缺氧缺血性腦病患兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1的水平變化及與NBNA評(píng)分的關(guān)系

彭 青，曹曉鋒

（1.青海省婦幼保健院新生兒科，青海 西寧 810000；2.甘肅省人民醫(yī)院兒科，甘肅 蘭州 730000）

新生兒缺氧缺血性腦病（hypoxie ischemic encephalopathy，HIE）多數(shù)為缺氧缺血導(dǎo)致腦血流減少造成了新生兒腦損傷。有報(bào)道稱(chēng)[1]，國(guó)內(nèi)HIE 發(fā)生率在3‰～6‰，而存活的缺氧缺血腦病患兒有1/3 左右會(huì)遺留有神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，部分患兒會(huì)出現(xiàn)永久性神經(jīng)功能缺損。由于新生兒的臟器發(fā)育不成熟，因此在診斷和評(píng)估患兒疾病嚴(yán)重程度與預(yù)后方面難度較大。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）主要在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)存在，可以參與神經(jīng)細(xì)胞的分化與成熟，因此反映腦損傷極為敏感；8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷（8-OHDG）在評(píng)估人體氧化損傷與修復(fù)過(guò)程和氧化應(yīng)激反應(yīng)程度方面效果可靠；視錐蛋白樣蛋白1（VILIP-1）在腦部神經(jīng)元中存在，一旦腦組織損傷后其表達(dá)增高導(dǎo)致VILIP-1 釋放到細(xì)胞外，因此反映腦損傷程度也極為敏感[2]，但臨床對(duì)于上述三項(xiàng)指標(biāo)在新生兒HIE中的變化研究較少?；诖?，本研究探討HIE 患兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1的變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月-2020 年1 月青海省婦幼保健院新生兒科確診的111例HIE 患兒設(shè)為HIE組，另選取同期分娩的健康新生兒111 名作為對(duì)照組。HIE組分娩孕周37～41 周，平均分娩孕周（38.26±0.18）周；男59例，女51例；出生體質(zhì)量2.92～3.39 kg，平均體質(zhì)量（3.08±2.05）kg；剖宮產(chǎn)40例，順產(chǎn)71例。對(duì)照組分娩孕周37～41 周，平均分娩孕周（38.35±1.07）周；男52 名，女58 名；出生體質(zhì)量2.98～3.35 g，平均體質(zhì)量（3.05±1.62）g；剖宮產(chǎn)45 名、順產(chǎn)65 名。兩組分娩孕周、新生兒性別、出生體質(zhì)量、分娩方式比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，新生兒家屬知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①足月、單胎妊娠；②HIE的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考第四屆全國(guó)新生兒學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的HIE 診斷標(biāo)準(zhǔn)及臨床分度標(biāo)準(zhǔn)；③HIE 患兒出生后24 h 內(nèi)入住新生兒重癥監(jiān)護(hù)室；④對(duì)照組為同期分娩的健康新生兒。排除標(biāo)準(zhǔn)：①先天畸形；②伴有染色體疾?。虎鄹文I功能疾??；④早產(chǎn)兒；⑤出生體質(zhì)量＜2500 g。

1.3 方法 抽取研究對(duì)象空腹靜脈血3 ml，以2000 r/min離心30 min，分離血清置入-20 ℃冰箱待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定NSE 濃度，采用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定VILIP-1 水平，采用高效液相色譜法測(cè)定8-OHDG 濃度，試劑盒均由上海原生物工程研究所提供，并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.4 觀(guān)察指標(biāo) 比較兩組出生后第1、3、7 天血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平，并分析血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平與新生兒神經(jīng)行為（NBNA）評(píng)分的關(guān)系。NBNA評(píng)分：主要包括行為能力（6 項(xiàng)）、被動(dòng)肌張力（4 項(xiàng)）、主動(dòng)肌張力（4 項(xiàng)）、原始反射（3 項(xiàng)）、一般反應(yīng)（3 項(xiàng)），滿(mǎn)分40 分，＜35 分為異常。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)性分 析HIE患兒NBNA評(píng)分與8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平的關(guān)系，以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組新生兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平比較 HIE組出生后第1、3、7 天血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且在出生后第3 天，HIE組和對(duì)照組血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均達(dá)到高峰，見(jiàn)表1。

表1 兩組新生兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平比較（）

表1 兩組新生兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平比較（）

2.2 兩組新生兒NBNA評(píng)分比較 HIE組出生后第1、3、7 天NBNA評(píng)分均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組新生兒NBNA評(píng)分比較（，分）

表2 兩組新生兒NBNA評(píng)分比較（，分）

2.3 HIE 患兒NBNA評(píng)分與8-OHDG、NSE、VILIP-1水平的關(guān)系 出生后第3 天，HIE 患兒的NBNA評(píng)分與8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 HIE 患兒NBNA評(píng)分與8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平的關(guān)系

