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    腹腔鏡手術(shù)對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者Gelactin-3和VEGF蛋白表達(dá)水平的影響

    2021-11-09 03:06:28柳燕飛劉雯雯高天旸
    關(guān)鍵詞:腹腔鏡血清水平

    柳燕飛 劉雯雯 郭 蕾 張 藝 高天旸

    廣東省第二人民醫(yī)院1.婦科;2.生殖醫(yī)學(xué)中心,廣東 廣州 510317

    子宮內(nèi)膜異位癥是一種常見的婦科疾病,發(fā)病率約為10%。子宮內(nèi)膜異位癥患者不孕不育的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)約為健康女性的20倍,是引起女性不孕不育的主要原因[1-2]。子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜接受胚胎著床的能力,子宮內(nèi)膜只有在月經(jīng)周期的特定短暫時(shí)期具備接受胚胎植入的能力,該時(shí)期稱為“胚胎植入態(tài)”。研究顯示,半乳糖凝集素-3(Gelactin-3)在子宮內(nèi)膜“胚胎植入態(tài)”時(shí)期表達(dá)量顯著增加[3-4],說(shuō)明當(dāng)女性體內(nèi)Gelactin-3表達(dá)量增加時(shí),子宮內(nèi)膜具備接受胚胎植入的能力,女性受孕幾率增加。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)可以參與新血管的形成,而血管生成在子宮內(nèi)膜異位癥中發(fā)揮重要作用,因此,VEGF可能參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展[5]。腹腔鏡檢查及手術(shù)治療是臨床常見的治療子宮內(nèi)膜異位癥的方式之一,但腹腔鏡治療是否可以提高女性患者子宮內(nèi)膜容受度,目前暫缺乏相關(guān)證據(jù)。本研究通過檢查女性患者手術(shù)前后Gelactin-3和VEGF的表達(dá)水平,分析腹腔鏡治療對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜容受性的療效,為臨床上腹腔鏡治療提供更多的理論依據(jù)。

    1 研究對(duì)象與方法

    1.1 研究對(duì)象

    收集2018年9月—2020年8月在我院就診并接受腹腔鏡治療的子宮內(nèi)膜異位癥女性患者,共105例。根據(jù)美國(guó)生育學(xué)會(huì)提出的“ASRM修正子宮內(nèi)膜異位癥分期法”將其分為Ⅰ、Ⅱ期(57例),Ⅲ期(35例),Ⅳ期(13例)。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)腹腔鏡檢查和病理檢查確定為子宮內(nèi)膜異位癥,并接受腹腔鏡治療的患者;(2)患者年齡23~42歲;(3)夫妻正常性生活且未采取避孕措施1年以上未妊娠;(4)月經(jīng)周期規(guī)律,周期為26~32天;(5)無(wú)內(nèi)分泌、免疫和代謝性疾病;(6)手術(shù)前3個(gè)月未接受其他治療。對(duì)照組患者選擇因輸卵管不孕、卵巢良性病變等接受腹腔鏡治療的患者,子宮內(nèi)膜正常,共納入110例。

    1.2 樣本收集

    (1)血清樣本收集:所有患者在手術(shù)前后抽取外周靜脈血,離心后分離血清,-80℃冰箱保存;(2)子宮內(nèi)膜標(biāo)本采集:分別采集兩組患者手術(shù)前后的子宮內(nèi)膜,避免排卵期對(duì)子宮內(nèi)膜的影響,采集時(shí)間為手術(shù)前后月經(jīng)周期的第19~22天,采集后組織放置于10%中性福爾馬林中固定保存。采集方法:使用子宮內(nèi)膜采集器(北京賽普九洲科技發(fā)展有限公司生產(chǎn))采集患者的子宮內(nèi)膜。所有患者取膀胱截石位,暴露陰道和宮頸,將采集器置入患者宮腔底部,推出采集器的外套管,釋放采集環(huán),將采集器順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)15圈左右,將其退回外套中,并將采集器退出宮腔。

    1.3 Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平檢測(cè)

    1.3.1 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平(1)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線;(2)在樣本孔中加入血清樣本,37℃放置2 h;(3)加入酶結(jié)合物工作液,37℃放置45 min;(4)加入底物,37℃放置15 min,加入終止液終止反應(yīng);(5)使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清中Gelactin-3和VEGF濃度。

    1.3.2 免疫組化檢測(cè)子宮內(nèi)膜Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平 多聚甲醛固定采集的子宮內(nèi)膜樣本,石蠟包埋后將其分別置于二甲苯、100%乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中脫蠟水化。PBS清洗后,滴加封閉液封閉。封閉完成后添加單克隆小鼠抗人Galectin-3或VEGF抗體,4℃過夜。PBS清洗后添加二抗,37℃放置30 min。添加顯色液,觀察切片顏色。當(dāng)切片顏色變成褐色時(shí),用水洗掉顯色液。蘇木素復(fù)染后用PBS清洗。將切片分別放置于95%乙醇、100%乙醇中脫水,再放置于二甲苯中使其變透明,最后采用中性樹膠封片,顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn):隨機(jī)選取5個(gè)不同視野,計(jì)數(shù)5個(gè)視野中陽(yáng)性著色細(xì)胞,求取平均值。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)與相對(duì)數(shù)表示,組間比較采用卡方檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平

