葛根提取物對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

陳苑紅 陳國權(quán)

【摘要】目的：探討葛根提取物對(duì)四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。方法：將60只昆明小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組，葛根提取物高、中、低劑量組（400、200、100mg/kg），聯(lián)苯雙酯組（100mg/kg）。連續(xù)灌胃給藥14 d后腹腔注射0.2% CCl4溶液誘發(fā)急性肝損傷，24h后處死小鼠，檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽汁酸（TBA）、總膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）含量和肝組織中總超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px），總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量。結(jié)果：與模型組比較，各給藥組小鼠ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT、MDA、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α的含量降低（P<0.05或0.01），SOD、T-AOC、GSH-Px含量升高（P<0.05或0.01）。結(jié)論：葛根提取物對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷具有較好的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與增強(qiáng)抗氧化能力及抗炎作用相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】葛根提取物;急性肝損傷;抗氧化;抗炎

【中圖分類號(hào)】R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）18-0008-04

Protective Effect of Pueraria Lobata Extract on CCl4-induced Liver Eamage in MiceCHEN YuanhongCHEN Guoquan*

The Third Peoples Hospital of Shunde（Beijiao hospital）， Foshan? 528000，ChinaAbstract：Objective To explore the effect of Pueraria lobata extractt on CCl4-induced liver damage in mice.Methods 60 mice were randomly divided into normal control group，model group，Pueraria lobata extract high，medium and low dose groups （400，200，100 mg/kg），and bifendate group （100 mg/kg）. After continuous intragastric administration for 14 days. Acute liver injury model was established by intraperitoneal injection of 0.2% CCl4 olive oil solution. After 24 hours of modeling，the contents of alanine aminotransferase （ALT），aspartate aminotransferase （AST），total bile acid （TBA），total bilirubin （TBIL），alkaline phosphatase （ALP），gamma glutamyltransferase （γ- GT） in serum and total superoxide dismutase （SOD），malondialdehyde （MDA），total antioxidant capacity （T-AOC） glutathione peroxidase （GSH-Px），interleukin-1β （IL-1β），interleukin-6 （IL-6），transforming growth factor-β （TGF-β） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in liver tissue were detected.Results Compared with the group，pueraria extract significantly reduced ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT、MDA、IL-1β、IL-6、TGF-βand TNF-α levels in mice with acute liver injury（P<0.05 or 0.01），significantly increased SOD，T-AOC，GSH-Px levels（P<0.05 or 0.01）.Conclusion Pueraria lobata extract has a significant protective effect against acute liver injury induced by CCl4 in mice，the mechanism may be related to the enhancement of antioxidant capacity and anti-inflammatory effect.

Keywords：Pueraria lobata Extract; Acute Live Injury; Anti-oxidation; Anti-inflammatory

急性肝損傷是臨床上常見的肝臟疾病，許多因素如化學(xué)物質(zhì)、感染、缺血、藥物及酒精等均會(huì)造成急性肝臟損傷，引發(fā)肝功能的不全[1]。臨床上，急性肝損傷患者有著血清轉(zhuǎn)氨酶的升高、膽紅素升高等表現(xiàn)。長(zhǎng)期肝損傷則會(huì)導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化、肝癌甚至肝衰竭，嚴(yán)重危害人類的身體健康。目前臨床上主要使用核苷類似物、維生素類以及保肝降酶等藥物進(jìn)行對(duì)癥治療，可供選著的針對(duì)性藥物較少，并且在治療過程往往伴隨著一定的不良反應(yīng)的發(fā)生[2]。因此，目前仍需尋找安全有效的治療藥物。

葛根是豆科植物野葛或甘葛藤干燥的根，具有透疹、解肌退熱、升陽止瀉、生津止渴等功效。臨床上主要用于陰虛消渴、麻疹不透、脾虛泄瀉等疾病的治療。現(xiàn)代研究[3-4]發(fā)現(xiàn)，葛根具有降血壓、降血糖、保護(hù)心肌缺血再灌注損傷、抗腫瘤、抗脂質(zhì)過氧化等藥理作用，并在保護(hù)肝臟方面也具有一定作用。為了進(jìn)一步研究葛根的肝臟保護(hù)作用，研究采用CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷模型，探討葛根對(duì)化學(xué)毒性物誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)研究。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠60只，雄性，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22g，購自廣東省醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0002。

