肺炎支原體抗體滴度和RNA病原檢測(cè)在兒童肺炎支原體肺炎診斷和治療中的應(yīng)用價(jià)值

林琳 應(yīng)媛媛

肺炎是臨床常見(jiàn)病癥之一，多見(jiàn)于兒童，支原體（Mp）感染是主要致病原因，在兒童社區(qū)獲得性肺炎（CAP）中占比高達(dá)10%～32%，且地區(qū)性爆發(fā)流行時(shí)可達(dá)到55%～80%，對(duì)患者危害極大[1]。由于Mp感染而引起的兒童肺炎，與其他病原體所引起的感染疾病在影像學(xué)、體征及癥狀等方面具有相似性，難以準(zhǔn)確區(qū)分，因此，實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)成為兒童支原體肺炎（Mpp）的有效診斷方法之一[2]。對(duì)于血清學(xué)檢測(cè)Mp感染的診斷方法，臨床常用肺炎支原體抗體滴度檢測(cè)，而RNA實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（SAT）可對(duì)RNA病原準(zhǔn)確檢測(cè)，研究發(fā)現(xiàn)，兩種方法聯(lián)合檢測(cè)具有較高的準(zhǔn)確率[3]。本次選取442例患兒，研究?jī)和疢pp診治中肺炎Mp抗體滴度與RNA病原檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取我院于2018年1月～2020年12月診治的442例CAP患兒為研究對(duì)象，以實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果為依據(jù)，分為支原體肺炎組（M組）和非支原體肺炎組（非M組），分別為312例、130例。M組患兒納入標(biāo)準(zhǔn)：①均出現(xiàn)呼吸道感染癥狀，以干咳、發(fā)熱等為主，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查確診為Mpp；②急性期、恢復(fù)期雙份血清抗體滴度升高≥4倍或單次血清抗體滴度≥1∶160；③資料完整；④家長(zhǎng)簽署知情同意書。非M組患兒納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床確診為非Mpp的其他肺炎類型；②復(fù)查結(jié)果顯示血清Mp抗體滴度≤1∶80；③資料完整；④家長(zhǎng)簽署知情同意書。排除合并精神疾病者、中途退出者及合并血液系統(tǒng)疾病者。以入院前是否使用大環(huán)內(nèi)酯類藥物為依據(jù)，將M組患兒分為使用組（規(guī)律用藥>3d）和未使用組（未用藥及用藥≤3d）。入組病例中，M組男173例，女139例，年齡1～16歲，平均（5.16±2.45）歲。非M組男72例，女58例，年齡8個(gè)月～11歲，平均（5.01±2.51）歲。兩組資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。本研究獲倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 抗體滴度檢測(cè) Mp抗體檢測(cè)試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供，采用顆粒凝集法測(cè)定抗體滴度，分別設(shè)置為<1∶40、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、>1∶640。

1.2.2 Mp-RNA檢測(cè) Mp核酸檢測(cè)試劑盒由上海仁度生物科技有限公司提供，于患兒入院當(dāng)天采集咽拭子，并放置于生理鹽水中，將等量裂解液加入，制作成待測(cè)樣本。加入內(nèi)標(biāo)后，應(yīng)用磁珠法對(duì)靶標(biāo)RNA進(jìn)行提取，對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)液進(jìn)行配置后應(yīng)用核酸擴(kuò)增儀測(cè)定。采用4支Mp-RNA標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行定量分析。

1.3 觀察指標(biāo)①對(duì)比兩組抗體滴度分布情況及Mp-RNA檢測(cè)結(jié)果；②分析M組Mp-RNA與抗體滴度檢測(cè)結(jié)果；③分析M組不同檢測(cè)方法對(duì)陽(yáng)性率的影響因素；④分析不同檢測(cè)方法對(duì)不同病程患兒的檢測(cè)結(jié)果；⑤分析Mp-RNA檢測(cè)在Mpp療效評(píng)估及短期復(fù)發(fā)診斷中的意義。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 19.0軟件分析，計(jì)量、計(jì)數(shù)資料分別用±s、%表示，分別經(jīng)t、χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Mp-RNA檢測(cè)結(jié)果及抗體滴度分布對(duì)比M組抗體滴度陰性（<1∶160）64例，占比20.51%；陽(yáng)性（≥1∶160）248例，占比79.49%。抗體滴度陽(yáng)性率隨病程增加呈升高趨勢(shì)，Mp-RNA陽(yáng)性率隨抗體滴度升高呈下降趨勢(shì)；于4～6d后復(fù)查，抗體滴度<1∶160患者的滴度均升高≥4倍；以抗體滴度1∶160為截點(diǎn)分組，Mp-RNA陽(yáng)性率比較，<1∶160組（90.63%）高于>1∶160組（72.85%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.810，P<0.05）。于4～6d后復(fù)查結(jié)果顯示，非M組有5例Mp-RNA陽(yáng)性，占比為3.85%，見(jiàn)表1。

