貓毛滴蟲(chóng)病研究進(jìn)展

潘勁超，張 恒，李惠虹，鄭克雷，薄震宇，任 琦，黃佳敏，方 追，劉欣超，顧有方，李文超

(安徽科技學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)調(diào)控與健康安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽鳳陽(yáng) 233100)

毛滴蟲(chóng)是一類(lèi)屬于副基體門(mén)的原蟲(chóng)，以寄生或共生形式、厭氧生活在宿主胃腸道或生殖道，多有3根～5根前鞭毛、氫酶體、副基體及復(fù)雜的細(xì)胞骨架等結(jié)構(gòu)[1-2]。貓毛滴蟲(chóng)感染已報(bào)道的蟲(chóng)種有寄生于貓腸道的胎兒三毛滴蟲(chóng)(Tritrichomonasfoetus)和人五毛滴蟲(chóng)(Pentatrichomonashominis)及寄生于貓口腔中的口腔毛滴蟲(chóng)(Trichomonastenax)、布里克西毛滴蟲(chóng)(Trichomonasbrixi)和貓四毛滴蟲(chóng)(Tetratrichomonasfelistomae)等[2-3]。T.foetus是引起貓毛滴蟲(chóng)病的病原，臨床上以慢性大腸性腹瀉為特征[4]。分子分析顯示牛和貓T.foetus分離株在遺傳上有一定差異，分屬于T.foetus的“牛基因型”和“貓基因型”[4-5]。貓作為伴侶動(dòng)物，與人接觸密切，這引發(fā)了人們關(guān)于貓是否可引起毛滴蟲(chóng)人獸共患傳播風(fēng)險(xiǎn)的擔(dān)憂。

1 發(fā)現(xiàn)歷史

貓毛滴蟲(chóng)的研究可追溯到20世紀(jì)20年代，Da Cunha A M和Muniz J將其命名為貓毛滴蟲(chóng)(Trichomonasfelis)。1996年,Romatowski J基于光鏡觀察，把貓糞中的滴蟲(chóng)鑒定為P.hominis；2001年Levy MG首次用分子方法證實(shí)T.foetus才是貓滴蟲(chóng)性腹瀉的真正病原[6-7]。

2 病原與生活史

毛滴蟲(chóng)僅有滋養(yǎng)體階段，通過(guò)縱二分裂進(jìn)行繁殖，不同蟲(chóng)種滋養(yǎng)體形態(tài)相似，均呈紡錘形或淚滴狀，具特定數(shù)量的前鞭毛和1 根與波動(dòng)膜邊緣連接的后鞭毛，蟲(chóng)體運(yùn)動(dòng)活潑[1]。其中，T.foetus有3根前鞭毛，P.hominis有5根前鞭毛，T.tenax有4根前鞭毛。目前認(rèn)為貓T.foetus主要經(jīng)糞-口途徑傳播，而寄生于口腔的毛滴蟲(chóng)通過(guò)飛沫或接觸傳播[3,6,9]。

3 致病性

3.1 胎兒三毛滴蟲(chóng)

貓毛滴蟲(chóng)病作為一種新發(fā)的貓胃腸道疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不明確。自然感染情況下，T.foetus主要定植在黏膜表面，并與盲腸和結(jié)腸的表面上皮接觸。人工感染試驗(yàn)可觀察到蟲(chóng)體定植在貓回腸末端、盲腸和結(jié)腸。體外研究表明，T.foetus可經(jīng)特異性配體-受體互作直接黏附在單層腸上皮細(xì)胞上[10]。半胱氨酸蛋白酶似乎可介導(dǎo)蟲(chóng)體在腸黏膜上皮的黏附和細(xì)胞毒作用，未來(lái)可作為改善該病臨床癥狀的治療目標(biāo)[11]。

3.2 口腔毛滴蟲(chóng)

T.tenax感染多見(jiàn)于口腔衛(wèi)生較差或具牙周疾病的人群[3]。雖然T.tenax具較高蛋白水解活性，可破壞寄生部位黏膜和組織，但普遍認(rèn)為其與宿主是一種共生關(guān)系[9]。

