• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于UPLC-Q-TOF-MS技術對高鹽稀態(tài)醬油 發(fā)酵過程中代謝產物變化的分析

    2021-11-05 10:45:18馮云子黃梓堃趙謀明
    食品科學 2021年20期
    關鍵詞:總峰異黃酮醬油

    馮云子,黃梓堃,趙謀明

    (華南理工大學食品科學與工程學院,廣東 廣州 510640)

    醬油是東南亞國家常見的大宗發(fā)酵調味品,因其特殊的風味逐漸受到世界人民的喜愛。其以大豆或豆粕等植物蛋白、面粉或小麥粉等淀粉質為原料,經微生物接種發(fā)酵而制得的一種具有特殊色、香、味的液態(tài)調 味品[1]。醬油中含有豐富的初級代謝產物和次級代謝產物,與醬油的風味形成和生理功能密切相關。初級代謝產物包括還原糖、氨基酸、脂肪酸、碳水化合物、有機酸、蛋白質等[1],而次級代謝產物則有生物堿、黃酮類、皂苷、酚酸、苯丙素、硫代葡萄糖苷、多胺等[2]。

    代謝組學是研究樣品中所有的低分子質量代謝產物的一種技術,該研究方法比單一指標的分析方法更加系統(tǒng),目前廣泛應用于藥物學、環(huán)境監(jiān)測、微生物等領域[3]。 近年來,代謝組學技術在傳統(tǒng)發(fā)酵食品的研究領域應用越來越多,有助于解析發(fā)酵過程復雜的生物化學變化,揭示發(fā)酵機理[4],涉及的檢測手段主要包括核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技術、離子遷移光譜(ion mobility spectroscopy,IMS)、氣相色譜-質譜(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)聯(lián)用技術、液相色譜-質譜(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)聯(lián)用等。Wu Xiaohe等[5]采用1H-NMR技術對清香型、濃香型和醬香型的白酒大曲進行非靶標代謝組學分析,分別鑒定出蘋果酸、甘露醇、異亮氨酸等代表各自類型大曲的生物標志物;袁志鷹等[6]采用GC-IMS技術對發(fā)酵前后百合發(fā)酵乳的風味物質進行系統(tǒng)分析,找出15 種具有明顯差異的揮發(fā)性成分;Feng Yunzi等[7]采用頂空固相微萃取和氣相色譜-嗅覺測定技術檢測出醬油中2-甲基丁醛、3-甲硫基-丙醛等25 種 揮發(fā)性化合物;Lee等[8]采用氣相色譜-質譜聯(lián)用和LC-MS聯(lián)用技術對豆醬制作工藝進行分析,發(fā)現(xiàn)曲霉菌、芽孢桿菌、四聯(lián)球菌和結合酵母分別與糖、脂肪酸和氨基酸代謝有關。

    超高效液相色譜(ultra-high performance liquid chromatography,UPLC)與高分辨度四極桿飛行時間質譜(quadrupole-time-of-flight-mass spectrometry,Q-TOFMS)技術聯(lián)用,近年來在代謝組學研究中的使用頻率越來越高,相對于普通LC-MS技術具有更高的分辨度和靈敏度,對樣品分析效率和準確性大大提高[9]。如Cheng Lizeng等[10]采用UPLC-Q-TOF-MS對青磚茶發(fā)酵前后的代謝圖譜進行分析,共檢測出102 種關鍵代謝產物,證明了微生物發(fā)酵是改變生茶葉滋味的關鍵過程。Lee等[11]采用GC-TOF-MS和UPLC-Q-TOF-MS系統(tǒng)分析了豆醬整體發(fā)酵過程的代謝途徑及其產生的代謝產物,結合多元數(shù)據分析,將豆醬的發(fā)酵過程分為5 個階段。然而,目前鮮有采用UPLC-Q-TOF-MS技術對醬油發(fā)酵過程中代謝物質變化進行研究的相關報道。

    因此,本實驗對高鹽稀態(tài)醬油發(fā)酵過程進行對比分析,基于UPLC-Q-TOF-MS技術,結合主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法回歸分析(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA)等多元數(shù)據分析方法研究醬油發(fā)酵過程中代謝產物,明確醬油發(fā)酵階段間具有顯著性差異的物質,并確定其在醬油發(fā)酵過程中的變化趨勢,旨在為改進醬油發(fā)酵工藝提供理論基礎及支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    醬油采用高鹽稀態(tài)發(fā)酵工藝制作,分別于醬醪發(fā)酵第1、5、15、30、60、90天取樣,樣品貯存于密封的醬油瓶中,并貯藏于-20 ℃冰柜待用。

