感染丙型肝炎病毒患者血清自身抗體檢測的臨床意義

謝冰鑫

（大連市公共衛(wèi)生臨床中心（大連市第六人民醫(yī)院），遼寧 大連 116031)

人體免疫系統(tǒng)受病毒侵襲后會對免疫應(yīng)答功能產(chǎn)生影響，使之發(fā)生紊亂，生成免疫抗體，以至于發(fā)生免疫反應(yīng)[1-3]?；颊咴诟腥颈透窝撞《荆℉CV）后，體內(nèi)出現(xiàn)自身抗體，導(dǎo)致肝臟病理損傷加劇，無法達(dá)到良好的臨床診療效果，甚至影響預(yù)后[4-6]。當(dāng)前，我國醫(yī)療行業(yè)發(fā)展速度非?？?，該免疫現(xiàn)象日漸受到關(guān)注，亟待提出解決方法，將患者肝功能損傷概率降到最低，為臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)和借鑒。本研究旨在研究感染HCV患者血清自身抗體檢測的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 試驗對象即2018年1～12月到本院治療的90例HCV感染患者，HCV攜帶者、丙型肝炎、肝硬化各30例。HCV攜帶者中，男18例，女12例，年齡22～74歲，平均年齡（48.21±2.34）歲；丙型肝炎者中，男、女各15例，年齡31～79歲，平均年齡（55.32±3.21）歲；肝硬化者中，男17例，女13例，年齡22～77歲，平均年齡（49.52±3.41）歲。42例健康體檢者中，男20例，女22例，年齡21～75歲，平均年齡（48.12±3.05）歲。兩組基線資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可比較。所有病例均排除自身免疫性疾病，均未應(yīng)用免疫制劑。

1.2 方法 ①間接免疫熒光法：在ANA檢測基質(zhì)內(nèi)，抗原即HEP-2細(xì)胞、猴肝組織的冰凍切片；SMA檢測基質(zhì)中，抗原為大鼠胃組織冰凍切片。發(fā)揮生物薄片技術(shù)作用，組合含細(xì)胞、組織的切片，形成反應(yīng)區(qū)，按1∶100比例稀釋血清，依次與各組織細(xì)胞孵育30 min，再添熒光二抗，仍將孵育時間控制為30 min，清洗，甘油封片，放置在顯微鏡下觀測。若內(nèi)含特征性綠色熒光，滴度在1∶100及以上，顯示陽性。如果ANA滴度≥1∶320，需進(jìn)行肝譜分析。②免疫印跡法：借助該方法，對LKM-1、LC-1等肝抗原自身抗體進(jìn)行檢測。檢測膜條上覆各類抗原，在室溫下放置，添加緩沖液，以1.5 mL為宜，把振蕩孵育時間控制為5 min，倒掉液體，添加1.5 mL血清，該血清稀釋比例1∶100，振蕩孵育30 min，清洗3遍，NBT/BCIP顯色，對陽性結(jié)果加以判斷。③酶聯(lián)免疫法：AMA-M2經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測，將樣本、加酶結(jié)合物溫育時間均控制為30 min，清洗，添加底物，溫育15 min，添加終止液，把終止反應(yīng)時間控制在30 min內(nèi)，比色，按照定量檢測方法，將標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制出來，陽性數(shù)據(jù)即AMA-M2＞20 IU/mL。

1.3 觀察指標(biāo) 檢測生化指標(biāo)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、γ-谷氨酸?；D(zhuǎn)酞酶（γ-GT）、總膽紅素（TBiL）均使用特種蛋白分析儀BN-Ⅱ?qū)F進(jìn)行檢測，該操作需在說明書指導(dǎo)下進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV感染者自身抗體檢測情況 HCV感染組和健康體檢組總陽性數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=21.696，P=0.000）；丙肝攜帶者、丙型肝炎、丙肝肝硬化總陽性數(shù)均顯著高于健康體檢組（χ2=15.785、13.873、22.019；P=0.000）。自身抗體ANA、ASMA、AMA-M2、RF的陽性率分別為32.22%、8.89%、11.11%、5.56%。見表1。

表1 HCV感染者自身抗體檢測情況[n（%）]

