大鼠不同時(shí)期高脂飲食對(duì)子代糖脂代謝的影響及機(jī)制研究

魏銘 詹迪 李柱錫 汪歡玉 邢影 羅小平

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院兒科，湖北武漢430030）

“健康與疾病發(fā)育起源”學(xué)說(shuō)認(rèn)為：宮內(nèi)不良的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境可擾亂發(fā)育早期細(xì)胞增殖分化過(guò)程并對(duì)胎兒程序化產(chǎn)生永久的影響，導(dǎo)致成年期代謝性疾病的發(fā)生［1］。流行病學(xué)和臨床研究表明，圍生期環(huán)境如母親營(yíng)養(yǎng)、激素水平、胎盤功能等可對(duì)胎兒的組織、器官發(fā)育產(chǎn)生永久性損害，孕期營(yíng)養(yǎng)過(guò)?？稍黾幼哟逝趾头逝窒嚓P(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)［2-3］。

隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展，肥胖已經(jīng)成為全球公共衛(wèi)生危機(jī)。在世界范圍內(nèi)，中國(guó)肥胖人口數(shù)量最多，成人肥胖和超重率為42%，青少年肥胖和超重率為16%［4］。育齡婦女的肥胖率隨著肥胖人口的增多而逐年升高，肥胖導(dǎo)致的妊娠并發(fā)癥如妊娠糖尿病、先兆子癇，以及分娩、產(chǎn)后并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)亦隨之增加［5-6］。妊娠期肥胖在危害孕母健康的同時(shí)，還會(huì)影響子代的肥胖易感性、胰島素敏感性等，增加子代成年后發(fā)生代謝性疾病的風(fēng)險(xiǎn)［7-8］。

研究表明，在妊娠早期、妊娠晚期等不同的發(fā)育窗口，母體肥胖對(duì)子代肥胖、代謝等有獨(dú)立的編程效應(yīng)［9-10］。為了明確孕前、孕后高脂飲食干預(yù)對(duì)子代糖脂代謝的影響差異，本研究通過(guò)在孕前和/或孕期哺乳期給予高脂飲食構(gòu)建妊娠期肥胖動(dòng)物模型，觀察子代糖脂代謝的差異情況。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑

SPF級(jí)8周齡Sprague-Dawley（SD）大鼠，雌性40只，雄性20只，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004。飼養(yǎng)于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF動(dòng)物房?jī)?nèi)，環(huán)境溫度20～26℃，濕度40%～70%，12 h/12 h晝夜光照，自由飲水，按實(shí)驗(yàn)分組給予相應(yīng)飲食。

45%高脂飼料（江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司）；拜安康血糖儀、血糖試紙（安晟信糖尿病保健美國(guó)股份有限公司）；大鼠胰島素（insulin，INS）ELISA試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；三酰甘油（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）含量測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）；蘇木精染液、伊紅染液、油紅O染液（武漢賽維爾生物科技有限公司）；RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR SYBR Green試劑、β-actin抗體、二抗（上海翌圣生物科技股份有限公司）；4%多聚甲醛、蛋白酶抑制劑、RIPA裂解液、上樣緩沖液、ECL曝光液（武漢博士德生物工程有限公司）；胰島素受體（insulin receptor，IR）、胰島素受體底物（insulin receptor substrate，IRS）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（sterol-regulatory element binding protein 1c，SREBP1c）抗體（武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司）；絲氨酸磷酸化IRS（p-IRS）抗體（美國(guó)Thermo Fisher公司）；蛋白激酶B（AKT）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α（peroxisome proliferatoractivated receptor alpha，PPARα）抗 體（英 國(guó)Abcam公司）；脂肪酸合酶（fatty acid synthase，F(xiàn)ASN）抗體（美國(guó)CST公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組及妊娠期肥胖動(dòng)物模型的建立

