• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞抗氧化能力的影響

    2021-11-05 02:48:48耿照玉
    關(guān)鍵詞:空腸脾臟飼糧

    張 成 趙 菲 李 煬 張 勇 王 馳 耿照玉

    (安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院,合肥 230036)

    環(huán)境溫度驟然升高而引發(fā)的熱應(yīng)激現(xiàn)象引起了家禽生產(chǎn)者的普遍關(guān)注。家禽受到急性熱應(yīng)激時(shí)會(huì)使器官受損,進(jìn)而導(dǎo)致生理機(jī)能紊亂,最終影響家禽正常生長(zhǎng)發(fā)育和健康,造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。研究表明,熱應(yīng)激狀態(tài)下,家禽抗氧化系統(tǒng)失衡,導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)活性氧自由基(ROS)增高,誘發(fā)機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激損傷[3]。因此,研究如何減少熱應(yīng)激對(duì)肉雞的氧化損傷顯得尤為重要。研究顯示,飼糧中添加具有抗氧化活性的植物源活性物質(zhì)是緩解熱應(yīng)激肉雞氧化應(yīng)激損傷的有效途徑[4],其中多酚類物質(zhì)表現(xiàn)效果很佳[5-8]。茶多酚具有抗氧化、抗炎、抗癌、抑菌以及清除自由基等多種生物學(xué)功能,其主要成分為兒茶素,而表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)占兒茶素80%[9]。研究表明,EGCG可降低細(xì)胞內(nèi)ROS及脂質(zhì)過氧化水平,提高細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性,表明EGCG有顯著的抗氧化效果[10]。Wada等[11]研究表明,EGCG可以提高小鼠胰島細(xì)胞的活力和抗氧化功能,可能與其提高核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)和亞鐵血紅素加氧酶1(HO-1)mRNA的表達(dá)量并減少ROS的生成有關(guān)。韓國(guó)清等[12]在仔豬日糧中添加EGCG顯著提高了仔豬的采食量和血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低血清丙二醛(MDA)含量,表明EGCG能緩解仔豬斷奶后的氧化應(yīng)激,提高生產(chǎn)性能。熱應(yīng)激的時(shí)長(zhǎng)、溫度高低及模式(持續(xù)和循環(huán))對(duì)家禽抗氧化系統(tǒng)的影響存在差異[3]。研究表明,慢性熱應(yīng)激條件下,飼糧中添加EGCG通過提高肉雞血清和肝臟GSH-Px、SOD和過氧化氫酶(CAT)等抗氧化酶活性,降低MDA水平來改善肉雞生長(zhǎng)性能并減輕應(yīng)激損傷,同時(shí)提高肝臟中Nrf2蛋白的表達(dá)水平[13-14],提示EGCG提高慢性熱應(yīng)激肉雞抗氧化能力可能介導(dǎo)了Nrf2信號(hào)通路,但其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。然而關(guān)于EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞抗氧化能力的影響還未有相關(guān)研究,如何改善急性熱應(yīng)激肉雞的抗氧化能力,其具體機(jī)制是否與Nrf2信號(hào)通路介導(dǎo)相關(guān),值得進(jìn)一步研究。因此,本研究以淮南麻黃肉雞為研究對(duì)象,旨在考察飼糧中添加EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞抗氧化能力的影響并初步探究其機(jī)理,以期為其作為綠色、安全的飼料添加劑應(yīng)用于家禽生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    選取10日齡體重(170±2) g的淮南麻黃公雞144羽,隨機(jī)分為3組:對(duì)照組(Ⅰ組)、急性熱應(yīng)激組(Ⅱ組)、急性熱應(yīng)激+EGCG組(Ⅲ組),每組6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)8羽。Ⅰ組和Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)飼糧,Ⅲ組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加400 mg/kg EGCG的試驗(yàn)飼糧。10~21日齡,環(huán)境溫度由30 ℃降溫至(22±1) ℃,隨后保持該溫度至93日齡。94日齡時(shí),Ⅰ組環(huán)境溫度維持為(22±1) ℃,Ⅱ組和Ⅲ組環(huán)境溫度升高到(33±1) ℃,維持該溫度12 h并禁食,熱應(yīng)激處理后屠宰取樣。雞舍用排風(fēng)扇進(jìn)行縱向通風(fēng),用加濕器控制濕度(相對(duì)濕度65%左右),用加熱器控制溫度。

    1.2 飼養(yǎng)管理

    試驗(yàn)在安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)基地開展,試驗(yàn)雞自由采食和飲水,常規(guī)管理?;A(chǔ)飼糧參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33-2004)配制,基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。EGCG純度為98%,購自杭州怡倍嘉茶葉科技有限公司。