4 臨床癥狀

貓毛滴蟲(chóng)病臨床癥狀多變，感染較輕時(shí)呈亞臨床癥狀，嚴(yán)重感染時(shí)出現(xiàn)慢性頑固性腹瀉。人工口服攻蟲(chóng)后，貓可出現(xiàn)慢性或間歇性腹瀉，糞便呈半成形，半流質(zhì)或液態(tài)，黃綠色，惡臭，有時(shí)有糞便帶血、黏液，大便失禁、里急后重，腸胃脹氣等癥狀，可持續(xù)2 d～7 d。嚴(yán)重感染病例，會(huì)出現(xiàn)明顯肛門(mén)炎癥和直腸脫垂等[1,6]。上述臨床癥狀多呈間歇性，在使用藥物治療后好轉(zhuǎn)，停藥后可復(fù)發(fā)[12]。

5 流行

5.1 貓腸道毛滴蟲(chóng)

貓T.foetus呈全球流行，貓T.foetus感染率為0～81.8%，見(jiàn)表1[6]。不同的研究者調(diào)查時(shí)采用的方法不盡相同，早期的調(diào)查多采用培養(yǎng)法和直接涂片鏡檢，近期多采用分子方法，一些國(guó)家僅有貓T.foetus病例報(bào)道，尚無(wú)貓群中T.foetus流行的相關(guān)數(shù)據(jù)可供參考[13]?，F(xiàn)有研究中，調(diào)查樣本來(lái)源多樣，如采集自腹瀉貓、參加會(huì)展的貓、寄養(yǎng)貓、或獸醫(yī)診所就診貓等，有的樣本有臨床癥狀，有的無(wú)臨床癥狀等，因此現(xiàn)有流行數(shù)據(jù)可能存在與此類(lèi)樣本、調(diào)查方法等相關(guān)聯(lián)的偏差[13]。一些早期病例報(bào)道中，曾把T.foetus誤判為P.hominis。近期關(guān)于貓P.hominis流行的報(bào)道也不多，目前僅見(jiàn)日本寵物店貓P.hominis感染率為0.5%(2/409)，國(guó)內(nèi)某動(dòng)物醫(yī)院門(mén)診貓P.hominis感染率為5.3%(3/57)，且存在T.foetus和P.hominis混合感染，混合感染率為3.5%(2/57)[15-16]。

表1 全球貓T.foetus流行情況

5.2 貓口腔毛滴蟲(chóng)

Kellerov P和Tachezy J[3]報(bào)道捷克貓T.tenax感染率為4.1%(5/111)，T.brixi感染率為6.6%(7/111)。Dybicz M等[5]報(bào)道波蘭貓T.tenax感染率為2.1%(3/142)。

6 診斷

常用的診斷毛滴蟲(chóng)病的方法有直接濕片鏡檢法、糞便培養(yǎng)法和PCR法。毛滴蟲(chóng)滋養(yǎng)體對(duì)環(huán)境較敏感，其診斷對(duì)糞便樣本有較高的要求。待分析糞便必須新鮮、無(wú)污染，且測(cè)試前不要冷凍。最好采集剛排出的新鮮糞便或用糞圈或結(jié)腸沖洗技術(shù)人工提取糞便[1,6,17]。如樣本需運(yùn)輸，可用鹽水(每2 g糞便用3 mL生理鹽水)稀釋?zhuān)乐垢稍镆匝娱L(zhǎng)毛滴蟲(chóng)存活時(shí)間。為提高檢測(cè)敏感性，糞便樣品最好在6 h內(nèi)分析完畢，如超過(guò)6 h，會(huì)降低檢測(cè)敏感性[1]。非腹瀉貓的糞便或干結(jié)糞便，不適合用于毛滴蟲(chóng)檢測(cè)，因即使存在感染，也很少會(huì)有陽(yáng)性結(jié)果。在貓服用抗生素的情況下采樣，會(huì)降低毛滴蟲(chóng)檢出率，因此在采樣前，最好提前幾天停用任何類(lèi)型的抗菌治療[1]。