1.2藥品與試劑葛根提取物（葛根總黃酮≥60%，批號(hào)20180412，西安賽邦生物技術(shù)有限公司），聯(lián)苯雙酯滴丸（批號(hào)：17070103，北京協(xié)和藥廠），分析純四氯化碳（批號(hào)：201407，天津市富宇細(xì)化工有限公司），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒（ALT，批號(hào)：20180506）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒（AST，批號(hào)：20180516），總膽汁酸試劑盒（TBA，批號(hào)：20180412）、總膽紅素試劑盒（TBIL，批號(hào)：20180604）、堿性磷酸酶試劑盒（ALP，批號(hào)：20180203），γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶試劑盒（γ-GT，批號(hào)：20180405）、總超氧化物歧化酶試劑盒（SOD，批號(hào)：20180522）、丙二醛試劑盒（MDA，批號(hào)：20180325）、總抗氧化能力試劑盒（T-AOC，批號(hào)：20180221）、谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒子（GSH-Px，批號(hào)：20180425）等均購自南京建成生物工程研究所。白介素-1β（IL-1β，批號(hào)：EK0394）、白介素-6（IL-6，批號(hào)：EK0411）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β，批號(hào)：EK0515）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α，批號(hào)：EK0527）檢測(cè)試劑盒等均購自博士德生物工程有限公司。

1.3儀器全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Thermo Fisher Scientific公司），紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），HH-S8數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠），臺(tái)式高速離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司）。

2方法

2.1分組、給藥及模型制備小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型組、葛根提取物高、中、低劑量組、聯(lián)苯雙酯組，每組10只。采取灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型組灌胃等體積的生理鹽水。參考文獻(xiàn)劑量[5-6]，葛根提取物高、中、低劑量組給藥劑量為400、200、100mg/kg，聯(lián)苯雙酯組給藥劑量為100mg/kg。每天一次，連續(xù)進(jìn)行14 d。末次給藥2h后，除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠按10mL/kg的劑量腹腔注射0.2% CCl4橄欖油溶液，正常對(duì)照組注射等體積橄欖油。造模24h后，小鼠后眼眶靜脈叢取血，頸椎脫臼處死，剝離肝臟。

2.2指標(biāo)檢測(cè)血液室溫靜置1h后，3000r/min離心10min，分離血清，按試劑盒檢測(cè)方法分別檢測(cè)血清中ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT的含量;取同部位肝組織，加入預(yù)冷后的生理鹽水，冰上進(jìn)行勻漿，3500r/min離心10min，吸取上清液，按試劑盒的檢測(cè)方法分別檢測(cè)肝組織中的SOD、MDA、T-AOC、GSH-Px、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α的含量。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用 SPSS 20.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)采?。▁±s）方式進(jìn)行表示，以P<0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1各給藥組小鼠血清中ALT、AST含量變化與正常對(duì)照組比較，造模后，模型組小鼠血清中ALT、AST含量顯著性增高（P<0.01）;與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠血清中ALT、AST含量顯著性降低（P<0.05或0.01）。結(jié)果見表1。

低劑量組100.0402.02±57.02*249.15±60.86*聯(lián)苯雙酯組100.0321.02±96.16**217.49±62.11**注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。3.2各給藥組小鼠血清中TBA、TBIL含量變化與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠血清中TBA、TBIL含量顯著性增高（P<0.01）;與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠血清中TBA、TBIL含量顯著性降低（P<0.05或0.01）。結(jié)果見表2。

低劑量組100.032.99±6.63*5.11±1.01*聯(lián)苯雙酯組100.030.59±5.07**5.06±0.85*注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。3.3各給藥組小鼠血清中ALP、γ-GT含量變化與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠血清中ALP、γ-GT含量顯著性增高（P<0.01）;與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠血清中ALP、γ-GT含量顯著性降低（P<0.05或0.01）。結(jié)果見表3。

低劑量組100.0143.21±20.02*6.46±1.32*聯(lián)苯雙酯組100.0128.40±26.39**5.67±0.92**注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。3.4各給藥組小鼠肝組織中SOD、MDA含量變化與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織中SOD含量顯著性降低（P<0.01），MDA含量顯著性增高（P<0.01）;與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中SOD含量顯著性升高（P<0.05或0.01），MDA含量顯著性降低（P<0.05或0.01）。結(jié)果見表4。

3.5各給藥組小鼠肝組織中T-AOC、GSH-Px含量變化與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織中T-AOC和GSH-Px顯著性減低（P<0.01）;與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中T-AOC和GSH-Px顯著性升高（P<0.05或0.01）。結(jié)果見表5。

低劑量組100.0245.55±30.94**6.38±0.97*聯(lián)苯雙酯組100.0250.87±23.59**6.08±1.05**注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

低劑量組100.01.23±0.22*134.93±12.59**聯(lián)苯雙酯組100.01.44±0.18**141.30±11.27**注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。3.6各給藥組小鼠肝組織中IL-1β、IL-6含量變化與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織中IL-1β和IL-6含量顯著性升高（P<0.01）;與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中IL-1β和IL-6含量顯著性降低（P<0.05）。結(jié)果見表6。

3.7各給藥組小鼠肝組織TGF-β、TNF-α含量變化與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織中TGF-β和TNF-α含量顯著性升高（P<0.01）;與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中TGF-β和TNF-α含量顯著性降低（P<0.05或0.01）。結(jié)果見表7。

低劑量組100.079.08±17.87*67.57±13.34*聯(lián)苯雙酯組100.068.40±30.61*63.22±19.95*注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

