HPLC法測定平喘抗炎膠囊中槲皮素與山柰酚的含量

楊玲霞　朱旭江　馬怡榮

【摘要】目的：建立高效液相色譜法測定平喘抗炎膠囊中槲皮素和山柰酚含量的方法。方法：色譜柱為Kromasil C18柱（4.0mm×250mm，5.0μm）；甲醇-0.1%磷酸溶液（50∶50）為流動(dòng)相；流速：1.0ml/min；檢測波長360nm；檢測溫度：室溫。結(jié)果：槲皮素、山柰酚分別在0.0634 ～1.268μg 和0.0307 ～0.614μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，平均回收率分別為98.14%（RSD=2.15%）和97.03%（RSD=1.08%）。結(jié)論：該法準(zhǔn)確、靈敏，可用于平喘抗炎膠囊中槲皮素和山柰酚的含量測定。

【關(guān)鍵詞】平喘抗炎膠囊；槲皮素；山柰酚；高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）01-0021-02

平喘抗炎膠囊收載于《中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)科肺系（二）分冊》，由桃兒七、桔梗、苦杏仁等組成，具有降氣化痰、止咳平喘的功效。臨床用于痰濁阻肺證，癥見咽喉腫痛、咳嗽氣喘、胸滿痰多、脘腹脹痛及氣管炎見以上證候者。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載了苦杏仁中苦杏仁苷的含量測定方法，對方中君藥桃兒七只收載了槲皮素的薄層色譜鑒別，未收載含量控制方法。桃兒七具有祛痰止咳的功能，但由于其生長緩慢，對環(huán)境要求苛刻，分布范圍狹窄，1992年被《中國植物紅皮書》收錄，是我國瀕危珍稀藥用植物。桃兒七主要化學(xué)成分為木脂素類及黃酮類，其中黃酮類成分主要為槲皮素和山柰酚，具有很好的抗氧化、抗菌、祛痰及鎮(zhèn)咳作用，為臨床治療氣管炎的有效成分[1-3]。因此制定桃兒七中黃酮類成分的含量檢測方法對控制平喘抗炎膠囊的內(nèi)在質(zhì)量具有很重要的意義。研究采用高效液相色譜法同時(shí)測定平喘抗炎膠囊中槲皮素和山柰酚的含量，為平喘抗炎膠囊的的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-2010A高效液相色譜儀（日本島津公司）；梅特勒XS205DU電子天平（瑞士Mettler toledo公司）。B3200S-T型超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司），MILLI Q超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 材料 槲皮素對照品（批號：100081-200406）、山柰酚對照品（批號：110861-2004050）購自中國食品藥品生物制品檢定院；平喘抗炎膠囊（批號：1401066501、1401066301、1301066901，奇正藏藥制藥股份有限公司）。甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取槲皮素6.34mg、山柰酚3.07mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得對照品儲備溶液（槲皮素為0.1268 mg/ml，山柰酚為0.0614 mg/ml）。精密吸取對照品儲備溶液10 ml，加甲醇定容至50ml，即得對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約2.5g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.46μm的微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

另按處方比例及制備工藝，配制不含桃兒七的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.3 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18柱（4.0mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（50∶50）；檢測波長：360nm；流速：1.0ml/min；溫度：室溫；進(jìn)樣量：10μl。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μl，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，色譜圖見圖1。

結(jié)果表明在此色譜條件下，槲皮素和山柰酚均與樣品中其他組分色譜峰基線分離，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算為8235，按山柰酚計(jì)算為5567。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密量取對照品貯備液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0ml，分別置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，用0.46μm的微孔濾膜濾過，依次進(jìn)樣10μl。以槲皮素、山柰酚峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸計(jì)算，槲皮素的回歸方程為A=4129136C+55461，r=1.0000，槲皮素的線性范圍為0.0634～1.268μg；山柰酚的回歸方程為A=3864867C+122331，r=0.9999，山柰酚的線性范圍為0.0307～0.614μg。結(jié)果表明在給定的范圍內(nèi)槲皮素和山柰酚線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液，按“2.3”色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10μl，分別計(jì)算得槲皮素峰面積的RSD為1.14%、山柰酚峰面積的RSD為1.68%，表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取平喘抗炎膠囊內(nèi)容物（批號：1401066301）5份，按照2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照“2.3”項(xiàng)下的方法依次進(jìn)樣測定，結(jié)果槲皮素平均含量的RSD為1.74%，山柰酚平均含量的RSD為2.09%，表明本法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、16、24h進(jìn)樣10μl，測定槲皮素和山柰酚的峰面積，結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為2.37%，山柰酚峰面積的RSD為2.06%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的平喘抗炎膠囊樣品（批號：1401066301，槲皮素和山柰酚含量分別為0.28mg/g和0.11 mg/g）6份，精密稱定，分別精密加入對照品貯備溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1、表2。結(jié)果表明該方法具有良好的準(zhǔn)確性。

2.10 樣品測定結(jié)果 采用本實(shí)驗(yàn)所建立的方法對3批樣品中槲皮素和山柰酚含量進(jìn)行測定，計(jì)算含量，結(jié)果見表3。

3 討論

桃兒七主要化學(xué)成分為木脂素類及黃酮類，其中木脂素類成分如鬼臼毒素等具有抗癌活性而研究較多，有關(guān)桃兒七及其制劑的質(zhì)量分析研究也集中在木脂素類成分[4-7]，對桃兒七中黃酮類成分則少有報(bào)道。而黃酮類如槲皮素、山柰酚及其苷類具有祛痰、平喘等功效 [1-3]，與平喘抗炎膠囊等臨床作用一致，因此制定制劑中黃酮類化合物的定量測定方法很有必要。

研究建立了高效液相色譜測定平喘抗炎膠囊中槲皮素和山柰酚含量的方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該法準(zhǔn)確、靈敏，重現(xiàn)性好，結(jié)果可靠，為有效控制制劑的質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。

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（收稿日期：2015.09.28）