尿病神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制包括：神經(jīng)鞘病變、多元醇通路活性、糖基化終末產(chǎn)物積累、蛋白激酶活性、己糖胺通路通量增加、氧化應(yīng)激、一氧化氮和炎癥等[13]。DPN主要表現(xiàn)為多樣性異常感覺(jué)，包括感覺(jué)過(guò)敏、自發(fā)痛、痛覺(jué)過(guò)敏等。研究[14]證實(shí)高血糖時(shí)，機(jī)體對(duì)機(jī)械刺激的反應(yīng)呈一個(gè)增強(qiáng)的過(guò)程。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組的機(jī)械痛閾值最低，說(shuō)明該組大鼠對(duì)機(jī)械刺激反應(yīng)最高，此研究亦證實(shí)這一點(diǎn)。糖尿病并發(fā)癥統(tǒng)一機(jī)制學(xué)說(shuō)認(rèn)為：高糖狀態(tài)引起線(xiàn)粒體中超氧陰離子生成過(guò)多，引起組織細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激，是導(dǎo)致包括 DPN在內(nèi)的糖尿病慢性并發(fā)癥的共同機(jī)制[15-16]。細(xì)胞凋亡是通過(guò)線(xiàn)粒體內(nèi)ROS生成增多可誘導(dǎo)線(xiàn)粒體內(nèi)膜去極化，膜電位下降，線(xiàn)粒體膜通透性增加，導(dǎo)致釋放細(xì)胞色素等凋亡相關(guān)蛋白入胞漿，進(jìn)而與凋亡蛋白酶激活因子和 procaspase-9 結(jié)合，使后者活化為有活性的 Caspase-9，從而進(jìn)一步使下游的 procaspase-3激活為Caspase-3，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[17-19]。糖尿病神經(jīng)病變可導(dǎo)致終身殘疾，目前尚無(wú)有效的治療方法或?qū)⒒颊叩耐纯嘟档阶畹停虼酥贫ㄌ悄虿〉闹委煵呗詣?shì)在必行。由于氧化應(yīng)激、線(xiàn)粒體功能障礙、細(xì)胞凋亡和炎癥是DPN發(fā)展和進(jìn)展的關(guān)鍵機(jī)制[20]，有研究[21]發(fā)現(xiàn)對(duì)糖尿病神經(jīng)病變的保護(hù)作用可能是由于糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)中SOD（超氧化歧化酶）的含量顯著下降而MAD（丙二醛）、ROS（活性氧簇）含量明顯增高，Caspase-3蛋白表達(dá)增加，氧化應(yīng)激啟動(dòng)后細(xì)胞凋亡明顯增加，通過(guò)上調(diào)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠SOD 水平，下調(diào) MAD、ROS 水平，抑制 Caspase-3蛋白的表達(dá)，達(dá)到抗氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病神經(jīng)病變模型建立，糖周靈膠囊灌胃16周后，發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組機(jī)械痛閾值最低，糖周靈膠囊一定程度上可以提高糖尿病大鼠機(jī)械痛閾值，改善糖尿病神經(jīng)病變神經(jīng)功能，對(duì)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變具有一定保護(hù)作用，可能是由于糖周靈膠囊上調(diào)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠SOD水平，下調(diào)MAD、ROS水平，抑制Caspase-3蛋白的表達(dá)，達(dá)到抗氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的作用來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變的保護(hù)作用。其作用機(jī)制尚不明確，有待作進(jìn)一步深入研究。參考文獻(xiàn)

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基金項(xiàng)目：昆明市科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2015-2-S-02003）。

作者簡(jiǎn)介：晏和國(guó)（1990-），男，漢族，碩士，住院醫(yī)師，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)內(nèi)科學(xué)[中醫(yī)津液疾病（糖尿?。┓乐窝芯縘。E-mail：1521254674@qq.com

通信作者：李軍（1969-），男，漢族，博士，教授、主任醫(yī)師、碩士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合內(nèi)分泌方向。E-mail：luoshulover@sina.com