氰化物中毒犬只樣品采樣要點(diǎn)

徐玲萍，程文聰，張芳芳

（臺(tái)州市食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，浙江臺(tái)州 318000）

一些地區(qū)有吃狗肉的習(xí)俗，隨著越來(lái)越多的狗肉被消費(fèi)，市場(chǎng)上也有一些非法的狗肉來(lái)源，如用毒物撲殺的犬只。氰化物是一種速殺型毒物，氫氰酸口服致死量為0.06 g，氰酸鹽為0.1～0.3 g。氰化物進(jìn)入人體內(nèi)能迅速與細(xì)胞色素氧化酶中的3價(jià)鐵結(jié)合，組織細(xì)胞無(wú)法利用血液中的氧而造成內(nèi)窒息。中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)缺氧尤為敏感，氰化物中毒的犬表現(xiàn)為不同程度的中樞性呼吸衰竭癥狀。犬只吸入高濃度的氰化氫氣體或吞服大量氰化物，可在數(shù)s至5 min內(nèi)停止呼吸，呈“電擊樣”死亡[1]。由于其快速高效，氰化物常常被用作撲殺犬只的主要毒物。氰化物在動(dòng)物、人體內(nèi)不易被分解，人食用被氰化物毒害的狗肉后，輕則出現(xiàn)頭痛、頭昏、惡心嘔吐、食欲不振等中毒癥狀，嚴(yán)重的會(huì)因全身功能衰竭而死亡[2]。因而在對(duì)犬只的氰化物檢驗(yàn)中應(yīng)該執(zhí)行最為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測(cè)規(guī)定。然而樣本的有效性是所有檢驗(yàn)工作的前提和基礎(chǔ)。制定取樣計(jì)劃時(shí)，必須考慮檢測(cè)的目的、樣本的性質(zhì)、檢測(cè)方法的特點(diǎn)等。取樣程序應(yīng)該準(zhǔn)確規(guī)范，選用適宜的取樣工具，熟練掌握取樣操作技術(shù)，有效防止交叉污染。樣本的運(yùn)輸和保存應(yīng)該考慮周全，避免檢測(cè)目標(biāo)物的損失或失效，做好正確的標(biāo)識(shí)和記錄[3]。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

分光光度計(jì)（UV2600島津）；電子天平（奧豪斯，SA223S-CW）；移液槍（Eppendorf，1～5 mL），冰箱。

1.2 材料與試劑

（1）異煙酸-吡唑啉酮。稱取1.5 g異煙酸溶于24 mL氫氧化鈉（20 g/L）溶液中，加水定容至100 mL，另取0.25 g吡唑啉酮，溶于20 mL無(wú)水乙醇中，合并上述兩種溶液，搖勻。

（2）氯胺T。稱取1 g氯胺酮溶于水中，稀釋至100 mL。

（3）磷酸鹽緩沖溶液。稱取34.0 g無(wú)水磷酸二氫鉀和35.5 g無(wú)水磷酸氫二鈉，溶于水并稀釋至1 000 mL[4]。

乙酸、氫氧化鈉、乙酸鋅、酒石酸均為分析純。

1.3 樣品的制備

犬1、犬2、犬3、犬4、犬5和犬6共6條氰化物中毒犬只為本次實(shí)驗(yàn)對(duì)象。解剖犬只，取每一只犬的舌頭、胃、犬大腿肌肉、肝臟等5個(gè)部位的組織，依次分別勻漿，共形成30個(gè)樣品，馬上測(cè)定其氰化物的含量，并留取中毒犬只胃及其內(nèi)容物樣品待用。

稱取上述6條中毒犬只的胃及其內(nèi)容物樣品，每份5 g，分裝至試管內(nèi)，密封，保存到4 ℃冰箱內(nèi)，共6份樣品，于1 d、3 d、8 d、15 d、20 d和30 d后，分別測(cè)定其氰化物的含量。

稱取上述6條中毒犬只的胃及其內(nèi)容物樣品，每只中毒犬取兩份，每份5 g，依次裝到試管內(nèi)并密封，再依次保存到-20 ℃、25 ℃的壞境中，共形成12份樣品，于20 d后分別測(cè)定其氰化物的含量。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