    乙醚(分析純,純度≥99.5%) 國藥集團化學試劑有限公司;甲醇、甲酸、乙腈(均為色譜純) 西格瑪奧德里奇(上海)貿易有限公司。

    1.2 儀器與設備

    EL204/EL3002電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司;Sorvall ST 16R臺式離心機 賽默飛世爾科技(中國)有限公司;RE-52AA旋轉蒸發(fā)儀 上海 亞榮生化儀器廠;SHZ-D循環(huán)水式真空泵 鞏義予華儀器有限公司;MTN-2800W氮吹濃縮裝置 天津奧特賽恩斯儀器有限公司;ACQUITY UPLC高效液相色譜儀、CORTECS UPLC C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm) 沃特世科技(上海)有限公司;MicrOTOF-Q II高分辨串聯(lián)質譜儀 布魯克(北京)科技有限公司;Milli-Q超純水機 美國密理博公司;WH-3微型旋渦混合儀 上海瀘西分析儀器廠有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 醬油樣品前處理

    參考李會品[12]研究,并基于前期預實驗結論優(yōu)化得到如下方法:取20 mL醬油于50 mL離心管中,加入15 mL乙醚后渦旋振蕩3 min,4 ℃、10 000 r/min離心15 min,用膠頭滴管移取有機相于另一離心管中。再加入15 mL乙醚于原離心管,重復上述操作,合并有機相。40 ℃水浴下,氮吹至干,用1 mL 80%甲醇溶液復溶,過0.22 μm濾膜備用。

    1.3.2 色譜條件

    參考Seo[13]和Chang Tesheng[14]等的方法并進行優(yōu)化改進。色譜柱采用CORTECS UPLC C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm),采用0.1%甲酸(A)和乙腈(B)作為流動相進行梯度洗脫,流速為 0.2 mL/min。梯度洗脫程序為:0~1 min,85% A、15% B;1~12 min,85%~20% A、15%~80% B;12~22 min,20%~0% A、80%~100% B;22~26 min,0% A、100% B;26~28 min,0%~85% A、100%~15% B;28~30 min,85% A、15% B。柱溫35 ℃,進樣量2 μL。

    1.3.3 質譜條件

    質譜掃描模式為正離子模式,掃描范圍m/z50~2 000,電子電離源能量10.0 eV,毛細管電壓3.5 kV,離子源加熱溫度200 ℃,干燥氣體流量 4.0 L/min,霧化器壓力0.5 bar。

    1.4 數(shù)據分析

    流動相條件設定及控制采用Hyphenation Star(version 3.2,Bruker Daltoik GmbH,德國)軟件控制,質譜數(shù)據信息用高分辨度飛行時間質譜軟件Otofcontrol(version 4.0,Bruker Impact II,德國)采集,基峰圖、總離子流圖和紫外信息采用Bruker Compass Data Analysis軟件(version 4.4,Bruker Daltoik GmbH,德國)進行分析。質譜信息定性參考數(shù)據庫包括人類代謝組數(shù)據庫HMDB 4.0(http://www.hmdb.ca)、METLIN數(shù)據庫(http://metlin.scripps.edu)和MassBank數(shù)據庫(http://www.massbank.jp)。數(shù)據分析采用Microsoft Excel 2019(微軟公司,美國)。柱狀圖繪制采用OriginPro(version 2018C,OriginLab公司,美國),多元數(shù)據分析采用SIMCA(version 14.1,MKS Umetrics,瑞典)完成。

    2 結果與分析

    2.1 醬油發(fā)酵過程樣品提取液的UPLC-Q-TOF-MS進樣情況

    采用UPLC-Q-TOF-MS技術,在高鹽稀態(tài)醬油發(fā)酵過程中檢出的所有代謝物質的數(shù)量及總峰面積如表1所示。醬油1 d中檢出156 種物質,隨著發(fā)酵的進行,醬油中的物質種類及總峰面積不斷增加,第1個月增長較快,后期變化減緩;到發(fā)酵終點(90 d)檢出物質共228 種,總峰面積達到2.8×108,物質種類及總峰面積分別為第1天樣品的1.47 倍和6.57 倍。