本研究通過(guò)對(duì)母鼠的飲食干預(yù)構(gòu)建妊娠期肥胖動(dòng)物模型［11］。8周齡SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將雌性SD大鼠隨機(jī)分為兩組（n=20），分別給予正常飲食、高脂飲食6周。雄性SD大鼠保持正常飲食。6周后，按雌雄2∶1合籠，次晨行陰道涂片，顯微鏡觀察到精子視為懷孕。每組剔除2只不孕、假孕的雌性大鼠后，將孕前正常飲食大鼠隨機(jī)分為CC組（孕前、孕期哺乳期均正常飲食）和CH組（孕前正常飲食，孕期哺乳期高脂飲食）（n=9）；將孕前高脂飲食大鼠隨機(jī)分為HC組（孕前高脂飲食，孕期哺乳期正常飲食）和HH組（孕前、孕期哺乳期均高脂飲食）（n=9）。CH組在孕期哺乳期更換為高脂飲食，HC組在孕期哺乳期更換為正常飲食，CC組和HH組在孕期哺乳期繼續(xù)延續(xù)孕前飲食。母鼠自然分娩后，每窩隨機(jī)保留4只雄性仔鼠，進(jìn)行均一化處理，避免哺乳條件、性別等的不同造成的差異。仔鼠生后3周斷奶，斷奶后全部采取正常飲食。記錄母鼠孕前、孕期體重及仔鼠體重。

1.3 檢測(cè)空腹血糖和INS水平

每組各取9只幼年期（3周）、成年期（12周）雄性仔鼠，禁食12 h，尾尖取血，血糖儀檢測(cè)空腹血糖（glucose，GLU）水平；然后腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛麻醉，暴露心臟后取血，分離血清，按照說(shuō)明書要求，ELISA試劑盒檢測(cè)空腹INS水平。胰島素抵抗指數(shù)（homeostasis model assessment of insulin resistance，HOMA-IR）=［空 腹GLU（mmol/L）×空腹INS（μU/mL）］/22.5。

1.4 糖耐量試驗(yàn)和胰島素耐量試驗(yàn)

每組取9只仔鼠行糖耐量試驗(yàn)（glucose tolerance test，GTT）：3周、12周仔鼠禁食過(guò)夜，腹腔注射2 g/kg葡萄糖。尾尖取血，血糖儀檢測(cè)0、15、30、60、90、120 min血糖值。計(jì)算曲線下面積（area under the curve，AUC）。

每組取9只仔鼠行胰島素耐量試驗(yàn)（insulin tolerance test，ITT）：3周、12周仔鼠禁食4 h，腹腔注射0.8 U/kg胰島素，尾尖取血，血糖儀檢測(cè)0、15、30、60、90、120 min血糖值。計(jì)算AUC。

1.5 檢測(cè)肝臟TG和TC水平

每組取9只仔鼠，將采集的肝臟組織樣本研磨后提取上清用于檢測(cè)。根據(jù)說(shuō)明書操作，酶標(biāo)儀測(cè)定各孔光密度值，計(jì)算各組仔鼠肝臟的TG、TC水平。

1.6 肝臟蘇木精-伊紅染色和油紅O染色

蘇木精-伊紅染色：新鮮的肝臟組織在4%多聚甲醛中固定24 h，石蠟包埋后切片。石蠟切片脫蠟水化，蘇木精-伊紅染色，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。

油紅O染色：肝臟冰凍切片后干燥復(fù)溫10 min，60%異丙醇漂洗，油紅O染色，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.7 RT-PCR檢測(cè)肝臟糖脂代謝關(guān)鍵基因mRNA水平

每組取9只仔鼠，利用RNA提取試劑盒提取肝臟組織RNA，分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度及純度。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明，冰上配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系。逆轉(zhuǎn)錄儀將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，冰上配制PCR反應(yīng)體系（10 μL）：PCR SYBR Green 5 μL，上下游引物各0.2 μL，cDNA 1 μL，ddH2O 3.6 μL。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性2 min；95℃變性10 s，60℃退火/延伸30 s，40個(gè)循環(huán)。根據(jù)得到的CT值，利用2-ΔΔCT計(jì)算分析，得到相對(duì)定量的結(jié)果。引物序列見(jiàn)表1。

