早期喉癌患者血清膜聯(lián)蛋白A2、環(huán)氧合酶-2及色素框同源物7檢測及意義

郭武輝，袁 倩

(1.榆林市第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，陜西 榆林 719000;2.榆林市中醫(yī)醫(yī)院耳鼻喉科，陜西 榆林 719000)

喉癌發(fā)病率占全部頭頸部腫瘤的7.9%～35.0%，且以鱗狀細(xì)胞癌多見，患者多為中老年人[1-2]。喉癌分原發(fā)性和繼發(fā)性兩種。原發(fā)性喉癌指原發(fā)部位在喉部的腫瘤，以鱗狀細(xì)胞癌最為常見。繼發(fā)性喉癌指來自其他部位的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至喉部，較為少見。喉癌癥狀主要為聲嘶、呼吸困難、咳嗽、吞咽困難、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。早期發(fā)現(xiàn)，早期診療對于減輕喉癌的危害非常重要，一方面可提高患者術(shù)后生存率，另外有可能盡量保留喉的發(fā)音功能，減少術(shù)后并發(fā)癥。喉癌的發(fā)生發(fā)展涉及到一個復(fù)雜、多階段、多步驟、多基因共同參與的過程[3]。膜聯(lián)蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)為膜聯(lián)蛋白超家族中的一員，環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)為前列腺素合成過程中的重要限速酶，色素框同源物7(Chromobox homolog 7,CBX7)為多梳基因家族蛋白家族蛋白中的一員[4-5]。本研究旨在探討血清ANXA2、COX-2、CBX7在早期喉癌中的檢測意義及相互關(guān)系，以為早期喉癌尋找更多的血清學(xué)標(biāo)志物，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年1月至2020年12月喉癌患者64例，TNM分期為T1N0M0～T2N0M0，均為初診患者，入組前未接受過任何相關(guān)治療，其中男38例，女26例，年齡41～81歲，平均(66.19±8.24)歲。同時選擇同期71例喉良性病變患者及50例健康體檢者作為對照，喉良性病變患者均未接受過任何相關(guān)治療。喉良性病變患者中男39例，女32例，年齡44～80歲，平均(66.35±9.35)歲。健康體檢者中男27例，女23例，年齡40～76歲，平均年齡(64.05±8.21)歲。三組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2 檢測方法 所有受檢者于次日早晨采集外周靜脈血4 ml，采血后將血液標(biāo)本置于離心機，設(shè)置轉(zhuǎn)速5000 r/min，離心20 min，取上層血清，儲存于-80 ℃冰箱待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清ANXA2、COX-2和CBX7水平，試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司(貨號ml036221)，嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行檢測。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察三組血清ANXA2、COX-2、CBX7水平；喉癌手術(shù)患者術(shù)前術(shù)后ANXA2、COX-2、CBX7水平；喉癌組患者血清ANXA2、COX-2、CBX7相關(guān)性分析；ANXA2、COX-2、CBX7在喉癌中的診斷評價(靈敏度、特異度)。

2 結(jié) 果

2.1 三組血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比較 喉癌組、喉良性病變組、健康組之間的血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，其中喉癌組血清ANXA2、COX-2水平明顯高于喉良性病變組與健康組(P<0.05)，而血清CBX7水平明顯低于喉良性病變組與健康組(P<0.05)；喉良性病變組血清ANXA2水平明顯高于健康組(P<0.05)，而血清COX-2、CBX7水平與健康組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比較

2.2 喉癌患者術(shù)前術(shù)后血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比較 與術(shù)前相比，喉癌患者術(shù)后ANXA2、COX-2水平均降低，CBX7升高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 喉癌患者術(shù)前術(shù)后血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比較

2.3 喉癌患者血清ANXA2、COX-2、CBX7相關(guān)性分析 經(jīng)過Pearson相關(guān)性分析顯示，血清ANXA2與CBX7水平在喉癌組中呈負(fù)相關(guān)(r=-0.583,P<0.05)，血清COX-2與CBX7水平在喉癌組中呈負(fù)相關(guān)(r=-0.609,P<0.05)，血清ANXA2與COX-2水平無相關(guān)性(P>0.05)，見表3。

表3 喉癌患者血清ANXA2、COX-2、CBX7相關(guān)性分析

2.4 ANXA2、COX-2、CBX7在喉癌診斷中的評價 三種指標(biāo)單獨檢測其中CBX7靈敏度最高為46.88%，特異度最高的為COX-2為96.88%，兩兩聯(lián)合檢測靈敏度和特異度均高于單獨指標(biāo)檢測，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；三指標(biāo)聯(lián)合靈敏度為90.63%，均高于ANXA2聯(lián)合CBX7、COX-2聯(lián)合CBX7的靈敏度，特異度為89.06%，低于ANXA2聯(lián)合CBX7、COX-2聯(lián)合CBX7的特異度，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。見表4。