    表1 醬油發(fā)酵過程中各樣品提取液代謝物檢出數(shù)量和總峰面積Table 1 Number and total peak area of metabolites detected in soy sauce samples during the fermentation process

    圖1統(tǒng)計了醬油發(fā)酵過程中所有樣品提取液里被檢出的物質種類及數(shù)量,共鑒定化合物155 種,種類最豐富的是氨基酸衍生物、脂肪酸和有機酸,分別為31、28 種和21 種。此外,還共檢出13 種酯類、9 種酰胺類、8 種醇類、7 種氨基酸、7 種多肽、5 種異黃酮、3 種大豆甾醇、2 種生物堿等。

    圖1 醬油發(fā)酵過程樣品提取液被檢出的代謝產物種類Fig. 1 Change in composition of metabolites detected in soy sauce samples during the fermentation process

    2.2 醬油發(fā)酵過程中樣品提取液的差異代謝物質

    基于各樣品提取液中所有代謝物的聚類分析結果(表1),發(fā)酵過程中的樣品可分為兩組,第1、5、15天的醬油樣品為組I(發(fā)酵初期),發(fā)酵30、60、90 d的醬油樣品為組II(發(fā)酵后期),采用OPLS-DA對兩組樣品進行差異分析,認為變量投影重要性(variable importance projection,VIP)值大于1即為顯著差異代謝物。由表2可知,發(fā)酵階段間呈現(xiàn)顯著性差異的代謝物質共39 種,其中已知化合物34 種。可根據結構分為7 大類,即氨基酸衍生物類(10 種)、脂肪酸類(9 種)、異黃酮類(5 種)、酯類(3 種)、有機酸類(2 種)、生物堿(2 種)和其他類(3 種)化合物,大部分代謝物含量隨著發(fā)酵的進行逐漸增加。

    表2 醬油發(fā)酵過程樣品提取液間的差異代謝物質(VIP>1)Table 2 Differential metabolites (VIP > 1) among soy sauce samples during the fermentation process

    差異代謝物質的總峰面積和大類總峰面積變化趨勢如圖2所示。除有機酸外,各類物質的峰面積在發(fā)酵過程中上升。生物堿、氨基酸衍生物的峰面積在30 d后上升明顯,異黃酮、脂肪酸和酯類的峰面積呈波動上升。有機酸類的峰面積在1~5 d變化較大(5.26 倍),并于第30天達到峰值,之后稍有下降。李彥[15]對發(fā)酵過程中的總酸含量進行測定,發(fā)現(xiàn)其在1~20 d間含量迅速增加,之后趨于平穩(wěn),其變化趨勢與本模型相似。整體而言,差異代謝物的總峰面積變化與所有化合物總峰面積變化趨勢基本一致,變化較大的階段為1~5 d(3.10 倍)和30~60 d(1.56 倍)。除此之外,發(fā)酵第1天的樣品中氨基酸衍生物、異黃酮和生物堿的峰面積占總峰面積的0.44%、6.82%和0.02%,到第90天,其分別升至20.11%、14.88%和10.81%,是醬油中的關鍵差異代謝產物。

    圖2 各類差異代謝物在醬油發(fā)酵過程中的總峰面積變化Fig. 2 Changes in total peak area of each class of metabolites during soy sauce fermentation

    由圖3A所示,PC1和PC2的貢獻率分別為70.2%和16.2%,表明模型具有較好的代表性。得分圖(圖3A)中,各樣品點分散情況較好,說明不同發(fā)酵時間的醬油物質種類和含量均有差異。而載荷圖(圖3B)反映了醬油中的差異代謝物對PCA樣本分類的貢獻程度。整體上看,可以將醬油階段分成發(fā)酵前期和發(fā)酵后期,隨著發(fā)酵時間的延長,發(fā)酵過程具有從PC1負半軸往PC1正半軸演變的趨勢。針對各樣品,醬油1 d在第3象限,在對應的載荷圖中沒有點落于此,說明醬油1 d各類差異物質含量較低。醬油5 d、15 d在第2象限,載荷圖中第2象限有6 個物質,主要包括4 種脂肪酸(9-氧代十八烷酸、(11E)-十八碳烯酸、15-羥基亞油酸、12-羥基油酸)、 8-羅勒烯醇乙酸酯和阿魏酸。這些物質在發(fā)酵過程中的變化趨勢是先增后減,其峰面積于第5天或第15天達到峰值(表2)。醬油30 d、60 d和90 d均在1、4象限的分界線兩側,載荷圖中則顯示共有33 種物質都落于PC1正半軸上。說明隨著發(fā)酵的進行,醬油發(fā)酵過程樣品提取液間差異代謝物質主要集中于發(fā)酵后期(30 d之后)。