6.1 直接濕片鏡檢法

將少量糞便用生理鹽水稀釋后，蓋上蓋玻片，置200×或400×鏡下檢查，即“濕片”法。觀察時(shí)，可根據(jù)滋養(yǎng)體形狀和運(yùn)動(dòng)特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)體，一旦蟲(chóng)體不運(yùn)動(dòng)或死亡，則很難檢出。該法操作簡(jiǎn)單、成本低，但檢測(cè)敏感度較低，其中人工感染貓檢出率低于2%，自然感染貓檢出率約4%。實(shí)踐中，可用新鮮、非冷藏(凍)和腹瀉貓糞便及多次涂片檢查等提高檢出率[6]。此外，該法不能區(qū)分T.foetus和P.hominis等不同毛滴蟲(chóng)蟲(chóng)種，同時(shí)因T.foetus滋養(yǎng)體大小與賈第蟲(chóng)包囊大小相似，容易混淆，鏡檢時(shí)要注意排除干擾。 對(duì)T.tenax，則直接取貓口腔刮取物，用生理鹽水稀釋、涂片后鏡檢。

6.2 糞便培養(yǎng)法

如糞便經(jīng)多次鏡檢仍為陰性，可用商業(yè)化的In Pouch TF培養(yǎng)基進(jìn)行蟲(chóng)體培養(yǎng)。該法僅需少量糞便(米粒大小即可)，敏感性比直接鏡檢高，自然感染貓檢出率約55%。因賈第蟲(chóng)不能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，可排除賈第蟲(chóng)包囊對(duì)結(jié)果的干擾[1]。但該法耗時(shí)較長(zhǎng)，需幾天時(shí)間讓蟲(chóng)體增殖以提高檢出率，且該法也不能區(qū)分不同毛滴蟲(chóng)蟲(chóng)種。此外，也可用Diamond或改良Diamond培養(yǎng)基等對(duì)糞便進(jìn)行培養(yǎng)后檢測(cè)。

6.3 PCR方法

目前，已發(fā)展了多種檢測(cè)貓毛滴蟲(chóng)的PCR方法，主要擴(kuò)增的靶基因?yàn)槊蜗x(chóng)5.8S rRNA的ITS1和ITS2區(qū)。最常用的方法是巢式PCR法，第一對(duì)引物為T(mén)FR3和TFR4(擴(kuò)增347 bp的片段)，第二對(duì)引物為T(mén)FITS-F和TFITS-R(擴(kuò)增208 bp的片段)[18]。已證實(shí)引物對(duì)Th3/Th5是P.hominis特異的，在其基礎(chǔ)上發(fā)展出的單輪和巢式PCR方法是較為常用的方法[22-23]。Kikuta N等[21]發(fā)展了一種特異檢測(cè)T.tenax的PCR方法。PCR方法的敏感性和特異性均優(yōu)于糞便培養(yǎng)法和直接濕片鏡檢法，所需時(shí)間比培養(yǎng)法短，且不要求必須是活蟲(chóng)體，死亡蟲(chóng)體也可檢測(cè)，可檢測(cè)至最低10個(gè)蟲(chóng)體/100 mg糞便[22]。但因糞便成分復(fù)雜，如多糖復(fù)合物、膽鹽、血紅蛋白降解產(chǎn)物、酚類(lèi)化合物和重金屬等PCR抑制劑常與蟲(chóng)體DNA共同提取，會(huì)降低檢測(cè)的敏感性，導(dǎo)致出現(xiàn)“假陰性”[6]。

6.4 組織病理學(xué)方法

組織病理學(xué)法可作為檢測(cè)腸組織中P.hominis/T.foetus滋養(yǎng)體的一種診斷方法，但因滋養(yǎng)體極其脆弱，很難保存在活檢標(biāo)本中，因此檢測(cè)結(jié)果并不準(zhǔn)確[6]。使用該法時(shí)，對(duì)同一樣本，需檢查至少6個(gè)組織切片，以獲得至少95%的置信度[1]。免疫組織化學(xué)、熒光原位雜交與顯色雜交技術(shù)也可應(yīng)用于組織標(biāo)本中毛滴蟲(chóng)的檢測(cè)，但不易推廣應(yīng)用。