表4 ANXA2、COX-2、CBX7在喉癌診斷中的評價[例(%)]

3 討 論

目前喉癌的發(fā)病機制尚不完全清楚，其中一些癌基因與抑癌基因的表達(dá)被認(rèn)為與喉癌的發(fā)生密切相關(guān)[6]。細(xì)胞骨架改變對細(xì)胞的癌變、黏附及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移起著關(guān)鍵作用[7]。ANXA2是一個鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白家族的成員之一，在調(diào)控細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)、細(xì)胞的信號傳導(dǎo)、細(xì)胞的增殖分化等方面發(fā)揮重要作用[8-9]。此外，ANXA2也是一種具有纖溶酶原活化系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)，可通過作用于纖溶酶原活化系統(tǒng)促進(jìn)腫瘤血管生成、細(xì)胞外基質(zhì)降解及一些生長因子的分泌與釋放[10]。近年國內(nèi)外研究表明，ANXA2在多種腫瘤中的表達(dá)上調(diào)。動物實驗表明，下調(diào)ANXA2基因的表達(dá)可明顯抑制胃癌移植瘤的生長[11]。目前有關(guān)ANXA2與喉癌關(guān)系的研究較少，王向鋒等[12]研究表明，ANXA2在喉癌組織中的高表達(dá)率明顯高于在癌旁組織與正常組織中的表達(dá)，且與臨床分期有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，喉癌患者血清ANXA2水平明顯高于喉良性病變患者及健康者，提示ANXA2與喉癌的發(fā)生有關(guān)，檢測血清ANXA2水平可能對早期喉癌的診斷有所幫助。

COX是催化花生四烯酸合成前列腺素家族的關(guān)鍵酶，包括COX-1與COX-2兩種亞型，其中COX-2是一種誘導(dǎo)型酶，在正常組織中的表達(dá)極微，而在炎癥、腫瘤等刺激下可迅速誘導(dǎo)高表達(dá)，是快速反應(yīng)基因[13-14]。COX-2高表達(dá)可增強細(xì)胞的黏附能力，并促進(jìn)細(xì)胞的增值、轉(zhuǎn)錄，抑制凋亡，因而對腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移有著重要意義[15]。COX-2在多種腫瘤中呈高度表達(dá)，高表達(dá)會增加腫瘤的耐藥性，特異性COX-2抑制劑有效抑制腫瘤細(xì)胞的增值、侵襲及轉(zhuǎn)移[16]。本研究結(jié)果顯示，喉癌患者血清COX-2水平明顯高于喉良性病變患者與健康者，提示COX-2參與了喉癌的發(fā)生，也有望成為喉癌的標(biāo)志物。

CBX7是一種色素框蛋白，屬于多梳基因家族蛋白家族。研究表明，多梳基因家族蛋白在調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡、DNA損傷應(yīng)答及修復(fù)等過程中具有重要作用，對干細(xì)胞分化、腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移有重要影響[17]。CBX7與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，且獨立于其他成員發(fā)揮作用。CBX7的功能復(fù)雜，既具有抑癌基因功能，又具有癌基因功能，研究表明，其在肺癌、胰腺癌、膀胱癌等腫瘤中具有抑癌特性，而在胃癌、淋巴瘤等腫瘤中又具有致癌特性[18-19]。目前有關(guān)CBX7在喉癌中所扮演的角色尚存在爭議，張行等[20]研究表明，CBX7在喉癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，提示CBX7高表達(dá)促進(jìn)了喉癌的形成。而本研究結(jié)果顯示，喉癌患者血清CBX7表達(dá)陽性率明顯低于喉良性病變患者與健康者，提示CBX7在喉癌中具有抑癌特性，其表達(dá)下調(diào)可能與喉癌的發(fā)生有關(guān)。

相關(guān)性分析顯示，血清ANXA2與COX-2水平在喉癌、喉良性病變及健康者中均無相關(guān)性，而血清ANXA2與CBX7水平在喉癌組中呈負(fù)相關(guān)(r=-0.583)，血清COX-2與CBX7水平在喉癌組中呈負(fù)相關(guān)，并且三種指標(biāo)聯(lián)合檢測靈敏度均高于單獨、兩兩聯(lián)合檢測靈敏度，提示ANXA2、COX-2表達(dá)激活與CBX7表達(dá)失活的共同作用導(dǎo)致了喉癌的發(fā)生，血清ANXA2、COX-2、CBX7可作為早期喉癌潛在的生物學(xué)檢測指標(biāo)。還須大樣本進(jìn)一步研究。