鮮天麻及其不同炮制品有效成分含量比較

唐文文 王丹丹 沈易華

(銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 銅仁 554300)

天麻(Gastrodia elata Bl.)，又名赤箭、離母、神草、定風(fēng)草等，是蘭科多年生異養(yǎng)寄生型草本植物，具有息風(fēng)止痙、平抑肝陽(yáng)、祛風(fēng)通絡(luò)的功效[1]，為我國(guó)傳統(tǒng)名貴大宗中藥材。在西南地區(qū)的天麻主產(chǎn)區(qū)均有鮮食天麻的歷史，主要食用方法為做菜、燉肉、煮火鍋等。天麻因其營(yíng)養(yǎng)成分高，具有多種醫(yī)療保健功效，將越來(lái)越受到關(guān)注。天麻也將從炮制品應(yīng)用模式轉(zhuǎn)化為鮮天麻與炮制品共同應(yīng)用模式。本研究以天麻多糖、天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛為指標(biāo)成分，對(duì)鮮天麻及不同炮制品天麻進(jìn)行差異性分析，為鮮天麻及不同炮制品的合理利用提供指導(dǎo)。

1 材料與試劑

1.1 材料

試驗(yàn)用天麻于2020年11月中旬采之于貴州省德江縣天麻種植區(qū)，經(jīng)銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院梁玉勇教授鑒定為蘭科植物天麻(Gastrodia elata Bl.)。

1.2 儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀(安捷倫有限公司)；UV-1801紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京瑞麗分析儀器有限公司)；Kromasil-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；天麻素(批號(hào)：110807-202010，純度以95.5%計(jì))購(gòu)自于中國(guó)食品藥品檢定研究院；對(duì)羥基苯甲醇(批號(hào)：H21D6Q7813，純度≥98%)、對(duì)羥基苯甲醛(批號(hào)：Y02J7C15574，純度≥99%)均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；甲醇、乙腈(色譜純，美國(guó)TEDIA)；葡萄糖對(duì)照品(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

2 方法

2.1 樣品處理方法

選擇大小均一的鮮天麻(100 g～150 g)，鮮天麻及其不同炮制品制備工藝見(jiàn)表1，制備后，抽真空包裝，儲(chǔ)存于4 ℃冰箱，直至分析。

表1 試驗(yàn)處理設(shè)置表

2.2 天麻多糖的含量測(cè)定

天麻多糖：采用硫酸-苯酚法，參考楊天友等[2]的方法進(jìn)行，以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)、吸光度值為縱坐標(biāo)(Y)繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為 Y=0.0081X-0.0039，R2=0.9994。供試品溶液的制備方法修改如下：分別精密稱取各樣品，加入樣品重100倍體積的95%乙醇浸泡過(guò)夜，過(guò)濾，等濾渣揮發(fā)至無(wú)醇味時(shí)，加入液料比50：1的純化水，密塞搖勻，稱定重量，超聲30 min，稱重，用蒸餾水補(bǔ)足減失重量，90 ℃水浴回流提取1.5 h，4000 r·min-1離心10 min，精密吸取上清液5 mL至10 mL于容量瓶，加水定容，搖勻即得。

2.3 酚類成分的含量測(cè)定[3-5]

2.3.1 色譜條件 Kromasil-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為 0.05%乙酸水(A)-乙腈(B)；梯度洗脫(0 min～25 min，97%～90%A；25 min～35 min，90%～80% A；35 min～46 min，80%～0 A；46 min～50 min，0～97% A)；體積流量1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng) 220 nm；柱溫 30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取各對(duì)照品適量，加10%甲醇配制成含天麻素4.725 mg·mL-1、對(duì)羥基苯甲醇1.994 mg·mL-1、對(duì)羥基苯甲醛2.502 mg·mL-1的混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。將混合對(duì)照品貯備溶液用10%甲醇稀釋25倍，得混合對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 FG樣品先切塊，然后利用勻漿機(jī)充分勻漿，使顆粒大小均勻；G1-G5各樣品粉碎后過(guò)3號(hào)篩，置精密稱取各樣品適量，置于具塞的錐形瓶中，按20：1的液料比加入稀乙醇溶液，搖勻稱重，超聲處理(200 W，40 kHz)40 min，放冷，再稱量質(zhì)量，用稀乙醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，濃縮至近干無(wú)醇味，殘?jiān)?10%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用10%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.25 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL置于25 mL容量瓶中，用10%甲醇溶液稀釋至刻度，制成一系列對(duì)照品溶液，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣量10 μL，測(cè)定各對(duì)照品峰面積。以峰面積(Y)對(duì)應(yīng)對(duì)照品的濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，天麻素Y=18107X-32.676 R2=0.9999，線性范圍：0.04725 mg·mL-1～0.756 mg·mL-1；對(duì)羥基苯甲醇Y=36854X-14.288 R2=0.9998，線性范圍：0.01994 mg·mL-1～0.319 mg·mL-1；對(duì)羥基苯甲醛Y=49776x + 170.57 R2=0.9997，線性范圍：0.02502 mg·mL-1～0.4003 mg·mL-1。