    表1 飼糧組成與營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diets (air-dry basis)

    1.3 樣品采集

    在每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取體重相近的2羽肉雞,翅靜脈采血5 mL,3 000 r/min離心15 min,分離血清,置于-20 ℃保存待測(cè)。采血后,頸靜脈放血處死后,迅速打開腹腔,采取肝臟、脾臟、空腸樣品,裝于無菌的凍存管并液氮速凍后置于-80 ℃冰箱保存待測(cè)。

    1.4 檢測(cè)指標(biāo)

    1.4.1器官指數(shù)的測(cè)定

    取肝臟、肌胃、脾臟、十二指腸、空腸、回腸稱重,計(jì)算器官指數(shù)。

    肝臟指數(shù)=肝臟質(zhì)量/體重
    肌胃指數(shù)=肌胃質(zhì)量/體重
    脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量/體重
    十二指腸指數(shù)=十二指腸質(zhì)量/體重
    空腸指數(shù)=空腸質(zhì)量/體重
    回腸指數(shù)=回腸質(zhì)量/體重

    1.4.2血清和組織器官中抗氧化指標(biāo)測(cè)定

    血清和組織器官中CAT、GSH-Px、總SOD(T-SOD)活力以及蛋白羰基(PC)和MDA含量采用南京建成生物工程研究所的試劑盒按照說明書進(jìn)行測(cè)定。組織樣品制備過程如下:稱取空腸、肝臟和脾臟樣品(0.5~1.0 g),按質(zhì)量(g)∶體積(mL)=1∶9 的比例加入預(yù)冷的生理鹽水,在冰浴條件下用勻漿機(jī)勻漿,然后于4 ℃冷凍離心機(jī)中3 500 r/min離心10 min,取上清液進(jìn)行測(cè)定。采用的儀器為SUNRISE酶標(biāo)儀和TU-1900紫外可見光分光光度計(jì)。

    1.4.3肝臟中Nrf2通路相關(guān)基因表達(dá)測(cè)定

    采用上海Yeasen生物技術(shù)公司的Trizol試劑提取肝臟總RNA,用Nano-drop 2000分光光度計(jì)在260和280 nm處測(cè)定吸光度值,進(jìn)行RNA純度檢測(cè)。檢測(cè)合格后反轉(zhuǎn)錄成cDNA。利用NCBI搜索目標(biāo)基因序列,運(yùn)用Primer 5進(jìn)行引物設(shè)計(jì),引物由安徽通用生物科技有限公司合成?;虮磉_(dá)水平用ABI 7500實(shí)時(shí)定量PCR儀進(jìn)行測(cè)定。qRT-PCR 反應(yīng)體系為20 μL:cDNA 2 μL,上游引物1 μL,下游引物1 μL,PCR Master Mix(2×)10 μL,ddH2O 6 μL。選擇β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)作為內(nèi)參基因,使用2-ΔΔCt方法計(jì)算目的基因的表達(dá)量。引物序列及參數(shù)見表2。

    表2 Nrf2信號(hào)通路相關(guān)基因的引物序列Table 2 Primers sequences for Nrf2 signaling pathway-related genes

    1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示,使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA),Duncan氏法進(jìn)行多重比較,以P<0.05為差異顯著,P<0.01為差異極顯著作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞器官指數(shù)的影響

    由表3可見,急性熱應(yīng)激和EGCG對(duì)肝臟指數(shù)、肌胃指數(shù)、十二指腸指數(shù)、空腸指數(shù)和回腸指數(shù)均無顯著影響(P>0.05)。然而,與Ⅰ組相比,Ⅱ組肉雞脾臟指數(shù)顯著下降(P<0.05),提示急性熱應(yīng)激損害了肉雞的器官免疫功能。

    表3 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞器官指數(shù)的影響Table 3 Effects of EGCG on organ index of acute heat-stressed broilers g/kg

    2.2 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞血清抗氧化功能的影響

    由表4可見,盡管急性熱應(yīng)激和EGCG對(duì)血清中MDA、PC含量和GSH-Px活力均無顯著影響(P>0.05),但與Ⅰ組相比,Ⅱ組肉雞血清中MDA和PC含量分別提高了77.19%和25.14%(P<0.10);與Ⅱ組相比,Ш組肉雞血清中MDA和PC含量分別降低了42.57%和21.19%。另外,與Ⅰ組相比,Ⅱ組肉雞血清中T-SOD和CAT活力顯著降低(P<0.05);與Ⅱ組相比,Ш組肉雞血清中CAT和GSH-Px活力分別提高了48.87%和20.13%(P<0.10)。上述結(jié)果提示,EGCG可提高急性熱應(yīng)激肉雞機(jī)體的抗氧化功能。