吸取0 mL、0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL和2.0 mL的1 mg/L氰標(biāo)準(zhǔn)溶液于25 mL比色管中，加水定容至10 mL。

1.4.2 樣品前處理

稱取樣品5 g于500 mL蒸餾瓶中，加蒸餾水浸沒(méi)樣品，加100 g/L乙酸鋅溶液20 mL，加入酒石酸2 g，迅速連接好蒸餾裝置，加熱蒸餾。將冷凝管下端插入10 g/L氫氧化鈉10 mL中，收集蒸餾液并用純水定容至50 mL，移取10 mL蒸餾液于25 mL比色管中。

試樣溶液及標(biāo)準(zhǔn)溶液各加酚酞1滴，用乙酸（1+20）調(diào)至紅消失，再用2 g/L氫氧化鈉溶液調(diào)至近紅色，然后加5 mL磷酸鹽緩沖溶液，37 ℃水浴10 min，再加入0.25 mL氯胺T溶液，搖勻放置5 min，加入5 mL異煙酸-吡唑啉酮溶液，加水稀釋至刻度，加塞振蕩混合均勻，在37 ℃恒溫水浴鍋中放置40 min，取出用1 cm比色杯以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)638 nm處測(cè)吸光度[5-6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 采樣部位和測(cè)定值的關(guān)系

分析測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肉中氰化物檢出量最低，舌頭氰化物檢出量是肉中的1.9倍，肝臟氰化物檢出量是肉中的10.8倍，胃中氰化物檢出量是肉中的46.8倍，胃中氰化物檢出量最高，具體如表1和圖1所示。

圖1 中毒犬只不同組織中檢出量比較圖

表1 中毒犬只不同組織中氰化物檢出量 （單位：mg/kg）

氰化物在犬只各組織中的分布情況和氰化物的中毒機(jī)理有明顯的關(guān)系。氰化物中毒非常快速，且致死量很低。毒物進(jìn)入犬只體內(nèi)后，還沒(méi)有被完全消化和吸收，即可引起犬只中毒死亡，所以在胃部殘留了大量的氰化物。肝臟雖然是解毒器官，但慢性中毒時(shí)，毒物蓄積會(huì)比較明顯。氰化物在肝臟中殘留量的影響因素比較復(fù)雜，不同的犬只其相對(duì)含量差異較大，但是均比肉中含量高。所以針對(duì)氰化物等在食品生產(chǎn)銷售中非法使用的物質(zhì)的檢測(cè)，若采集肌肉等器官送往檢測(cè)機(jī)構(gòu)檢測(cè)，結(jié)果往往是未檢出。市場(chǎng)監(jiān)督管理部門無(wú)法準(zhǔn)確辨別犬只是否為氰化物所毒殺，不法分子將有機(jī)可乘。這也是市場(chǎng)上氰化物毒殺犬只屢禁不絕的一個(gè)重要原因，給消費(fèi)者帶來(lái)了巨大的威脅[7-8]。

2.2 存儲(chǔ)溫度和測(cè)定值的關(guān)系

冷凍保存和冷藏保存的樣品測(cè)定值與樣品的采集當(dāng)天的數(shù)據(jù)沒(méi)有明顯的差異，而常溫保存的樣品其測(cè)定值明顯偏底，僅為采樣當(dāng)天的6%～35%，見(jiàn)表2和圖2。