    子宮內(nèi)膜異位癥患者手術(shù)前Gelactin-3水平顯著低于對(duì)照組,而VEGF表達(dá)則顯著高于對(duì)照組;經(jīng)過手術(shù)治療后,子宮內(nèi)膜異位癥患者Gelactin-3表達(dá)顯著升高,而VEGF則顯著降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組患者手術(shù)治療前后Gelactin-3和VEGF水平均無(wú)顯著變化。見表1。

    表1 兩組患者手術(shù)前后血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平(±s,pg/mL)

    表1 兩組患者手術(shù)前后血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平(±s,pg/mL)

    2.2 子宮內(nèi)膜組織中Gelactin-3和VEGF表達(dá)

    與血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)結(jié)果一致。手術(shù)治療可以提高子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜組織的Gelactin-3水平,并降低VEGF水平,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組患者手術(shù)前后Gelactin-3和VEGF水平均無(wú)顯著變化。見表2。

    表2 兩組患者手術(shù)前后子宮內(nèi)膜組織中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平比較(±s)

    表2 兩組患者手術(shù)前后子宮內(nèi)膜組織中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平比較(±s)

    3 討論

    子宮內(nèi)膜異位癥是一種生育期婦女常見的慢性炎癥性疾病,是女性不孕不育的主要原因之一。其基本病理變化是異位的內(nèi)膜細(xì)胞增生黏附、侵襲和血管生成等,導(dǎo)致周圍纖維組織增生、粘連、形成結(jié)節(jié)或囊腫等[6-8]。子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病原因不明,目前的治療方式無(wú)法從根本上治愈,其引發(fā)的疼痛、不孕和性生活異常極大地影響了患者的心理健康和生活質(zhì)量[9]。目前臨床上常見的治療手段是腹腔鏡手術(shù),通過手術(shù)可以定點(diǎn)治療異位組織,顯著提高患者的妊娠率[10-11],但腹腔鏡手術(shù)治療目前仍存在較大的爭(zhēng)議,需進(jìn)一步在臨床研究評(píng)估其價(jià)值。本研究旨在探討腹腔鏡治療對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜容受性的治療效果,為臨床上腹腔鏡治療提供更多的理論依據(jù)。

    新血管生成是子宮內(nèi)膜異位發(fā)生的關(guān)鍵過程,而VEGF是參與調(diào)控血管生成最重要的血管生成因子[12],其主要功能包括促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、刺激新血管生成、提高血管通透性等。目前研究顯示,子宮內(nèi)膜異位癥患者的血清、腹腔液和子宮內(nèi)膜組織中VEGF的表達(dá)均顯著高于健康婦女,且子宮內(nèi)膜異位癥越嚴(yán)重的患者,VEGF表達(dá)量越高[13-15]。推測(cè)VEGF可以促進(jìn)異位病灶血管的生長(zhǎng),為內(nèi)膜異位提供了生長(zhǎng)環(huán)境。本研究結(jié)果顯示,子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和子宮內(nèi)膜組織中的VEGF水平均顯著高于對(duì)照組患者,與其他研究結(jié)果一致[16],提示VEGF表達(dá)可能可以作為診斷子宮內(nèi)膜異位癥的分子標(biāo)志物之一。子宮內(nèi)膜異位癥患者接受腹腔鏡手術(shù)治療后,血清和子宮內(nèi)膜組織中的VEGF水平均顯著降低,說(shuō)明腹腔鏡手術(shù)可以緩解子宮內(nèi)膜異位癥患者的病情,改善其不孕癥狀。

    Galectin-3是一種結(jié)合蛋白,可以參與細(xì)胞黏附、凋亡、分化、遷移等多種生理病理過程[17]。有研究表明,Galectin-3的表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥之間具有一定的相關(guān)性[18-19]。也有文獻(xiàn)報(bào)道,Galectin-3在子宮內(nèi)膜容受的植入窗期表達(dá)量顯著增加,在異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)顯著低于正常子宮內(nèi)膜,其表達(dá)量與不孕不育可能存在一定的相關(guān)性[20]。本研究結(jié)果顯示,Galectin-3在子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組患者,接受腹腔鏡手術(shù)治療后,其表達(dá)量升高,說(shuō)明Galectin-3可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展過程。

    綜上所述,VEGF和Galectin-3可能參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展,而腹腔鏡手術(shù)可以顯著降低VEGF的表達(dá),并增加Galectin-3表達(dá),可以改善子宮內(nèi)膜異位癥患者的病情,增加其妊娠率,該結(jié)果為臨床上進(jìn)一步使用腹腔鏡治療提供了理論依據(jù)。

    利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

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