    圖3 醬油發(fā)酵過程樣品提取液的差異代謝物質的PCA 得分圖(A)和載荷圖(B)Fig. 3 PCA score plot (A) and loading plot (B) of differential metabolites in soy sauce samples during the fermentation process

    對于位于PC1正半軸的物質,5 種異黃酮落在 第1象限,即大豆素、黃豆黃素、染料木素、羥基大豆素、羥基染料木素。隨著發(fā)酵的進行,異黃酮峰面積不斷增加,在第90天達到峰值(圖2)。異黃酮是具有高生物活性的一類物質,其具有抗氧化、抗腫瘤、增強免疫力等功能[16-17],是醬油中常見的次級代謝產物。Chang Tesheng等[14]曾在醬油中鑒定出上述異黃酮,并證明了大豆素和染料木素分別是羥基大豆素和羥基染料木素的前體物質。另外,脫落酸和3,4-二甲基癸二酸也落在第1象限,其峰面積在前30 d的增長較快,之后趨于穩(wěn)定,在第90天達到峰值(表2)。

    第1、4象限分界線中的物質點十分密集,包括9 種氨基酸衍生物。它們的峰面積在發(fā)酵過程中不斷增加,在1~5 d和15~30 d變化較大(5.13 倍和10.62 倍),并第90天達到峰值(圖2)。其中N-乳酰異亮氨酸、N-乳酰亮氨酸、N-乳酰苯丙氨酸的VIP值為差異代謝物前3,分別為5.66、4.22和3.71,表明其增長最為明顯。含有乳?;陌被嵫苌镌谂翣栺R干酪(用脫脂乳制成的意大利干酪)和日式醬油中均有被發(fā)現(xiàn)[18-19],其中乳酰谷氨酸已經被證實對奶酪的鮮味具有貢獻[19-20]。乳酰氨基酸的生成與乳酰轉換酶有關,推測其含量與乳酸菌的作用可能相關[20],且乳酰氨基酸的生成可能對醬油發(fā)酵后期濃厚味的不斷增強具有一定貢獻。此外,還包括系列乙?;被岷铜h(huán)狀二肽,如N-乙酰異亮氨酸、N-乙酰亮氨酸、環(huán)-(L-脯氨酸-D-苯丙氨酸)和環(huán)-(L-脯氨酸-L-亮氨酸)。有研究表明在大豆種子和日式醬油中曾檢測到乙?;劝彼醄19,21]。對于環(huán)狀二肽,有文獻曾在煙曲霉培養(yǎng)液和鏈球菌培養(yǎng)液中鑒定出環(huán)-(脯氨酸-亮氨酸)和環(huán)-(脯氨酸-苯丙氨酸)[22],李會品[12]以XOD抑制活性為導向,在乙酸乙酯提取得到的醬油有機相中分離得到了另一種二肽,即環(huán)-(L-脯氨酸-L-丙氨酸),是醬油中的活性物質。但有研究表明,含L-脯氨酸的環(huán)肽是N端含有L-脯氨酸-L-X序列的肽在酶的作用下形成的,這些含L-脯氨酸的環(huán)肽可能主要呈苦味[23]。

    酒渣堿及脫羥甲基酒渣堿也落于PC1正半軸周圍。其峰面積在發(fā)酵前中期較低,從15 d開始變化差異顯著(5.41~7.04 倍),第90天達到峰值(圖2)。酒渣堿已被證實是醬油中的活性物質,其對于醬油的抗氧化活性具有卓越的貢獻[12],并能抑制黃嘌呤氧化酶活性,能降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平[24]。脫羥甲基酒渣堿也屬于駱駝蓬生物堿的一種,在水果和黑醋栗中曾被檢出[25]。此外,4 種脂肪酸在第4象限((10E,12Z)-9-氧代-10,12-十八碳二烯酸、(9Z,11E)-13-氧代-9,11-十八碳二烯酸,9,12,15-亞麻酸、(9Z)-十八碳烯酸)。其中(9Z)-十八碳烯酸與(11E)-十八碳烯酸互為順反異構體。