    表4 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞血清抗氧化功能的影響Table 4 Effects of EGCG on antioxidant function in serum of acute heat-stressed broilers

    2.3 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞脾臟抗氧化功能的影響

    由表5可見,與Ⅰ組相比,Ⅱ組肉雞脾臟中T-SOD 和CAT活力顯著降低(P<0.05);與Ⅱ組相比,飼糧中添加EGCG可顯著提高急性熱應(yīng)激肉雞脾臟中CAT活力(P<0.05),提示EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞脾臟抗氧化活力有顯著的提高效果。

    表5 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞脾臟抗氧化功能的影響Table 5 Effects of EGCG on antioxidant function in spleen of acute heat-stressed broilers

    2.4 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞空腸抗氧化功能的影響

    由表6可見,與Ⅰ組相比,Ⅱ組肉雞空腸中MDA含量顯著上升(P<0.05);與Ⅱ組相比,飼糧中添加EGCG可顯著降低急性熱應(yīng)激肉雞空腸中MDA含量(P<0.05),表明EGCG能降低急性熱應(yīng)激肉雞空腸的氧化損傷。

    表6 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞空腸抗氧化功能的影響Table 6 Effects of EGCG on antioxidant function in jejunum of acute heat-stressed broilers

    2.5 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞肝臟抗氧化功能的影響

    由表7可見,與Ⅰ組相比,Ⅱ組肉雞肝臟中T-SOD和GSH-Px活力顯著降低(P<0.05),MDA和PC含量極顯著上升(P<0.01);與Ⅱ組相比,飼糧中添加EGCG可顯著提高急性熱應(yīng)激肉雞肝臟中GSH-Px活力(P<0.05),同時(shí)極顯著降低MDA含量(P<0.01)。上述結(jié)果提示,EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞肝臟的抗氧化能力有顯著的提高效果。

    表7 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞肝臟抗氧化功能的影響Table 7 Effects of EGCG on antioxidant function in liver of acute heat-stressed broilers

    2.6 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞肝臟Nrf2信號(hào)通路中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響

    由表8可知,與Ⅰ組相比,Ⅱ組肉雞肝臟中Nrf2、CAT和NQO1mRNA表達(dá)量顯著降低(P<0.05),GSH-PxmRNA表達(dá)水平極顯著降低(P<0.01),而Keap1mRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05);與Ⅱ組相比,Ⅲ組肉雞肝臟中CATmRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)。上述結(jié)果提示EGCG提高急性熱應(yīng)激肉雞肝臟抗氧化能力可能介導(dǎo)了Nrf2信號(hào)通路。

    表8 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞肝臟Nrf2信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響Table 8 Effects of EGCG on the expression of Nrf2 signaling pathway-related genes in liver of acute heat-stressed broiler

    3 討 論

    3.1 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞器官指數(shù)的影響

    器官指數(shù)是衡量動(dòng)物機(jī)體系統(tǒng)發(fā)育狀況和功能的重要指標(biāo)。對(duì)于家禽而言,脾臟是最為重要的免疫器官,其生長(zhǎng)發(fā)育是家禽免疫系統(tǒng)功能的基礎(chǔ)[15]。大量研究表明,熱應(yīng)激會(huì)使機(jī)體器官發(fā)育受阻,免疫器官指數(shù)顯著降低,脾臟表現(xiàn)尤甚[16],這主要是由于熱應(yīng)激一方面導(dǎo)致了脾臟炎癥的發(fā)生,另一方面導(dǎo)致了抗氧化系統(tǒng)受損,最終導(dǎo)致脾臟細(xì)胞的凋亡。與此一致,本研究表明,急性熱應(yīng)激顯著降低了肉雞脾臟指數(shù)。Zhang等[6]研究表明,白藜蘆醇(多酚類物質(zhì))可顯著降低慢性熱應(yīng)激對(duì)肉雞脾臟等器官指數(shù)的負(fù)面影響。然而,Aydogan等[17]研究表明,同為多酚類物質(zhì)的EGCG對(duì)正常飼養(yǎng)條件下肉雞肝臟、心臟、脾臟、胰腺和法氏囊指數(shù)均無顯著影響。此外,本研究發(fā)現(xiàn),EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞器官指數(shù)無顯著影響,但其如何影響慢性熱應(yīng)激條件下肉雞的器官指數(shù)尚需深入研究。