低劑量組100.0146.28±30.03*134.04±33.06*聯(lián)苯雙酯組100.0140.11±32.58**128.56±39.15**注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4討論

正常情況下，ALT和AST主要存在肝細(xì)胞當(dāng)中，當(dāng)肝細(xì)胞受損或者發(fā)生變性壞死時(shí)，二者就會(huì)釋放入血，引起血液中含量升高。此外，當(dāng)肝臟發(fā)生損傷或者病變時(shí)，血液中TBA、TBIL、ALP、γ-GT含量也會(huì)顯著升高。因此，ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT均是反映肝細(xì)胞損傷程度，評(píng)價(jià)肝功能的重要指標(biāo)[7-8]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，葛根提取物能夠降低血清中升高的ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT的含量。提示葛根提取物具有保肝作用。

脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、炎癥反應(yīng)是急性肝損傷發(fā)生的重要機(jī)制之一[9-10]?？怪|(zhì)過氧化，減輕炎癥反應(yīng)能有效的緩解肝損傷。SOD和GSH-Px是體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)中重要的兩種抗氧化酶，起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用，其含量的多少反映了體內(nèi)抗氧化能力的高低。MDA作為脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物之一，容易導(dǎo)致細(xì)胞的變性壞死，其含量高低可以反映體內(nèi)過氧化損傷程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，葛根提取物能提高肝組織中T-AOC、SOD、GSH-Px含量，降低MDA含量，提示葛根提取物具有較好的抗脂質(zhì)過氧化作用。IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β是體內(nèi)重要的細(xì)胞因子，正常情況下，其含量處于較低水平。當(dāng)體內(nèi)受到危險(xiǎn)因素攻擊時(shí)，其表達(dá)升高，則會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)，引起肝細(xì)胞的壞死，誘導(dǎo)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，葛根提取物能降低肝組織升高的IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α含量，提示葛根提取物具有抗炎作用。

綜上，葛根提取物對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷具有較好的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗脂質(zhì)過氧化、抗炎相關(guān)。參考文獻(xiàn)

[1]趙善民. 腫瘤壞死因子-α在不同類型肝損傷中的作用及機(jī)制研究[D].上海：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)，2019.

[2]吳艷玲，廉麗花，南極星.中藥有效成分治療肝損傷及肝纖維化作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，2016，24（30）：4144-4150.

[3]楊新穎.葛根素藥理活性研究進(jìn)展[J].科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新，2020（8）：194-195.

[4]劉亞美，陳瓊，吳菲菲，等.葛根異黃酮的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J].福建茶葉，2020，42（1）：18-19.

[5]梁婕，凌敏，張薇，等.葛根提取物對(duì)小鼠酒精性肝損傷的輔助保護(hù)效果[J].江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué)，2020，31（3）：280-282.

[6]王樹深. 葛根提取物對(duì)酒精中毒小鼠的保護(hù)作用[D].大連：大連理工大學(xué)，2019.

[7]黎明高.肝臟疾病診斷中采取血清ALT、AST、GGT檢測(cè)的臨床應(yīng)用[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2018，16（11）：179-181.

[8]任敏霞，吳素香，詹淑玉，等.白芍總苷及其所含主要成分芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2020，38（5）：244-247.

[9]JIA R，CAO LP，DU J L，et al. Effects of carbon tetrachloride on oxidative stress，inflammatory response and hepatocyte apoptosis in common carp （ Cyprinus carpio ）[J]. Aquatic Toxicology，2014（152）：11-19.

[10]CHIU Y J，CHOU S H，CHIU C S，et al. Hepatoprotective effect of the ethanol extract of Polygonum orientale on carbon tetrachloride-induced acute liver injury in mice[J]. Journal of Food and Drug Analysis，2018，26（1）：369-379.（收稿日期：2021-02-03編輯：劉斌）

1.統(tǒng)計(jì)學(xué)符號(hào)：本刊執(zhí)行GB3358 1982《統(tǒng)計(jì)學(xué)名詞及符號(hào)》的有關(guān)規(guī)定。統(tǒng)計(jì)學(xué)符號(hào)一律采用斜體表示。

2.參考文獻(xiàn)：按GB/T 7714-2015《信息與文獻(xiàn)? 參考文獻(xiàn)著錄規(guī)則》中的順序編碼制著錄，依照其在文中出現(xiàn)的先后順序用阿拉伯?dāng)?shù)字加方括號(hào)角標(biāo)標(biāo)出，并將序號(hào)置于方括號(hào)中，排列于文末。綜述類文章參考文獻(xiàn)應(yīng)盡量在25條/篇以上。實(shí)驗(yàn)研究

作者簡(jiǎn)介：陳苑紅（1985-），女，漢族，本科，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)-中藥現(xiàn)代化。E-mail：zscyh2006 0518@126.com

通信作者：陳國權(quán)（1984-），男，漢族，本科，主治醫(yī)師，研究方向?yàn)榕R床醫(yī)學(xué)-麻醉學(xué)。E-mail：c1g1q1@163.com