    其他類物質中,如色胺、萘胺等也落于第4象限。于金芝等[26]研究有發(fā)現(xiàn)在高鹽稀態(tài)醬油生產過程中,色胺含量隨發(fā)酵的進行先升后降,在第60天達到最大,其變化趨勢與本研究結果一致。

    3 結 論

    醬油發(fā)酵過程中的樣品共被鑒定出155 種代謝物質,其總峰面積在發(fā)酵1~5 d和30~60 d變化幅度較大,并于發(fā)酵末期(60~90 d)達到峰值。通過多元數(shù)據分析鑒定出34 種已知差異代謝產物(VIP>1)。氨基酸衍生物、異黃酮及生物堿等物質在醬油發(fā)酵過程中峰面積變化較大,均隨發(fā)酵過程的進行而升高,并于發(fā)酵第90天達到峰值,分別占總峰面積的20.11%、14.88%和10.81%。而脂肪酸和酯類分別從18.16%和17.72%下降至15.17%和6.13%。另外,VIP值前3的物質分別為N-乳酰異亮氨酸、N-乳酰亮氨酸、N-乳酰苯丙氨酸,這些代謝物均為含乳?;陌被嵫苌?。差異代謝物質的明確為醬油產品的調控及開發(fā)提供了重要理論基礎和方向,具有顯著差異的代謝物質對風味及活性貢獻值得進一步的研究探討。