    3.2 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞血清和組織器官抗氧化能力的影響

    肉雞對(duì)高溫有一定的耐受性,但該能力是有限的,隨著溫度的升高和時(shí)間的延長(zhǎng),機(jī)體內(nèi)的氧化還原平衡被破壞,ROS大量聚集并誘導(dǎo)氧化應(yīng)激,導(dǎo)致細(xì)胞脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA過氧化[18]。血清抗氧化酶的變化反映了動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力的改變,而MDA和PC含量反映了機(jī)體氧化損傷的程度[19]。前期研究發(fā)現(xiàn),37 ℃的高溫可導(dǎo)致雪峰烏骨雞血清中GSH-Px、CAT等抗氧化酶活性顯著降低,抗氧化能力減弱,脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)[5],而營(yíng)養(yǎng)調(diào)控可有效提高抗氧化酶活性[20]。EGCG的B環(huán)上含有活躍的羥基氫,可用于清除自由基,是純天然的高效抗氧化劑。研究表明,EGCG能顯著降低慢性熱應(yīng)激肉雞血清中MDA含量,顯著升高抗氧化酶CAT、SOD和GSH-Px活性,表明EGCG可通過提高抗氧化酶活性,進(jìn)而緩解熱應(yīng)激導(dǎo)致的氧化損傷[13,19]。本研究表明,飼糧中添加EGCG可分別提高急性熱應(yīng)激肉雞血清中GSH-Px和CAT活力達(dá)20.13%和48.87%,同時(shí)降低血清中MDA和PC含量達(dá)42.57%和21.99%,說明EGCG在一定程度上改善了肉雞機(jī)體的抗氧化能力,緩解了急性熱應(yīng)激引起的氧化應(yīng)激,但其作用機(jī)理需要進(jìn)一步探究。

    熱應(yīng)激是影響腸道形態(tài)和功能的主要因素之一,小腸作為家禽消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要場(chǎng)所,對(duì)家禽的生長(zhǎng)發(fā)育起著至關(guān)重要的作用[21]。當(dāng)家禽處于熱應(yīng)激狀態(tài)下,一方面高溫引起的氧化應(yīng)激破壞了抗氧化系統(tǒng)[22],另一方面機(jī)體為了加快散熱,會(huì)加速血液流向體表,使得流向腸道的血液大大減少,導(dǎo)致腸道供血不足,從而造成腸道細(xì)胞的凋亡,壞死甚至脫落等現(xiàn)象,是腸道病變和黏膜損傷的重要原因[23]。雷昕[9]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加EGCG可顯著提高慢性熱應(yīng)激肉雞空腸中GSH-Px、SOD和CAT活性,同時(shí)降低MDA含量,提示其顯著提高了慢性熱應(yīng)激肉雞空腸抗氧化性能,并降低氧化損傷。本研究表明,急性熱應(yīng)激和EGCG對(duì)肉雞空腸抗氧化酶無顯著影響,但急性熱應(yīng)激顯著提高了肉雞空腸中MDA含量,而飼糧中添加EGCG可顯著將其降低,說明EGCG可有效降低急性熱應(yīng)激對(duì)肉雞腸道的氧化損傷。

    脾臟作為最重要的外周免疫器官,參與細(xì)胞和體液免疫過程。Zhang等[6]研究證明,慢性熱應(yīng)激顯著降低肉雞脾臟中CAT、T-AOC和T-SOD活力,同時(shí)顯著提高M(jìn)DA含量,表明熱應(yīng)激對(duì)肉雞脾臟抗氧化能力有抑制作用,而飼糧添加白藜蘆醇具有顯著的緩解作用。盡管EGCG具有抗氧化作用,但其對(duì)熱應(yīng)激肉雞脾臟抗氧功能的調(diào)控作用還未見報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn),急性熱應(yīng)激顯著降低了脾臟中T-SOD和CAT活力,而飼糧中添加EGCG可顯著提高急性熱應(yīng)激肉雞脾臟中CAT活力,提示其可有效緩解急性熱應(yīng)激對(duì)肉雞脾臟抗氧化功能的負(fù)面作用。