表1 RT-PCR引物序列

1.8 Western blot檢測(cè)肝臟糖脂代謝關(guān)鍵蛋白水平

每組取3只仔鼠肝臟組織，利用含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液裂解組織并離心取上清，加入上樣緩沖液并沸水浴加熱使蛋白變性。取等體積蛋白加樣，電泳、轉(zhuǎn)膜。PVDF膜封閉后加入一抗IR、p-IRS、IRS、p-AKT、FASN、SREBP1c（均1∶1 000稀釋），AKT、PPARα（均1∶2 000稀釋），β-actin（1∶5 000稀釋），4℃過(guò)夜，TBST洗膜3次，加入二抗（1∶5 000稀釋），室溫孵育1 h，TBST洗膜3次。ECL化學(xué)發(fā)光試劑浸泡2 min，凝膠成像儀曝光成像，以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示。重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析；多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同飲食組母鼠孕前體重及孕期增重變化情況

兩組SD母鼠孕前體重均隨時(shí)間推移逐漸增加（P＜0.001）；孕前各時(shí)間點(diǎn)高脂飲食組母鼠體重高于正常飲食組，且孕前3周開(kāi)始，高脂飲食組與正常飲食組母鼠體重差距逐漸增大（P＜0.001）；時(shí)間因素與分組因素存在交互作用（P＜0.001）。見(jiàn)表2。

表2 不同飲食干預(yù)組母鼠孕前6周內(nèi)體重變化比較（xˉ±s，g）

4組SD母鼠孕期體重均隨時(shí)間推移逐漸增加（P＜0.001）；SD母鼠懷孕后3周，HC組、CH組、HH組母鼠孕期增重均較CC組有明顯增加，且HH組母鼠孕期增重最顯著（P＜0.001）。時(shí)間因素與分組因素存在交互作用（P=0.01）。見(jiàn)表3。

表3 各組母鼠孕期3周內(nèi)體重變化比較（xˉ±s，g）

高脂飲食大鼠孕前體重增加和孕期增重過(guò)多，與正常飲食大鼠比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示孕前和/或孕期高脂飼料喂養(yǎng)均可成功構(gòu)建妊娠期肥胖動(dòng)物模型。

2.2 生后3周仔鼠體重及糖脂代謝情況

仔鼠生后3周時(shí)，HC組、CH組、HH組仔鼠體重均較CC組顯著增加，HH組仔鼠體重較HC組、CH組顯著增加（P＜0.05），見(jiàn)表4。

糖代謝方面，HH組空腹GLU水平較CC組、HC組顯著增加，空腹INS水平較CC組顯著增加，HOMA-IR、GTT-AUC、ITT-AUC較其他3組均顯著增加（P＜0.05），即HH組胰島素抵抗增加，糖耐量、胰島素耐量均降低（表4）。RT-PCR結(jié)果提示，HH組糖代謝通路關(guān)鍵基因IR、IRS的mRNA水平較CC組顯著降低（P＜0.05），AKT的mRNA水平在4組中比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表5）。Western blot結(jié)果提示，HH組IR、IRS蛋白表達(dá)水平較其他3組顯著降低，p-IRS蛋白表達(dá)水平較其他3組顯著升高（P＜0.05）；CC組IR蛋白表達(dá)水平較HC組、CH組顯著升高，CH組IR蛋白表達(dá)水平較HC組顯著降低（P＜0.05）。p-AKT、AKT蛋白表達(dá)水平在4組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)圖1和表6。

