黃瓜籽蛋白對頸總動脈血栓模型大鼠血清TXB26-keto-PGF1α和T-PA的調(diào)節(jié)作用

王 萍，陳麗艷，孫銀玲，姚 琳，董 坤，高 辛，王偉明

(黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·黑龍江 哈爾濱 150036)

隨著生活質(zhì)量的提高，血管栓塞性疾病的發(fā)病率逐年提高，成為人口死亡的主要原因[1]。針對抗栓藥物存在的問題，亟須開發(fā)一種副作用小的新型抗栓藥物[2]。黃瓜籽為葫蘆科植物黃瓜(CucumbersativusL.)的干燥成熟種子。據(jù)記載其具有續(xù)接筋骨、祛風(fēng)等功效，主治骨折筋傷、風(fēng)濕痹痛、老年痰喘[3]。前期研究結(jié)果表明，黃瓜籽生品和炮制品具有抑制血栓形成和抗凝血作用[4]。本文觀察了黃瓜籽蛋白對頸總動脈血栓模型大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α、T-PA的調(diào)節(jié)作用，探討其抗血栓機制。

1 材料

1.1 動物 健康成年SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部提供，合格證號：SCXK(黑)2019-001。

1.2 藥物與試劑 黃瓜籽蛋白：黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院自制，批號：20190306；蚓激酶腸溶膠囊：珠海博康藥業(yè)有限公司批號：20181003。石油醚：宇富精細化工有限公司；氯化鈉：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；水合氯醛：成都市科龍化學(xué)試劑廠；三氯化鐵：天津市致遠化學(xué)試劑有限公司。大鼠血栓素B2(TXB2)、6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、大鼠組織型纖溶酶原活化劑(T-PA)試劑盒：均為南京建成科技有限公司

1.3 儀器 BSA224S型電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；KE·WEI RW-52AA型電熱恒溫水浴鍋：北京六一儀器有限公司LG10-2.4A型高速離心機：北京京立離心機有限公司；M200多功能酶標儀：TECAN。

2 方法

2.1 黃瓜籽蛋白提取 取生黃瓜籽，粉碎后，加入石油醚，脫脂，離心過濾，藥渣自然風(fēng)干后，加入0.14 mol·L-1氯化鈉溶液于4 ℃浸提8 h，取上清液加硫酸銨分級沉淀、透析、凍干得到黃瓜籽蛋白凍干粉，保存于-20℃冰箱備用[5-7]。

2.2 動物分組及給藥方法 大鼠常規(guī)喂養(yǎng)3 d進行隨機分組，模型對照組(生理鹽水10 mL·kg-1·d-1)、陽性對照組(蚓激酶腸溶膠囊2 5000 IU·kg-1·d-1)和黃瓜籽蛋白低、中、高劑量組(黃瓜籽蛋白提取液5 000、25 000、12 5000 IU·kg-1·d-1)[8]，每組10只，連續(xù)灌胃給藥14 d，末次給藥1 h后用水合氯醛麻醉，采用FeCl3誘導(dǎo)大鼠頸總動脈血栓[9]，腹主動脈取血，收集樣本血液后，3 000 r·min-1進行離心10 min,收集血清，分裝備用。

2.3 大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α、T-PA檢測 酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)測定。按試劑盒操作即可

3 結(jié)果 見表1。

表1 各組大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1αT-PA含量比較

4 討論

目前對于黃瓜籽的研究報道較少，除了少量的關(guān)于黃瓜籽生品和炮制品具有抑制血栓形成和抗凝血作用的報道外[4]，在其提取成分的抗凝及溶栓方面的研究尚處于起步階段。因此本研究對黃瓜籽蛋白的抗凝及溶栓作用進行了研究，為后續(xù)黃瓜籽的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

血栓是血液中的凝血因子被激活形成纖維蛋白原所致，血凝、抗凝和纖溶形成動態(tài)平衡[10-11]，而T-PA是人體血液中重要的纖溶酶原激活劑，能夠激活體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的纖溶酶原，降解沉積血管壁的纖維蛋白為可溶性的片段[12]，維持機體凝血和抗凝血、纖溶系統(tǒng)的動態(tài)平衡，預(yù)防血栓形成。血栓素A2(TXA2)和前列環(huán)素(PGI2)是具有代表性的血管活性物質(zhì)，其代謝產(chǎn)物TXB2與6-keto-PGF1α的平衡是診斷血栓病變的重要指標[13-14]。

本文實驗結(jié)果表明，黃瓜籽蛋白可以降低血栓模型大鼠血清TXB2水平，升高T-PA、6-keto-PGF1α水平，證實其對于血栓模型大鼠具有抗凝溶栓作用。