    肝臟作為動(dòng)物體內(nèi)最重要的器官之一,具有代謝和解毒的作用。肉雞分別在35和38 ℃的環(huán)境中暴露3 h后,肝臟中MDA和PC的含量顯著升高,表明肉雞暴露于高溫下會(huì)導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的氧化損傷[24]。體外試驗(yàn)表明,EGCG可提高人體肝細(xì)胞SOD活性,同時(shí)降低MDA含量,提示其可提高肝細(xì)胞抗氧化能力,同時(shí)降低氧化損傷[25]。薛菠[14]研究發(fā)現(xiàn),飼糧中添加EGCG可顯著提高慢性熱應(yīng)激肉雞肝臟中SOD、GSH-Px和CAT的活性,同時(shí)顯著降低MDA含量。本研究表明,急性熱應(yīng)激肉雞肝臟中MDA和PC含量極顯著升高,T-SOD 和GSH-Px活力顯著降低,而飼糧中添加EGCG可極顯著降低急性熱應(yīng)激肉雞肝臟中MDA含量,同時(shí)顯著提高GSH-Px活力,表明EGCG能有效提高急性熱應(yīng)激肉雞肝臟抗氧化能力,從而緩解急性熱應(yīng)激對(duì)肝臟造成的損傷??梢?,EGCG具有良好的護(hù)肝作用,能有效緩解急性和慢性熱應(yīng)激對(duì)肉雞肝臟抗氧化功能的損害,緩解肝臟氧化損傷。

    3.3 EGCG對(duì)急性熱應(yīng)激肉雞肝臟Nrf2信號(hào)通路抗氧化基因表達(dá)的影響

    大量研究表明,Nrf2作為抗氧化系統(tǒng)中重要的轉(zhuǎn)錄因子[26-27],對(duì)于維持機(jī)體氧化平衡以及調(diào)控下游CAT和NQO1等抗氧化酶基因的表達(dá)具有至關(guān)重要的作用[28-30]。敲除Nrf2基因的小鼠對(duì)氧化應(yīng)激的敏感性增加,而使用激活劑增強(qiáng)Nrf2的表達(dá)可在一定程度上保護(hù)動(dòng)物免受氧化損傷。EGCG是綠茶多酚中含有的Nrf2活化劑,Wang等[31]研究表明飼糧中添加EGCG可上調(diào)蛋雞子宮Nrf2和HO-1mRNA表達(dá)量,從而提高蛋雞的抗氧化能力,緩解釩誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。薛波[14]研究表明,EGCG可顯著提高慢性熱應(yīng)激肉雞肝臟中Nrf2蛋白的表達(dá)水平。本研究顯示,急性熱應(yīng)激顯著降低肉雞肝臟中Nrf2、GSH-Px、CAT和NQO1的mRNA表達(dá)量,并顯著提高Keap1的mRNA表達(dá)量,這可能是急性熱應(yīng)激導(dǎo)致肉雞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷的主要原因,而飼糧中添加EGCG可顯著提高急性熱應(yīng)激肉雞肝臟中CATmRNA表達(dá)量,說明EGCG可能介導(dǎo)激活Nrf2信號(hào)通路提高機(jī)體抗氧化能力,進(jìn)而有效緩解急性熱應(yīng)激導(dǎo)致的氧化損傷。但具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究,后續(xù)研究可進(jìn)一步檢測(cè)Nrf2信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)水平,如結(jié)果與mRNA水平的結(jié)果一致,則可進(jìn)一步在細(xì)胞水平開展研究,基于Nrf2信號(hào)通路揭示EGCG緩解肉雞急性熱應(yīng)激的機(jī)制。

    4 結(jié) 論

    飼糧添加EGCG可提高急性熱應(yīng)激肉雞抗氧化能力,進(jìn)而緩解急性熱應(yīng)激造成的氧化損傷,其機(jī)制可能與EGCG激活Nrf2信號(hào)通路關(guān)鍵抗氧化基因表達(dá)有關(guān)。