7 治療

通常治療人陰道毛滴蟲(chóng)等腸道原蟲(chóng)的藥物，如甲硝唑和替硝唑，在治療貓毛滴蟲(chóng)病時(shí)效果不佳。羅硝唑(RDZ)是迄今唯一已證實(shí)對(duì)貓T.foetus有效的藥物，通常按每天20 mg/kg～30 mg/kg劑量口服，連用14 d[1]。在用RDZ治療期間，大多數(shù)感染貓的糞便稠度能快速改善，一般在治療2周后正常[1]。但一些結(jié)腸損傷嚴(yán)重的病例，治療數(shù)周腹瀉仍不見(jiàn)好轉(zhuǎn)。因從腸道徹底清除毛滴蟲(chóng)難度較大，用RDZ治療后，毛滴蟲(chóng)病可能會(huì)復(fù)發(fā)，但經(jīng)多次治療的貓可痊愈[23]。用芬苯達(dá)唑、帕羅霉素、替硝唑和甲硝唑等治療毛滴蟲(chóng)病時(shí)，治療期間，貓糞便狀況有所改善，但停藥后腹瀉經(jīng)常重現(xiàn)[6]。有報(bào)道顯示貓毛滴蟲(chóng)可對(duì)RDZ產(chǎn)生抗藥性，但感染貓群中抗藥性蟲(chóng)株的流行情況不甚清楚[24]。高劑量應(yīng)用RDZ，可使貓產(chǎn)生食欲減退、顫抖、虛弱、共濟(jì)失調(diào)和感覺(jué)過(guò)敏等副作用。因副作用的存在，只有在已明確確診為毛滴蟲(chóng)感染的病例、且已征得貓主人同意，才建議應(yīng)用RDZ治療[12]。

目前報(bào)道的其他治療貓毛滴蟲(chóng)病的方法較少。許多有效治療腹瀉的辦法如改變飲食，使用不同類(lèi)抗菌素、益生菌和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑等，對(duì)治療貓毛滴蟲(chóng)病效果均不明顯[25]。

8 預(yù)后

貓毛滴蟲(chóng)病的預(yù)后往往良好，感染T.foetus的貓仍可保持正常身體條件和生理狀態(tài)。88%的腹瀉貓，其糞便可在感染2年后自然恢復(fù)正常。平均腹瀉持續(xù)時(shí)間為135 d。然而，T.foetus感染很難自發(fā)消除，暗示貓很難對(duì)T.foetus感染產(chǎn)生有效的免疫反應(yīng)，約54%的貓存在持續(xù)感染或再次感染，或間歇性腹瀉反復(fù)發(fā)作等，推測(cè)可能與應(yīng)激或腸道菌群變化相關(guān)。此外，慢性感染可能會(huì)使部分貓發(fā)展為炎癥性腸病[6,12]。

鑒于貓毛滴蟲(chóng)病預(yù)后良好，當(dāng)感染發(fā)生后，治療與否成為一個(gè)必須抉擇的問(wèn)題。歐洲貓科疾病咨詢委員會(huì)推薦，僅當(dāng)腹瀉的貓經(jīng)直接濕片鏡檢和糞便培養(yǎng)后鏡檢為毛滴蟲(chóng)陽(yáng)性時(shí)，建議進(jìn)行治療[1]。很多貓感染后無(wú)臨床癥狀，但其可能成為潛在的傳染來(lái)源。因此，建議所有經(jīng)檢測(cè)毛滴蟲(chóng)陽(yáng)性的貓，無(wú)論有無(wú)癥狀，均應(yīng)進(jìn)行治療，以盡量減少該病的傳播。

9 預(yù)防

因應(yīng)激或免疫功能發(fā)育不成熟，在擁擠環(huán)境中飼養(yǎng)的小貓更易發(fā)生T.foetus感染。因此，減少應(yīng)激，避免密集飼養(yǎng)，以盡量減少接觸或感染T.foetus的機(jī)會(huì)。此外，應(yīng)對(duì)所有被T.foetus污染的貓舍、床、被褥、運(yùn)輸箱、垃圾箱等進(jìn)行徹底消毒，以殺死污染的滋養(yǎng)體[6,12]。

10 展望

貓毛滴蟲(chóng)病作為一種貓的新發(fā)傳染病，已引起獸醫(yī)界的關(guān)注。目前對(duì)該病的研究遠(yuǎn)未達(dá)到預(yù)期，尤其急需有效、安全的治療辦法。繼續(xù)開(kāi)展貓毛滴蟲(chóng)病的病原學(xué)、流行病學(xué)、傳播模式、致病性、人獸共患潛力等研究，有助于更全面的掌握其情況，從而為防控奠定基礎(chǔ)。