表4 各組生后3周仔鼠體重及糖脂代謝指標(biāo)水平比較（n=9，xˉ±s）

表5 各組生后3周仔鼠糖脂代謝相關(guān)基因的mRNA水平比較（n=9，xˉ±s）

脂代謝方面，HC組、CH組、HH組肝臟TG、TC水平均較CC組顯著增加，HH組肝臟TG水平較HC組、CH組顯著升高（P＜0.05）（表4）。肝臟蘇木精-伊紅染色及油紅O染色結(jié)果提示，HH組肝臟空泡形成及脂質(zhì)沉積最明顯，其次為HC組、CH組（圖2）。HC組、CH組、HH組肝臟脂質(zhì)代謝關(guān)鍵基因FASN、SREBP1c、PPARα的mRNA水平均較CC組顯著增加，HH組FASN的mRNA水平較HC組、CH組顯著升高（P＜0.05）（表5）。HC組、CH組、HH組FASN、SREBP1c、PPARα蛋白表達(dá)水平均較CC組顯著升高（P＜0.05）；HH組FASN蛋白表達(dá)水平較HC組、CH組顯著升高，CH組FASN蛋白表達(dá)水平較HC組顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)圖1和表6。

圖2 各組生后3周仔鼠肝臟病理改變（×200） 肝臟蘇木精-伊紅染色提示HH組肝細(xì)胞空泡增多，脂肪變性最明顯，其次為HC組、CH組；油紅O染色提示HH組肝臟脂質(zhì)沉積最嚴(yán)重（脂滴被染為紅色），其次為HC組、CH組。

表6 各組生后3周仔鼠肝臟糖脂代謝相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（n=3，xˉ±s）

圖1 Western blot檢測(cè)各組生后3周仔鼠肝臟糖脂代謝相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖

2.3 生后12周仔鼠體重及糖脂代謝情況

仔鼠生后12周時(shí)，HC組、CH組、HH組仔鼠體重均較CC組顯著增加（P＜0.05），見(jiàn)表7。

糖代謝方面，HC組、CH組、HH組空腹GLU及INS水平、HOMA-IR、GTT-AUC、ITT-AUC均較CC組顯著增加（P＜0.05）；HH組空腹INS水平、HOMA-IR較HC組、CH組顯著增加，GTT-AUC較HC組顯著增加（P＜0.05）（表7）。RT-PCR結(jié)果提示，HC組、CH組、HH組糖代謝通路關(guān)鍵基因IR、IRS、AKT的mRNA水平較CC組顯著降低（P＜0.05）；HH組IRS的mRNA水平較HC組顯著降低，AKT的mRNA水平較HC組、CH組顯著降低（P＜0.05）（表8）。Western blot結(jié)果提示，HC組、CH組、HH組IR、IRS、p-AKT蛋白表達(dá)水平均較CC組顯著降低，p-IRS蛋白表達(dá)水平較CC組顯著升高（P＜0.05）；AKT蛋白表達(dá)水平在4組中比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)圖3和表9。

表7 各組生后12周仔鼠體重及糖脂代謝指標(biāo)水平比較（n=9，xˉ±s）

表8 各組生后12周仔鼠肝臟糖脂代謝相關(guān)基因的mRNA水平比較（n=9，xˉ±s）

脂代謝方面，HC組、CH組、HH組肝臟TG、TC水平均較CC組顯著增加（P＜0.05）；HH組肝臟TG、TC水平較HC組、CH組顯著增加（P＜0.05）（表7）。肝臟蘇木精-伊紅染色及油紅O染色結(jié)果提示，HH組肝臟空泡形成及脂質(zhì)沉積最明顯，其次為HC組、CH組（圖4）。HC組、CH組、HH組肝臟脂質(zhì)代謝關(guān)鍵基因FASN、SREBP1c、PPARα的mRNA水平較CC組顯著增加（P＜0.05）；HH組FASN、SREBP1c的mRNA水平較HC組、CH組顯著增加（P＜0.05）（表8）。HC組、CH組、HH組FASN、SREBP1c、PPARα蛋白表達(dá)水平均較CC組顯著升高，且HH組SREBP1c蛋白表達(dá)水平較HC組、CH組顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)圖3和表9。

圖3 Western blot檢測(cè)各組生后12周仔鼠肝臟糖脂代謝相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖

圖4 各組生后12周仔鼠肝臟病理改變（×200） 肝臟蘇木精-伊紅染色提示HH組肝細(xì)胞空泡增多，脂肪變性最明顯，其次為HC組、CH組；油紅O染色提示HH組肝臟脂質(zhì)沉積最嚴(yán)重（脂滴被染為紅色），其次為HC組、CH組。