    猜你喜歡
    空腸脾臟飼糧
    飼糧粗蛋白質(zhì)水平對(duì)肉雞消化酶活性及能量、蛋白質(zhì)代謝的影響
    十全大補(bǔ)湯加味聯(lián)合空腸營(yíng)養(yǎng)管改善胃惡性腫瘤患者療效觀察
    不同物理有效纖維水平飼糧制粒對(duì)山羊養(yǎng)分表觀消化率的影響
    保留脾臟的胰體尾切除術(shù)在胰體尾占位性病變中的應(yīng)用
    對(duì)診斷脾臟妊娠方法的研究
    腹腔鏡脾切除術(shù)與開腹脾切除術(shù)治療脾臟占位的比較
    硫酸鈉在蛋雞飼糧中的安全性評(píng)價(jià)
    循證護(hù)理在經(jīng)鼻胃鏡放置鼻空腸營(yíng)養(yǎng)管中的應(yīng)用效果
    單通道空腸間置在賁門癌近端胃切除術(shù)中的應(yīng)用
    空腸造瘺管腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)在胃癌患者輔助化療中的應(yīng)用
    我的老师免费观看完整版| 一区二区三区高清视频在线| av欧美777| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产真实乱freesex| 日本三级黄在线观看| 日韩国内少妇激情av| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精品粉嫩美女一区| 午夜精品久久久久久毛片777| 黄色丝袜av网址大全| 黑人操中国人逼视频| 悠悠久久av| 美女黄网站色视频| 久久九九热精品免费| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 午夜日韩欧美国产| 免费看a级黄色片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 高清毛片免费观看视频网站| 最新美女视频免费是黄的| 白带黄色成豆腐渣| 久久99热这里只有精品18| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产成人av教育| 日日爽夜夜爽网站| 男人舔奶头视频| 99在线人妻在线中文字幕| 十八禁人妻一区二区| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美性长视频在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 制服丝袜大香蕉在线| 久久久久性生活片| 亚洲午夜理论影院| 午夜福利18| 淫秽高清视频在线观看| 99热6这里只有精品| 欧美乱妇无乱码| 亚洲国产中文字幕在线视频| 色老头精品视频在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久久国产精品麻豆| 桃红色精品国产亚洲av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 长腿黑丝高跟| 日韩有码中文字幕| 国产熟女xx| 最好的美女福利视频网| 男女之事视频高清在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美激情久久久久久爽电影| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品久久视频播放| 最新美女视频免费是黄的| 熟女电影av网| 国产av不卡久久| 真人一进一出gif抽搐免费| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲国产精品sss在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美极品一区二区三区四区| 一级黄色大片毛片| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲精华国产精华精| 成人18禁在线播放| 国内精品一区二区在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 精品乱码久久久久久99久播| 嫁个100分男人电影在线观看| 天堂影院成人在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 深夜精品福利| 国产成人av教育| 9191精品国产免费久久| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 我的老师免费观看完整版| 99在线人妻在线中文字幕| 在线观看免费午夜福利视频| 特级一级黄色大片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 18美女黄网站色大片免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲av美国av| 热99re8久久精品国产| 人人妻人人看人人澡| 国产精品影院久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久久国产欧美日韩av| 免费搜索国产男女视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲熟妇熟女久久| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲色图av天堂| 色综合亚洲欧美另类图片| 99riav亚洲国产免费| 国产在线精品亚洲第一网站| 999精品在线视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 黄色片一级片一级黄色片| 在线国产一区二区在线| 国内揄拍国产精品人妻在线| 禁无遮挡网站| 一本综合久久免费| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品久久久久久久末码| 国产精品一区二区免费欧美| 国产三级在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美三级亚洲精品| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 天堂影院成人在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 国产成人精品久久二区二区91| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 又紧又爽又黄一区二区| 国产av不卡久久| 久久久久性生活片| 小说图片视频综合网站| 天堂动漫精品| 国产区一区二久久| 国产精品亚洲一级av第二区| or卡值多少钱| 中文字幕最新亚洲高清| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 成人18禁在线播放| 男人舔女人的私密视频| 一级片免费观看大全| 久久人妻av系列| 好男人电影高清在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 级片在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| or卡值多少钱| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲全国av大片| 99国产综合亚洲精品| 91麻豆av在线| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 精品久久久久久久毛片微露脸| 午夜福利成人在线免费观看| 午夜两性在线视频| 黄频高清免费视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 999久久久精品免费观看国产| 久久香蕉国产精品| 久久久国产成人精品二区| 国产精品99久久99久久久不卡| 99热只有精品国产| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 成年版毛片免费区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 老司机午夜福利在线观看视频| av免费在线观看网站| 国产高清视频在线观看网站| 国产视频内射| 国产精品一区二区精品视频观看| www.999成人在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产三级黄色录像| 成人18禁在线播放| 日韩免费av在线播放| 精品国内亚洲2022精品成人| 精品久久久久久久末码| 成年人黄色毛片网站| 高清在线国产一区| 精品不卡国产一区二区三区| 午夜免费观看网址| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99久久无色码亚洲精品果冻| 99热这里只有精品一区 | 