2.3.5 精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取上述混合對(duì)照品溶液10 μL，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，即得天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛峰面積的RSD均小于2.0%；取G5樣品供試品溶液，在0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h時(shí)，按上述色譜條件進(jìn)樣，按峰面積計(jì)算，天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛峰面積的RSD均小于2.0%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定；取E樣品按照供試品溶液的制備方法平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定含量，得天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛含量的RSD均小于3.0%。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量G5樣品粉末約1.0 g，共6份，精密稱定，分別精密加入天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法處理，再按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，得天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛的回收率在98.6%～102.5%之間，RSD均小于3.0%。

2.3.7 樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液和不同處理的供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，分別記錄天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛的峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中3種物質(zhì)的含量。HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 天麻HPLC色譜圖：(1)為對(duì)照品(2)為樣品注：1.天麻素2.對(duì)羥基苯甲醇3.對(duì)羥基苯甲醛

3 結(jié)果與分析

3.1 鮮天麻及其不同炮制品多糖含量比較

天麻多糖是天麻中重要的活性成分之一，具有降壓、抗氧化、改善腦血流量、增強(qiáng)免疫、抗氧化等作用。鮮天麻及其不同炮制品多糖含量見(jiàn)圖2，由圖2可知，采用蒸制后“發(fā)汗”加工的天麻炮制品多糖含量最高，為27.67%，顯著高于其他樣品，應(yīng)該是由于天麻在“發(fā)汗”過(guò)程中其復(fù)雜苷類成分水解釋放出葡萄糖[6]；直接烘干和蒸后烘干多糖含量次之，分別為23.78%和24.59%；水煮后烘干和明礬水浸泡的樣品天麻多糖顯著低于其他樣品，僅為16.98%和18.29%，應(yīng)該是天麻采用這兩種工藝炮制過(guò)程中與水接觸過(guò)多，從而造成了天麻多糖在天麻水煮和明礬水浸泡過(guò)程中部分溶解造成其含量降低；鮮天麻的多糖含量為21.33%，應(yīng)該跟鮮天麻在等待測(cè)試過(guò)程中在4℃冰箱中保存時(shí)間過(guò)久有關(guān)。

圖2 鮮天麻及其不同炮制品多糖含量(x±s，n=6)注：小寫字母不同表示差異顯著(p<0.05)。

3.2 鮮天麻及其不同炮制品天麻素及其苷元含量對(duì)比

《中國(guó)藥典》[1]把天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量作為判定天麻質(zhì)量?jī)?yōu)劣的主要指標(biāo)，規(guī)定天麻中兩者的總含量不得少于0.25%。由表2可以看出不同炮制品之間天麻素及其苷元對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛差異顯著，天麻素含量最高的為蒸制后“發(fā)汗”樣品，為8.83 mg·g-1，應(yīng)該是由于通過(guò)“發(fā)汗”過(guò)程中的一些酶促反應(yīng)，一部分對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛和巴利森苷類再次轉(zhuǎn)化成了天麻素；直接烘干的天麻素含量顯著低于其他樣品，僅為0.78 mg·g-1，但其對(duì)羥基苯甲醇和對(duì)羥基苯甲醛含量顯著高于其他樣品，其中對(duì)羥基苯甲醇高達(dá)9.63 mg·g-1，推測(cè)由于天麻未經(jīng)殺青，在低溫干燥過(guò)程中，酶活性一直較強(qiáng)，天麻體內(nèi)發(fā)生著極活躍的酶解反應(yīng)，天麻素被酶解成對(duì)羥基苯甲醇和對(duì)羥基苯甲醛，天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量呈現(xiàn)基本相反的趨勢(shì)，即天麻素的含量高的話，對(duì)羥基苯甲醇含量將減少，反之亦然；由表2可知，鮮天麻的天麻素含量也較低，為1.156 mg·g-1，但其對(duì)羥基苯甲醇的含量達(dá)5.32 mg·g-1，經(jīng)蒸制和煮制殺青處理后天麻素含量顯著升高，對(duì)羥基苯甲醇含量顯著降低；另外水煮炮制品和明礬浸泡處理后天麻素的含量也降低，跟天麻素是苷類化合物易溶于水的性質(zhì)有關(guān)。

表2 鮮天麻及其不同炮制品天麻素及其苷元含量(ˉx±s，n=6)

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)比鮮天麻及其不同炮制品中多糖、天麻素及其苷元的含量，發(fā)現(xiàn)鮮天麻及其不同炮制品主要功效成分含量存在顯著差異，其中以采用蒸制后“發(fā)汗”再烘干的樣品天麻多糖和天麻素含量均為最高，說(shuō)明“發(fā)汗”處理對(duì)天麻有效成分具有一定的良性影響，且“發(fā)汗”可以增加天麻體內(nèi)部水分?jǐn)U散速率，減少內(nèi)部水分在天麻體中的滯留，加速天麻干燥速率，可根據(jù)需要應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中?！鞍l(fā)汗”過(guò)程中的溫度、次數(shù)、含水量等因素對(duì)藥材品質(zhì)是否也有影響，圍繞“發(fā)汗”過(guò)程與天麻品質(zhì)形成的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題將在后續(xù)試驗(yàn)中進(jìn)行，鮮天麻中和直接干燥天麻中對(duì)羥基苯甲醇含量最高，可根據(jù)所需目標(biāo)成分有選擇性的使用，但要注意，鮮天麻因酶活性高，有效成分降解快，采挖后應(yīng)及時(shí)加工炮制。