表9 各組生后12周仔鼠肝臟糖脂代謝相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（n=3，xˉ±s）

3 討論

在代謝研究中，干預(yù)的時(shí)機(jī)不同，可導(dǎo)致后代不同的表型。Zhao等［7］分別在孕期和哺乳期應(yīng)用高脂飼料喂養(yǎng)ICR小鼠，探究分娩前后母鼠飲食的差異對(duì)子代的不同影響，研究發(fā)現(xiàn)，哺乳期高脂飲食組的雄性仔鼠生后21 d的肝臟TG含量較孕期高脂飲食組顯著增加。Choi［12］研究了斷奶前后母鼠和子代的飲食調(diào)整對(duì)子代成年后肥胖、胰島素抵抗等的影響，研究發(fā)現(xiàn)，斷奶前母鼠的高脂飲食和斷奶后子代的高脂飲食通過(guò)下丘腦促食欲基因的表達(dá)增加導(dǎo)致子代肥胖和胰島素抵抗，斷奶后的飲食調(diào)整可部分改善此作用。以上研究分別探討了分娩前后、斷奶前后母鼠或子代的高脂飲食對(duì)子代的影響，鑒于孕前、孕期、哺乳期母體肥胖對(duì)子代代謝的獨(dú)立編程作用，本研究重點(diǎn)討論了懷孕前后飲食的不同對(duì)子代糖脂代謝的影響。

由于SD大鼠體型適中便于取材，給予SD大鼠高脂飲食易構(gòu)建出與人類肥胖發(fā)生過(guò)程相似的肥胖模型，故本研究中使用SD大鼠進(jìn)行模型的構(gòu)建。妊娠期肥胖包括孕前肥胖和孕期增重過(guò)多［13］。本研究中，孕前給予高脂飲食6周的SD母鼠，較正常飲食的母鼠，孕前體重明顯增加；孕前正常飲食或高脂飲食的母鼠，孕期給予高脂飲食，其孕期增重較正常飲食組顯著增加，說(shuō)明三種方式均可成功構(gòu)建妊娠期肥胖動(dòng)物模型。為闡明懷孕前后的高脂飲食干預(yù)對(duì)子代糖脂代謝的影響，本研究在孕前、孕期哺乳期對(duì)SD大鼠進(jìn)行高脂飼料喂養(yǎng)，并選取幼年期、成年期的仔鼠進(jìn)行糖脂代謝研究。研究發(fā)現(xiàn)孕前、孕期哺乳期全程高脂飲食對(duì)子代糖脂代謝影響最大；僅孕前高脂飲食或孕期哺乳期高脂飲食對(duì)子代的影響在本研究中未見(jiàn)差異；孕前高脂飲食的大鼠，即使孕期哺乳期更換為正常飲食，其對(duì)子代的不利影響仍然存在；高脂飲食對(duì)子代糖脂代謝的影響考慮與糖脂代謝基因的表達(dá)改變有關(guān)。目前較少有研究強(qiáng)調(diào)妊娠不同時(shí)期的飲食干預(yù)對(duì)子代代謝的不同影響，本研究不僅對(duì)不同時(shí)期高脂飲食對(duì)子代的糖脂代謝影響進(jìn)行了比較，而且選取了不同時(shí)期的子代進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，本研究為后期進(jìn)一步進(jìn)行妊娠期肥胖相關(guān)的機(jī)制研究提供了重要依據(jù)。