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 全区人妻精品视频| 一个人免费在线观看电影 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 51午夜福利影视在线观看| 91大片在线观看| 此物有八面人人有两片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 51午夜福利影视在线观看| 九色国产91popny在线| 神马国产精品三级电影在线观看 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 18美女黄网站色大片免费观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲最大成人中文| videosex国产| 在线播放国产精品三级| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久久久九九精品影院| 91在线观看av| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久久久性生活片| 12—13女人毛片做爰片一| 99国产精品一区二区蜜桃av| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日韩成人在线观看一区二区三区| bbb黄色大片| 激情在线观看视频在线高清| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 久久人妻av系列| 国产野战对白在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品福利观看| 欧美日韩乱码在线| 国产精品电影一区二区三区| 香蕉av资源在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 成人av一区二区三区在线看| 久久久久国内视频| 一本大道久久a久久精品| 亚洲激情在线av| 久久久久性生活片| 国产精品综合久久久久久久免费| 日本一二三区视频观看| 婷婷精品国产亚洲av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 色尼玛亚洲综合影院| 日本五十路高清| 青草久久国产| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产av不卡久久| www.精华液| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 一本综合久久免费| 国产av不卡久久| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产三级中文精品| 国产欧美日韩一区二区精品| 日韩中文字幕欧美一区二区| 午夜福利在线观看吧| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲av电影在线进入| 日韩欧美国产在线观看| 美女免费视频网站| aaaaa片日本免费| 亚洲中文字幕日韩| 日韩av在线大香蕉| 成人永久免费在线观看视频| 久久久久久国产a免费观看| 级片在线观看| 美女免费视频网站| 首页视频小说图片口味搜索| 神马国产精品三级电影在线观看 | 亚洲真实伦在线观看| 一本久久中文字幕| 午夜激情av网站| 俄罗斯特黄特色一大片| 中文字幕av在线有码专区| 99热只有精品国产| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲国产精品999在线| 在线观看免费午夜福利视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成年版毛片免费区| 亚洲av熟女| 亚洲中文日韩欧美视频| 天堂动漫精品| 99热这里只有是精品50| 亚洲,欧美精品.| 成熟少妇高潮喷水视频| av国产免费在线观看| 一进一出抽搐动态| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲五月婷婷丁香| 一二三四在线观看免费中文在| 成在线人永久免费视频| 亚洲午夜理论影院| 露出奶头的视频| 男女那种视频在线观看| 两个人免费观看高清视频| 最新在线观看一区二区三区| 999精品在线视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲欧美日韩东京热| videosex国产| 男男h啪啪无遮挡| 99热只有精品国产| 最近最新中文字幕大全电影3| 五月伊人婷婷丁香| 欧美成人免费av一区二区三区| 精品人妻1区二区| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久久久久免费高清国产稀缺| 母亲3免费完整高清在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产91精品成人一区二区三区| 99久久综合精品五月天人人| 一级a爱片免费观看的视频| 黄色片一级片一级黄色片| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲五月婷婷丁香| 久久精品91蜜桃| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品98久久久久久宅男小说| av超薄肉色丝袜交足视频| 日韩国内少妇激情av| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 99精品在免费线老司机午夜| 免费高清视频大片| 淫妇啪啪啪对白视频| 99久久精品热视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品久久久av美女十八| 两人在一起打扑克的视频| 久久精品人妻少妇| x7x7x7水蜜桃| 岛国在线观看网站| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产伦在线观看视频一区| 黄色视频不卡| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日本一本二区三区精品| 免费在线观看完整版高清| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美中文综合在线视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美最黄视频在线播放免费| 97碰自拍视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 搞女人的毛片| 无人区码免费观看不卡| 99国产精品一区二区三区| 国产精品一及| 黄色片一级片一级黄色片| 一本综合久久免费| 无遮挡黄片免费观看| 欧美黑人巨大hd| 啦啦啦韩国在线观看视频| 午夜免费成人在线视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 成人欧美大片| www日本黄色视频网| 嫁个100分男人电影在线观看| 看片在线看免费视频| 五月伊人婷婷丁香| tocl精华| 亚洲最大成人中文| 久久久久久久久久黄片| bbb黄色大片| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 黄片小视频在线播放| 首页视频小说图片口味搜索| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 99热6这里只有精品| 日韩精品青青久久久久久| 免费在线观看黄色视频的| 一区二区三区高清视频在线| 美女 人体艺术 gogo| 久久久久久人人人人人| 99热6这里只有精品| 亚洲精品在线观看二区| 国产成人欧美在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品无人区乱码1区二区| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美又色又爽又黄视频| 国产区一区二久久| 亚洲国产看品久久| svipshipincom国产片| 国产av一区二区精品久久| 国产精品永久免费网站| 深夜精品福利| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 露出奶头的视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 丝袜美腿诱惑在线| 婷婷亚洲欧美| 高清毛片免费观看视频网站| 老司机靠b影院| 精品熟女少妇八av免费久了| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 老司机福利观看| 99re在线观看精品视频| 