圖2 中毒犬只樣品不同溫度下儲(chǔ)存20 d檢測(cè)結(jié)果比較圖

表2 中毒犬只樣品不同溫度下儲(chǔ)存20 d檢測(cè)結(jié)果情況（單位：mg/kg）

本試驗(yàn)證明樣品應(yīng)該保存在冷藏和冷凍的環(huán)境中，氰化物在冷藏或冷凍的環(huán)境中20 d內(nèi)能保證較為穩(wěn)定的含量值，如長(zhǎng)時(shí)間放置在常溫的環(huán)境中，測(cè)定的數(shù)據(jù)將會(huì)偏低，不能真實(shí)反應(yīng)送檢的樣品的實(shí)際含量。在常溫的環(huán)境中，樣品有明顯的腐臭味，顏色變黑，胃及內(nèi)容物的混合物中氰化物以氫氰酸、氰化鉀、有機(jī)氰化物等形式存在，微生物能降解一部分氰化物，氫氰酸在高溫環(huán)境中也從樣品中溢出，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果明顯偏低，對(duì)于含量本來(lái)不高的樣品，可能無(wú)法檢測(cè)出來(lái)，樣品也失去了其代表性。樣品由采樣人員采集后，如何進(jìn)行有效的保存和運(yùn)輸，也就是確保分析目標(biāo)物不損失和降解，是由樣本的本質(zhì)和分析方法決定的。如對(duì)儲(chǔ)存的溫度、空氣、光照等條件的有效控制。針對(duì)氰化物樣品的環(huán)境條件的要求，采樣單位應(yīng)配備冷鏈設(shè)施。

2.3 檢測(cè)時(shí)間和測(cè)定值的關(guān)系

在冷藏（4 ℃）條件下，不同放置時(shí)間的毒犬只胃中氰化物的測(cè)定結(jié)果顯示，相對(duì)偏差為5.5%～11.8%，數(shù)據(jù)的差異性不明顯。由圖3也清楚顯示冷藏的環(huán)境中樣品中氰化物并沒(méi)有隨著時(shí)間的變化發(fā)生明顯的下降趨勢(shì)，比較穩(wěn)定。檢測(cè)過(guò)程中樣品穩(wěn)定性給檢測(cè)結(jié)果的可靠性帶來(lái)了有利的因素，另外，氰化物在低溫的環(huán)境中降解速度較慢，使食用該樣品的危險(xiǎn)因素長(zhǎng)期存在[9]。

圖3 中毒犬只胃中氰化物檢出量隨放置時(shí)間變化圖

樣品從采集完成到送檢檢測(cè)機(jī)構(gòu)，其中有運(yùn)輸和存儲(chǔ)的時(shí)間，檢測(cè)機(jī)構(gòu)從受理樣品到開(kāi)始檢測(cè)也存在時(shí)間差。合理安排和控制檢測(cè)時(shí)間，是影響樣品測(cè)定結(jié)果的重要因素，也是確保數(shù)據(jù)有良好復(fù)現(xiàn)性的重要前提。試驗(yàn)結(jié)果表明在冷藏條件下氰化物測(cè)定從采樣到檢測(cè)時(shí)間控制在20 d內(nèi)，測(cè)定結(jié)果差異不顯著。

3 結(jié)論

樣品具有代表性、真實(shí)性是食品檢驗(yàn)中對(duì)樣品的基本要求，這是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的重要前提。很多檢驗(yàn)工作者在其論文中闡述了樣品管理在檢驗(yàn)檢測(cè)工作中的重要性，及如何取保樣品有效性的方法?？茖W(xué)規(guī)范地采集氰化物中毒犬只樣本尤為重要。在對(duì)氰化物中毒的犬只取樣過(guò)程中，應(yīng)注意氰化物在全身的分布情況，選取有代表性的部位進(jìn)行送檢，胃部、肝臟中含量較多，肌肉和口腔等殘留較少。

樣品在采集后保存條件的控制也是檢驗(yàn)流程的重要組成部分。本試驗(yàn)設(shè)置了冷凍、冷藏和常溫3個(gè)不同的存儲(chǔ)條件，對(duì)其結(jié)果差異性進(jìn)行了分析研究，發(fā)現(xiàn)冷藏和冷凍保存的樣品數(shù)據(jù)穩(wěn)定，常溫下保存樣品氰化物含量有明顯的降解。本試驗(yàn)中，在對(duì)所有樣本冷藏保存20 d內(nèi)含量變化趨勢(shì)監(jiān)測(cè)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯波動(dòng)，可見(jiàn)此穩(wěn)定下氰化物降解較為平穩(wěn)緩慢，降解率在12%之內(nèi)。所以氰化物中毒的犬只樣本應(yīng)該保存在冷藏或冷凍的條件下，并在20 d內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，有助于確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠[10-11]。