本研究中，HC組、CH組子代斷奶時(shí)僅表現(xiàn)出脂代謝異常，成年后出現(xiàn)糖代謝異常，提示高脂飲食母鼠子代出現(xiàn)糖代謝異常的時(shí)間晚于脂代謝。GTT和ITT分別用于評(píng)估葡萄糖耐量和胰島素敏感性，AUC的增加表明葡萄糖耐量受損和胰島素敏感性下降。HOMA-IR亦被用來(lái)評(píng)估胰島素敏感性，主要預(yù)測(cè)肝臟胰島素敏感性，而ITT代表全身胰島素敏感性［14-15］。胰島素是體內(nèi)唯一的降血糖激素，促進(jìn)糖原生成，減少糖原分解，加速糖酵解，并抑制糖異生。胰島素抵抗是Ⅱ型糖尿病、代謝綜合征等多種慢性病的基礎(chǔ)，其特征是肝臟和骨骼肌等對(duì)胰島素的反應(yīng)減弱［16-17］。在胰島素抵抗初期，胰島β細(xì)胞分泌胰島素代償性增加，導(dǎo)致高胰島素血癥，使血糖維持在正常水平。隨著胰島素抵抗的進(jìn)展，胰島素水平急劇下降，機(jī)體對(duì)胰島素的反應(yīng)性減弱，從而出現(xiàn)高血糖［18］。IR/IRS/AKT是經(jīng)典的胰島素受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在糖代謝中發(fā)揮重要作用。胰島素激活I(lǐng)R酪氨酸激酶，從而磷酸化IRS，酪氨酸磷酸化的IRS激活A(yù)KT，通過(guò)下游因子誘導(dǎo)糖原合成并抑制糖異生，從而發(fā)揮降血糖的作用［18-19］。IRS總蛋白減少，絲氨酸磷酸化蛋白增加，p-AKT蛋白減少是胰島素抵抗的典型特征［20-21］。本研究中，妊娠期肥胖的子代后期均出現(xiàn)不同程度的糖代謝異常，考慮與胰島素通路基因IR、IRS、AKT的表達(dá)改變有關(guān)。

本研究中，高脂飲食組子代在斷奶時(shí)、成年后均表現(xiàn)出脂代謝異常，表現(xiàn)為肝臟TG、TC含量升高。TG是由長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。FASN利用乙酰輔酶A作為引物，丙二酰輔酶A作為雙碳供體，NADPH作為還原等價(jià)物，將碳水化合物轉(zhuǎn)化為長(zhǎng)鏈脂肪酸，是脂肪酸從頭合成中的重要調(diào)節(jié)酶［22］。SREBP1c是脂肪酸從頭合成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)上調(diào)肝臟中參與脂肪酸合成的關(guān)鍵基因的mRNA水平，轉(zhuǎn)錄激活脂肪酸合成所需的一系列酶［23-24］。PPARα是一種在肝臟中高度表達(dá)的配體激活的核受體，參與脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)等基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用［25］。本研究中，高脂飲食組子代斷奶時(shí)及成年后肝臟FASN、SREBP1c、PPARα的mRNA及其蛋白表達(dá)水平均高于正常飲食組，高脂飲食導(dǎo)致子代肝臟脂質(zhì)沉積加重，考慮與FASN、SREBP1c、PPARα介導(dǎo)的脂質(zhì)代謝相關(guān)。其深入機(jī)制還有待進(jìn)一步探討，可能與營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩的宮內(nèi)環(huán)境誘導(dǎo)的表觀遺傳學(xué)調(diào)控有關(guān)，如DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA等［26］。

本研究中，雖然HC組與CH組相比，不同時(shí)期的子代糖脂代謝水平未見(jiàn)顯著性差異，但不能證明孕前高脂飲食與孕期哺乳期高脂飲食相比，其對(duì)子代健康的影響無(wú)差異。有研究應(yīng)用自助餐飲食誘導(dǎo)母鼠孕前肥胖，并研究了孕前肥胖和孕期自助餐喂養(yǎng)對(duì)胎鼠的獨(dú)立影響，結(jié)果證明母鼠的肥胖狀態(tài)和孕期的自助餐喂養(yǎng)對(duì)子代有獨(dú)立的影響［27］。該研究應(yīng)用多樣性自助餐飲食干預(yù)Wistar大鼠，與本研究中結(jié)果的不一致，可能與動(dòng)物品系、飼料類型等不同有較大關(guān)系。由于本研究?jī)H選取了幼年期、成年期兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，且每組大鼠數(shù)量有限，尚需增加觀察時(shí)間，擴(kuò)大樣本數(shù)目加以驗(yàn)證。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。