国产高清videossex| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美中文综合在线视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 国产午夜精品久久久久久| 女警被强在线播放| 国产v大片淫在线免费观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 叶爱在线成人免费视频播放| 午夜日韩欧美国产| videosex国产| 国产探花在线观看一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 午夜免费成人在线视频| 丝袜人妻中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| 成人午夜高清在线视频| 国产av麻豆久久久久久久| 免费av毛片视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 97碰自拍视频| 麻豆成人午夜福利视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产成人精品久久二区二区91| 午夜日韩欧美国产| 国产黄a三级三级三级人| 男女那种视频在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 99久久综合精品五月天人人| 大型黄色视频在线免费观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲国产看品久久| 69av精品久久久久久| 中文资源天堂在线| 国产午夜精品久久久久久| 最新美女视频免费是黄的| avwww免费| 亚洲精华国产精华精| 最新在线观看一区二区三区| 不卡一级毛片| 岛国在线免费视频观看| 一本综合久久免费| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲av片天天在线观看| 国产三级黄色录像| 可以在线观看毛片的网站| 床上黄色一级片| 91老司机精品| 国产不卡一卡二| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产亚洲精品第一综合不卡| 女警被强在线播放| 午夜视频精品福利| 在线观看午夜福利视频| 特级一级黄色大片| 舔av片在线| 中文字幕av在线有码专区| 99在线人妻在线中文字幕| 中文在线观看免费www的网站 | 禁无遮挡网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 成人午夜高清在线视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产99久久九九免费精品| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日韩中文字幕欧美一区二区| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 天堂√8在线中文| 日本在线视频免费播放| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 首页视频小说图片口味搜索| 丁香欧美五月| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久亚洲精品不卡| 亚洲第一电影网av| 久久这里只有精品中国| av片东京热男人的天堂| 久久久久久九九精品二区国产 | 欧美高清成人免费视频www| 亚洲av成人av| 观看免费一级毛片| 在线观看一区二区三区| 欧美3d第一页| 久久久久久免费高清国产稀缺| 最近最新免费中文字幕在线| 一本综合久久免费| 欧美午夜高清在线| 999精品在线视频| 久久久久国内视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 视频区欧美日本亚洲| 一本精品99久久精品77| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲欧美日韩无卡精品| 操出白浆在线播放| 国产精品综合久久久久久久免费| 女警被强在线播放| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 五月伊人婷婷丁香| 婷婷丁香在线五月| 一a级毛片在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 免费电影在线观看免费观看| 久久伊人香网站| 一a级毛片在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国内精品久久久久久久电影| 日韩欧美 国产精品| 香蕉丝袜av| 一级毛片精品| 国产欧美日韩一区二区三| 久久久国产成人免费| 黄色成人免费大全| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲av成人一区二区三| 深夜精品福利| www.精华液| 一a级毛片在线观看| 美女 人体艺术 gogo| ponron亚洲| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 搞女人的毛片| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产成人av激情在线播放| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美极品一区二区三区四区| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲男人的天堂狠狠| 美女大奶头视频| √禁漫天堂资源中文www| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 91在线观看av| 亚洲av第一区精品v没综合| 婷婷精品国产亚洲av| 男人的好看免费观看在线视频 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 男插女下体视频免费在线播放| 全区人妻精品视频| 国产真实乱freesex| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 无人区码免费观看不卡| 大型黄色视频在线免费观看| 在线观看免费午夜福利视频| 国产爱豆传媒在线观看 | 亚洲一区二区三区色噜噜| 制服诱惑二区| 日韩欧美 国产精品| 日本一区二区免费在线视频| 大型黄色视频在线免费观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 麻豆国产av国片精品| ponron亚洲| 很黄的视频免费| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美黄色淫秽网站| 日韩欧美精品v在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品久久久av美女十八| 成人三级做爰电影| 在线观看一区二区三区| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久天堂一区二区三区四区| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品乱码久久久久久99久播| 高潮久久久久久久久久久不卡| 哪里可以看免费的av片| 可以在线观看毛片的网站| 午夜福利免费观看在线| 韩国av一区二区三区四区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产一区在线观看成人免费| 国产久久久一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 宅男免费午夜| 中文字幕久久专区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久精品国产综合久久久| 极品教师在线免费播放| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 岛国在线免费视频观看| 亚洲色图av天堂| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲电影在线观看av| 好男人在线观看高清免费视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 夜夜夜夜夜久久久久| 村上凉子中文字幕在线| 国产激情久久老熟女| 国产精品一及| 窝窝影院91人妻| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| a级毛片在线看网站| 中文亚洲av片在线观看爽| 1024手机看黄色片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美午夜高清在线| 国产探花在线观看一区二区|