表1 兩組Mp-RNA結(jié)果及抗體滴度分布

2.2 M組Mp-RNA與抗體滴度檢測(cè)結(jié)果對(duì)比M組抗體滴度陽(yáng)性率（≥1∶160）為79.49%（248/312），Mp-RNA陽(yáng)性率為77.24%（241/312），未見(jiàn)明顯差異（χ2=0.463，P>0.05）。兩種檢測(cè)方法陽(yáng)性一致率為58.65%（183/312），陰性一致率為1.92%（6/312），見(jiàn)表2。

表2 M組Mp-RNA與抗體滴度檢測(cè)結(jié)果比較（n）

2.3 M組不同方法檢測(cè)陽(yáng)性率的影響因素與<3歲組、>10歲組比較，4～6歲組與7～9歲組兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率均更高，但整體年齡分組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與病程較短組比較，病程較長(zhǎng)組的抗體滴度陽(yáng)性率更高，Mp-RNA陽(yáng)性率更低（P<0.05）；入院前藥物使用對(duì)兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表3。M組入院時(shí)Mp-RNA檢測(cè)為陰性共73例，其中14例患兒于3～7d后復(fù)查，12例復(fù)查結(jié)果為陰性，2例轉(zhuǎn)陽(yáng)性。

表3 M組不同方法檢測(cè)陽(yáng)性率的影響因素

2.4 不同檢測(cè)方法對(duì)不同病程患兒的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用單一方法檢測(cè)時(shí)，病程較長(zhǎng)組抗體滴度陽(yáng)性率較高，而病程較短組Mp-RNA陽(yáng)性率較高。聯(lián)合檢測(cè)以任意一種陽(yáng)性結(jié)果為感染判斷標(biāo)準(zhǔn)，除4～7d組陽(yáng)性率為95.71%，其余病程組陽(yáng)性率均為100%。8～14d組兩種檢測(cè)方法均陽(yáng)性率最高，其次是4～7d組，見(jiàn)表4。

表4 不同病程組不同檢測(cè)方法的陽(yáng)性率比較[n（%）]

2.5 Mp-RNA檢測(cè)在Mp療效評(píng)估及短期復(fù)發(fā)診斷中的意義M組78例患兒入院Mp-RNA結(jié)果為陽(yáng)性，住院時(shí)間為（6.63±2.31）d，期間規(guī)范用阿奇霉素，于出院當(dāng)天復(fù)查，結(jié)果顯示，Mp-RNA轉(zhuǎn)陰27例（34.62%），轉(zhuǎn)陰患兒入院前大環(huán)內(nèi)酯類藥物服用時(shí)間為（4.32±3.01）d。Mp-RNA定量檢測(cè)結(jié)果顯示，83.33%（65/78）的患兒復(fù)查結(jié)果下降，拷貝數(shù)下降至原來(lái)的16.8%；51例未轉(zhuǎn)陰者首次測(cè)定RNA拷貝數(shù)高于轉(zhuǎn)陰者；43.14%（22/51）的患兒首次拷貝數(shù)>106拷貝數(shù)/ml，轉(zhuǎn)陰組為25.93%（7/27）。

M組中29例患兒出院后1個(gè)月再次入院，首次診斷Mpp與再次入院時(shí)間間隔為（18.29±7.98）d， 首次入院抗體陽(yáng)性率為62.07%（18/29），Mp-RNA陽(yáng)性率為86.21%（25/29），再入院時(shí)抗體陽(yáng)性率為100%，且抗體滴度均>1∶640，Mp-RNA陽(yáng)性率為27.59%（8/29）。