    猜你喜歡
    總峰異黃酮醬油
    迷迭香精油在不同蒸餾時段的化學成分及抗氧化活性
    中成藥(2022年10期)2022-12-04 09:52:12
    頂空固相微萃取葡萄酒揮發(fā)性物質的條件優(yōu)化
    中國釀造(2020年6期)2020-08-02 10:06:20
    響應面法優(yōu)化以SPME-GC-MS技術萃取人參花揮發(fā)性成分工藝的研究
    特產研究(2018年4期)2018-12-11 01:12:04
    LC-MS測定黑豆中異黃酮和花色苷的含量
    總峰面積對糖化血紅蛋白結果的影響及其2種方法的比較*
    買醬油
    HPLC法同時測定天山巖黃芪中4 種異黃酮
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    買醬油
    故事大王(2016年10期)2016-11-07 15:30:12
    買醬油
    我把醬油打回來啦
    亚洲人成网站高清观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 成年女人永久免费观看视频| 如何舔出高潮| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 嫩草影院精品99| 88av欧美| 少妇人妻精品综合一区二区 | 成人二区视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产一区二区三区av在线 | 国产乱人视频| 国模一区二区三区四区视频| 精品久久久久久成人av| 国产免费av片在线观看野外av| 一个人免费在线观看电影| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国内精品久久久久精免费| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲国产色片| 亚洲乱码一区二区免费版| 真实男女啪啪啪动态图| 99riav亚洲国产免费| 香蕉av资源在线| 小说图片视频综合网站| 久久人妻av系列| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久久久久久久大av| 亚洲av五月六月丁香网| 日韩欧美在线二视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 精品久久久久久久久亚洲 | 成人欧美大片| 久久午夜亚洲精品久久| 草草在线视频免费看| 欧美日韩国产亚洲二区| 男人狂女人下面高潮的视频| 免费观看的影片在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产色婷婷99| 人妻久久中文字幕网| 精品一区二区三区视频在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 12—13女人毛片做爰片一| 国产 一区 欧美 日韩| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久久久免费精品人妻一区二区| 色5月婷婷丁香| 一a级毛片在线观看| 欧美三级亚洲精品| 国产精品一区二区性色av| 欧美一级a爱片免费观看看| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲天堂国产精品一区在线| 最近中文字幕高清免费大全6 | 人妻久久中文字幕网| 午夜亚洲福利在线播放| 高清日韩中文字幕在线| 午夜影院日韩av| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲精品在线观看二区| 热99re8久久精品国产| 此物有八面人人有两片| 日本黄色片子视频| 国产高清有码在线观看视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品福利在线免费观看| 无遮挡黄片免费观看| 中文字幕av成人在线电影| 三级国产精品欧美在线观看| 国内精品一区二区在线观看| netflix在线观看网站| 亚洲七黄色美女视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日韩欧美免费精品| 成人国产一区最新在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 超碰av人人做人人爽久久| 欧美日韩精品成人综合77777| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 免费av观看视频| 国产视频内射| 99热只有精品国产| 亚洲精品亚洲一区二区| av专区在线播放| 久久99热6这里只有精品| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲综合色惰| 我的老师免费观看完整版| 欧美最黄视频在线播放免费| 一进一出抽搐动态| 99久久中文字幕三级久久日本| 黄色一级大片看看| 在线免费十八禁| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产视频一区二区在线看| 日日夜夜操网爽| 人妻久久中文字幕网| 国产精品一区二区三区四区久久| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国模一区二区三区四区视频| 精品一区二区三区人妻视频| 欧美激情在线99| 少妇高潮的动态图| 久久精品综合一区二区三区| 联通29元200g的流量卡| 他把我摸到了高潮在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产高清三级在线| 最近视频中文字幕2019在线8| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲人成网站高清观看| 禁无遮挡网站| 日本a在线网址| 最新中文字幕久久久久| 欧美三级亚洲精品| 白带黄色成豆腐渣| 欧美日韩国产亚洲二区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲av二区三区四区| 国产毛片a区久久久久| 国产欧美日韩精品一区二区| bbb黄色大片| 日韩欧美精品免费久久| 久久久精品欧美日韩精品| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲不卡免费看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| av在线天堂中文字幕| 在线观看一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 欧美极品一区二区三区四区| 精品久久久久久久末码| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 午夜福利在线在线| 动漫黄色视频在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 男人狂女人下面高潮的视频| 99精品久久久久人妻精品| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 嫩草影院精品99| 国产精品,欧美在线| av.