2.2 HCV感染者ANA熒光模式分析 ANA陽性患者29例，熒光模式主要有顆粒型、胞質(zhì)型及其他核型，所占比例分別為62.07%、27.59%、17.24%。見表2。

表2 HCV感染者ANA熒光模式分析[n（%）]

2.3 HCV感染者抗核抗體滴度分布 29例ANA陽性滴度，1∶100、1∶1 320、1∶3 200占比分別為82.76%、31.03%、3.45%；健康體檢組2例都為1∶100 ANA均質(zhì)型。兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 HCV感染者抗核抗體滴度分布[n（%）]

2.4 自身抗體陰性組與自身抗體陽性組的肝功能檢測結(jié)果指標(biāo)對比 丙肝自身抗體陽性組與陰性組的ALT、AST對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），丙肝自身抗體陽性組與陰性組的TBIL、γ-GT對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 自身抗體陰性組與自身抗體陽性組的肝功能檢測結(jié)果指標(biāo)對比

3 討 論

丙型肝炎作為常見傳染病，在全世界范圍內(nèi)傳播[7-9]。調(diào)查顯示，全球感染患者高達(dá)1.7億，而僅我國就有超4 000萬人感染該病[10-11]?，F(xiàn)如今，丙型肝炎病毒的相關(guān)研究取得了突破性進(jìn)展，HCV感染者體內(nèi)存在自身抗體，對組織器官產(chǎn)生影響，發(fā)生功能紊亂、病理損傷，使丙型肝炎患者的病毒血癥加劇[12-13]。早在20世紀(jì)80年代末，自身免疫性肝炎患者血清內(nèi)便已檢測出抗病性感染病毒，初步證實HCV感染與自身免疫相關(guān)[14-16]。經(jīng)研究證實，HCV感染能夠經(jīng)分子模擬，使自身免疫反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞被激活，發(fā)生自身免疫現(xiàn)象[17-18]。本研究結(jié)果顯示，健康體檢組的抗ENA抗體、ANA、RF等自身抗體陽性檢測率明顯比HCV感染者檢出率低，提示HCV感染對機體內(nèi)自身免疫反應(yīng)有促進(jìn)作用，經(jīng)誘導(dǎo)可產(chǎn)生自身抗體，但不能忽略其與自身免疫之間的關(guān)系，HCV感染患者血清內(nèi)自身抗體的陽性率隨著病情的加劇而增加[19-21]。ANA的熒光模型主要有顆粒型和胞質(zhì)型，各占62.07%和27.59%，證實慢性肝炎衍變的同時，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分布自身免疫變化。HCV感染者抗核抗體滴度分布情況說明HCV感染很大程度上增加了自身免疫性肝病發(fā)生率。自身抗體陽性的慢性HCV感染者肝功能受損程度顯著高于自身抗體陰性者，指示HCV感染者體內(nèi)存在自身抗體，會誘發(fā)丙肝病變，對肝組織造成損傷[22-24]。一旦感染HCV，會存在多類自身抗體，隨著丙型肝炎的發(fā)展及病程的延長，很容易觸發(fā)自身免疫。在感染過程中，還會通過多類渠道損傷機體免疫系統(tǒng)，甚至對機體免疫耐受性產(chǎn)生破壞，加劇患者的肝損傷[25-27]。而且對比分析自身抗體陽性、陽性的HCV感染患者肝功能狀況，自身抗體陽性組的TBIL、γ-GT水平高于自身抗體陰性組，表明HCV感染與自身免疫性肝病密切相關(guān)。HCV感染者血清中自身抗體形成，分析原因可能是丙肝病毒作用于干細(xì)胞而釋放各種抗原，抗原誘發(fā)機體產(chǎn)生自身抗體，進(jìn)一步損傷肝組織[28-29]。

綜上所述，在感染HCV后會觸發(fā)患者體內(nèi)的自身免疫反應(yīng)，對組織產(chǎn)生影響，使之損傷。采取科學(xué)的方式將自身抗體檢測工作落實到位，以此為前提，給出科學(xué)有效的治療方案，達(dá)到良好的應(yīng)用效果。臨床需針對合并自身免疫性肝病HCV感染患者實施個體化治療。