3 討論

Mp是目前已知獨(dú)立生活最小的一種病原微生物，可由鼻、喉、咽等吸入氣溶膠或飛沫等進(jìn)行傳播，人群普遍易感，多見(jiàn)于學(xué)齡兒童、青少年等，以5～10歲為高發(fā)年齡。兒童一旦感染Mp，依據(jù)身體情況不同可出現(xiàn)不同臨床癥狀，且癥狀輕重程度具有一定差異，多數(shù)以高熱為主要表現(xiàn)，體溫可達(dá)到39℃，也有部分患兒無(wú)發(fā)熱，但多見(jiàn)咳嗽、咳痰等，偶見(jiàn)惡心、斑丘疹及嘔吐等癥狀。Mp侵入呼吸道后，可附著于上皮細(xì)胞，對(duì)黏膜纖毛的清除作用產(chǎn)生抵抗，進(jìn)而引起機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷呼吸道上皮[4～6]。以往，臨床多采用X線、CT等診斷兒童Mpp，但準(zhǔn)確度較差，且患兒配合度不高。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，Mp抗體滴度、RNA抗原檢測(cè)等均得到廣泛應(yīng)用，不僅能早期診斷兒童Mpp，還可用于治療及復(fù)發(fā)評(píng)估，應(yīng)用價(jià)值較高[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，M組Mp-RNA陽(yáng)性率、抗體滴度陽(yáng)性率均高于75%，提示兩種方法單一檢測(cè)，可取得相近的診斷效率，對(duì)于疾病診斷具有較高的準(zhǔn)確度。相較于病程較短組，病程較長(zhǎng)組抗體滴度陽(yáng)性率明顯更高，而抗體滴度為1∶160患兒的平均病程為5.89d，提示對(duì)于發(fā)病時(shí)間為1～7d患兒，單次抗體滴度檢測(cè)結(jié)果為1∶160進(jìn)行診斷，可能存在一定假陰性情況，需聯(lián)合病原檢測(cè)，以提高診斷準(zhǔn)確性。首次抗體滴度檢測(cè)結(jié)果為≤1∶80的M組患者，4～6d后可見(jiàn)抗體滴度升高，而非M組患兒未見(jiàn)明顯升高，提示Mp感染后，對(duì)于免疫力正常的兒童來(lái)說(shuō)，短時(shí)間內(nèi)可出現(xiàn)抗體滴度明顯升高情況，由此，應(yīng)用雙份血清對(duì)兒童Mpp進(jìn)行診斷，可提高診斷準(zhǔn)確度。同時(shí)，對(duì)于首次抗體滴度檢測(cè)結(jié)果較低患兒，考慮可能處于Mp感染早期，機(jī)體內(nèi)抗體仍然處于上升期或尚未產(chǎn)生抗體，應(yīng)當(dāng)結(jié)合病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果、臨床癥狀及抗體滴度變化情況等進(jìn)行綜合診 斷[8]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，29例再次入院患兒的首次入院Mp-RNA陽(yáng)性率為86.21%，明顯高于M組平均值，而復(fù)查未轉(zhuǎn)陰患兒的早期Mp-DNA定量檢測(cè)結(jié)果也高于轉(zhuǎn)陰組，提示PCR病原學(xué)檢測(cè)中，早期載量高、早期陽(yáng)性等均與疾病程度密切相關(guān)，可作為兒童Mpp重癥病例的預(yù)警判斷因素。分析原因，SAT屬于新型分子生物學(xué)檢測(cè)方法的一種，相較于傳統(tǒng)PCR檢測(cè)方法，其診斷準(zhǔn)確度、敏感度均更高[9]。RNA僅在活菌體中存在，自身免疫、用藥等均可導(dǎo)致病原體死亡，或?qū)ζ浠钚援a(chǎn)生抑制，RNA降解、載量由此降低，因此對(duì)Mp-RNA進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于兒童Mpp的診斷、治療、轉(zhuǎn)歸等均有較高的價(jià)值。早期進(jìn)行PCR病原學(xué)檢測(cè)，有利于指導(dǎo)臨床合理制定治療方案[10]。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)Mp抗體滴度及RNA病原，可為臨床診斷兒童Mpp及治療提供可靠依據(jù)。