在线天堂| 伊人久久精品亚洲午夜| 久久久久久久久久成人| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 又爽又黄a免费视频| 可以在线观看的亚洲视频| 午夜福利在线观看吧| 成人无遮挡网站| 国内精品一区二区在线观看| 国产av一区在线观看免费| 1024手机看黄色片| 深爱激情五月婷婷| 一进一出好大好爽视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 久久精品国产亚洲网站| 51国产日韩欧美| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| bbb黄色大片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美高清性xxxxhd video| 联通29元200g的流量卡| 在线国产一区二区在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲成人久久性| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产 一区精品| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美日韩乱码在线| 中亚洲国语对白在线视频| 熟女人妻精品中文字幕| 春色校园在线视频观看| 亚洲av一区综合| 久久久久久国产a免费观看| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲成人中文字幕在线播放| 大型黄色视频在线免费观看| 中文字幕av成人在线电影| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 日本与韩国留学比较| 成人国产一区最新在线观看| 在线a可以看的网站| 欧美区成人在线视频| 色综合婷婷激情| 国产精品不卡视频一区二区| 淫妇啪啪啪对白视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 午夜久久久久精精品| 日本一本二区三区精品| 特大巨黑吊av在线直播| 成人性生交大片免费视频hd| 国产中年淑女户外野战色| 久久久色成人| 久久久久国内视频| 99在线人妻在线中文字幕| 黄色女人牲交| 成人三级黄色视频| 国产真实伦视频高清在线观看 | ponron亚洲| 欧美一级a爱片免费观看看| 成人综合一区亚洲| 成人一区二区视频在线观看| 99久久精品一区二区三区| 成年免费大片在线观看| 韩国av在线不卡| 极品教师在线视频| 成人无遮挡网站| 九九热线精品视视频播放| 99热网站在线观看| 午夜福利在线在线| 白带黄色成豆腐渣| 最近最新中文字幕大全电影3| 在线观看午夜福利视频| 老女人水多毛片| 亚洲美女视频黄频| 亚洲国产高清在线一区二区三| av福利片在线观看| 看片在线看免费视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产v大片淫在线免费观看| bbb黄色大片| 桃红色精品国产亚洲av| 一本一本综合久久| 亚洲黑人精品在线| 日本 欧美在线| videossex国产| 男女视频在线观看网站免费| а√天堂www在线а√下载| 性色avwww在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲成a人片在线一区二区| 1024手机看黄色片| 国产淫片久久久久久久久| 熟女人妻精品中文字幕| 51国产日韩欧美| 干丝袜人妻中文字幕| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 免费看a级黄色片| 午夜免费成人在线视频| 午夜福利高清视频| 婷婷精品国产亚洲av| 99热精品在线国产| 亚洲午夜理论影院| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲中文字幕日韩| 波多野结衣高清无吗| 久久亚洲精品不卡| av国产免费在线观看| 色吧在线观看| 有码 亚洲区| 亚洲美女视频黄频| 国产av不卡久久| 我要搜黄色片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久九九精品影院| 99久久精品国产国产毛片| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲精品456在线播放app | 美女cb高潮喷水在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 久久这里只有精品中国| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产av不卡久久| 免费看a级黄色片| 国产成人av教育| 国产精品久久久久久av不卡| 午夜福利在线观看吧| 午夜精品久久久久久毛片777| 人妻久久中文字幕网| 免费人成在线观看视频色| 动漫黄色视频在线观看| 精品午夜福利在线看| 在线国产一区二区在线| 日韩欧美在线二视频| 国产精品久久久久久久电影| 国产精品国产高清国产av| 成人永久免费在线观看视频| 日韩精品中文字幕看吧| 看十八女毛片水多多多| 亚洲第一区二区三区不卡| 在线观看66精品国产| 日韩人妻高清精品专区| 美女大奶头视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 日日撸夜夜添| 国产精品日韩av在线免费观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 一区二区三区免费毛片| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 日日撸夜夜添| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久久国产成人精品二区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲专区国产一区二区| 午夜a级毛片| 丰满的人妻完整版| 亚洲精品国产成人久久av| 真人一进一出gif抽搐免费| 夜夜夜夜夜久久久久| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产毛片a区久久久久| 三级国产精品欧美在线观看| 日韩欧美精品v在线| 久久久成人免费电影| 亚洲av第一区精品v没综合| 最近在线观看免费完整版| 精品无人区乱码1区二区| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 成人av一区二区三区在线看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 午夜激情欧美在线| 免费黄网站久久成人精品| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 亚洲三级黄色毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 少妇丰满av| 偷拍熟女少妇极品色| 乱系列少妇在线播放| 精品久久久噜噜| 简卡轻食公司| 国内精品久久久久精免费| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 99久久精品热视频| 亚洲18禁久久av| 一个人免费在线观看电影| 精品久久久久久久末码| 成年女人毛片免费观看观看9| 免费在线观看日本一区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲精品456在线播放app | 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美黑人欧美精品刺激| 毛片女人毛片| 亚洲美女搞黄在线观看 | 天堂影院成人在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| www.色视频.com| www.www免费av| 中文字幕免费在线视频6| 赤兔流量卡办理| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产91精品成人一区二区三区| 国模一区二区三区四区视频| 色av中文字幕| 亚洲午夜理论影院| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲国产精品sss在线观看| av视频在线观看入口| 少妇人妻精品综合一区二区 | 色综合婷婷激情| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 观看免费一级毛片| 国内精品美女久久久久久| 嫩草影院精品99| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 成年女人看的毛片在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲国产欧美人成| 一区二区三区四区激情视频 | 免费av不卡在线播放| 国产私拍福利视频在线观看| 俺也久久电影网| 日日夜夜操网爽| 亚洲精品亚洲一区二区| 制服丝袜大香蕉在线| 精品久久久久久成人av| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲综合色惰| 久久久久九九精品影院| 联通29元200g的流量卡| 精品人妻偷拍中文字幕| 舔av片在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 1000部很黄的大片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产毛片a区久久久久| 久久久久久久久大av| 精品一区二区三区视频在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产免费一级a男人的天堂| 少妇的逼好多水| 美女 人体艺术 gogo| 人人妻人人看人人澡| 成人三级黄色视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美日韩黄片免| 色综合站精品国产| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲最大成人中文| 久久这里只有精品中国| 好男人在线观看高清免费视频| 黄色欧美视频在线观看| av天堂在线播放| 色播亚洲综合网| 黄色丝袜av网址大全| 欧美三级亚洲精品| 久久久久久国产a免费观看| 国产69精品久久久久777片| 黄色配什么色好看| 精华霜和精华液先用哪个| 精品久久久久久久末码| 免费一级毛片在线播放高清视频| 日本五十路高清| 一夜夜www| 天堂网av新在线| av在线观看视频网站免费| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久久久性生活片| 一个人看的www免费观看视频| 国产高清激情床上av| 99在线视频只有这里精品首页| 国产精品人妻久久久久久| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美在线一区亚洲| 久久人妻av系列| 91av网一区二区| 午夜爱爱视频在线播放| 内射极品少妇av片p| 色综合亚洲欧美另类图片| 精品欧美国产一区二区三| 国产精品人妻久久久久久| 精品国产三级普通话版| 99riav亚洲国产免费| 可以在线观看毛片的网站| 色在线成人网| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲中文日韩欧美视频| www日本黄色视频网| 日本一二三区视频观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 成人国产一区最新在线观看| 日韩av在线大香蕉| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产av在哪里看| 性色avwww在线观看| 久久久久久久久中文| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 精品久久久噜噜| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 日韩亚洲欧美综合| 国产亚洲精品av在线| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲欧美清纯卡通| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 草草在线视频免费看| 成年人黄色毛片网站| 搞女人的毛片| 精品午夜福利在线看| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美日韩国产亚洲二区| www.色视频.com| 国产日本99.免费观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 乱人视频在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲 国产 在线| 亚洲精华国产精华精| 少妇的逼水好多| 免费电影在线观看免费观看| 国产日本99.免费观看| 99视频精品全部免费 在线| 国产成人福利小说| 精品久久久久久久久久久久久| 午夜免费成人在线视频| 男人的好看免费观看在线视频| 在线国产一区二区在线| 免费电影在线观看免费观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 此物有八面人人有两片| 午夜免费激情av| 18+在线观看网站| 久久精品国产清高在天天线| 99热这里只有是精品在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 中文在线观看免费www的网站| 中文字幕av成人在线电影| 69av精品久久久久久| 免费观看精品视频网站| 日本色播在线视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 波多野结衣巨乳人妻| 91麻豆精品激情在线观看国产| 免费看av在线观看网站| 欧美日韩黄片免| 亚洲五月天丁香| 深爱激情五月婷婷| 精品日产1卡2卡| 永久网站在线| 日韩强制内射视频| 亚洲人成网站在线播| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲av电影不卡..在线观看| 日本在线视频免费播放| 欧美日韩精品成人综合77777| 99热这里只有是精品在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 一本久久中文字幕| 麻豆成人av在线观看| 69人妻影院| 在线观看舔阴道视频| 色吧在线观看| 在线播放国产精品三级| 亚洲精品在线观看二区| bbb黄色大片| 悠悠久久av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| av在线蜜桃| 成年人黄色毛片网站| 黄色一级大片看看| 69人妻影院| 国产一区二区三区av在线 | 免费高清视频大片| 国产在线精品亚洲第一网站| 色吧在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日本 av在线| 日本三级黄在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 日本五十路高清| 99热6这里只有精品| 国产精品一区二区性色av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲专区国产一区二区| a在线观看视频网站| 亚洲国产精品合色在线| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品99久久久久久久久| 免费看美女性在线毛片视频| 国产伦在线观看视频一区| 两个人视频免费观看高清| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产黄色小视频在线观看| 国产免费男女视频| 91久久精品国产一区二区成人| .国产精品久久| 一边摸一边抽搐一进一小说| .国产精品久久| 春色校园在线视频观看| 亚洲中文字幕日韩| 午夜免费激情av| 色哟哟哟哟哟哟| 人妻少妇偷人精品九色| 一进一出抽搐gif免费好疼| 99精品久久久久人妻精品| 日韩欧美 国产精品| 一本一本综合久久| av在线蜜桃| 国产美女午夜福利| 午夜影院日韩av| 久久久国产成人精品二区| 黄片wwwwww| 亚洲久久久久久中文字幕| 最新中文字幕久久久久| 又爽又黄a免费视频| 深夜精品福利| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产精品精品国产色婷婷| 中文资源天堂在线| 九色成人免费人妻av| 色5月婷婷丁香| 日本a在线网址| 内射极品少妇av片p| 99久久无色码亚洲精品果冻| 久久香蕉精品热| 一本一本综合久久| 午夜福利18| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品日韩av在线免费观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国内精品宾馆在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 尤物成人国产欧美一区二区三区|