3 討論

新生兒HIE 屬于圍產(chǎn)兒最為常見(jiàn)的疾病，主要是圍產(chǎn)期新生兒發(fā)生窒息導(dǎo)致腦組織出現(xiàn)缺氧缺血損傷，進(jìn)而出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)異常、腦血流出現(xiàn)改變以及腦組織代謝異常的疾病，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致腦萎縮，影響新生兒生長(zhǎng)和發(fā)育，嚴(yán)重影響患兒生存質(zhì)量和生命健康[3]。新生兒HIE的發(fā)病機(jī)理極為復(fù)雜，體內(nèi)形成一系列連鎖反應(yīng)，目前對(duì)其發(fā)生的具體機(jī)制說(shuō)法不一，一方面認(rèn)為患兒體內(nèi)血流動(dòng)力學(xué)異常明顯，缺氧后為了確保心臟和腦組織血液供應(yīng)，新生兒的調(diào)節(jié)功能會(huì)代償，但是隨著病情不斷進(jìn)展，其代償能力降低，反應(yīng)調(diào)節(jié)能力弱化，而且缺氧造成腦組織細(xì)胞能力代謝障礙，線(xiàn)粒體呼吸和氧化磷酸化功能障礙，糖酵解過(guò)程中的關(guān)節(jié)酶活性被抑制，因此能力代謝衰竭和細(xì)胞內(nèi)水腫逐漸加重，形成了惡性循環(huán)[4，5]。另一方面，神經(jīng)元興奮性升高，神經(jīng)元之間的信息傳遞主要依靠突觸完成，缺氧缺血會(huì)導(dǎo)致能量衰竭，細(xì)胞膜發(fā)生去極化，過(guò)度激活突觸后的谷氨酸受體，造成了細(xì)胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流增加，體內(nèi)形成連鎖反應(yīng)導(dǎo)致遲發(fā)性神經(jīng)元死亡[6]；且腦組織缺氧形成后體內(nèi)三磷酸腺苷降解增加，體內(nèi)氧自由基形成增多，同時(shí)白細(xì)胞呼吸爆發(fā)以及單胺氧化酶作用在兒茶酚按中也會(huì)形成大量的氧自由基，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)加重，而腦組織對(duì)于氧自由基損傷極為敏感，會(huì)對(duì)細(xì)胞膜造成攻擊，膜通透性增加，進(jìn)一步加重腦組織損傷[7，8]。此外人體細(xì)胞免疫和體液免疫變化也是導(dǎo)致新生兒HIE 體內(nèi)引發(fā)變化的重要原因，其因缺血再灌注后腦組織細(xì)胞分泌的單核細(xì)胞趨化因子以及細(xì)胞黏附分子增多，腦缺血再灌注區(qū)域內(nèi)大量的免疫活性細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)與集聚，患兒機(jī)體免疫功能發(fā)生紊亂，影響了患兒細(xì)胞免疫和體液免疫的正常運(yùn)轉(zhuǎn)機(jī)制[9，10]。

目前臨床缺乏評(píng)估HIE 病情和預(yù)后的特異性指標(biāo)，以往采用NBNA評(píng)分系統(tǒng)作為監(jiān)測(cè)新生兒腦損傷的評(píng)估指標(biāo)，通過(guò)NBNA評(píng)分可盡早了解患兒情況，以便早期治療，改善患兒預(yù)后[11]。近年來(lái)，血清學(xué)指標(biāo)在臨床廣泛應(yīng)用，NSE 屬于糖酵解過(guò)程中特異性的關(guān)鍵酶，主要存在神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中，一旦腦組織發(fā)生缺氧缺血，神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死，NSE 會(huì)釋放進(jìn)入腦脊液，血腦屏障被破壞后通透性升高；NSE 還可以進(jìn)入到外周血，其對(duì)于判斷神經(jīng)元損傷程度和評(píng)估新生兒預(yù)后具有重要意義[12]。研究發(fā)現(xiàn)[13]，在動(dòng)物血清中NSE 水平在發(fā)生缺氧缺血后明顯增高，在受損傷神經(jīng)元中NES 水平會(huì)顯著降低。VILIP-1 則是人體最早發(fā)現(xiàn)的鈣傳導(dǎo)蛋白，其可以參與突觸可塑性的調(diào)節(jié)過(guò)程中，具有極高的神經(jīng)系統(tǒng)特異性，在神經(jīng)元鈣依賴(lài)型信號(hào)傳導(dǎo)并調(diào)節(jié)信號(hào)瀑布中具有重要作用。有報(bào)道指出[14]，VILIP-1 主要存在人體腦神經(jīng)元中，一旦腦細(xì)胞受損后會(huì)向細(xì)胞外釋放大量的VILIP-1 進(jìn)入到人體外周血，其可以反映腦損傷程度。8-OHDG 屬于DNA 氧化損傷終產(chǎn)物，人體腦組織缺氧損傷后會(huì)形成大量的氧自由基，對(duì)DNA的鳥(niǎo)嘌呤堿基第8 位碳原子進(jìn)行攻擊，發(fā)生氧化還原反應(yīng)后造成DNA 鏈斷裂、堿基修飾與DNA 蛋白交聯(lián)等反應(yīng)，造成了神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，進(jìn)一步發(fā)生腦組織細(xì)胞凋亡與壞死[15]。因此，當(dāng)人體氧化應(yīng)激反應(yīng)程度升高后或者病情加重，8-OHDG會(huì)顯著升高，可間接反映氧化應(yīng)激反應(yīng)程度。本研究結(jié)果顯示，HIE組出生后第1、3、7 天血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明新生兒HIE 體內(nèi)8-OHDG、NSE、VILIP-1 濃度顯著升高，提示新生兒腦組織發(fā)生損傷。HIE組出生后第1、3、7 天NBNA評(píng)分均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明在新生兒HIE 中NBNA評(píng)分會(huì)降低。此外，相關(guān)性分析顯示，HIE 患兒出生后第3 天NBNA評(píng)分與8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），說(shuō)明通過(guò)監(jiān)測(cè)8-OHDG、NSE、VILIP-1 對(duì)評(píng)估HIE 患兒病情變化、指導(dǎo)治療以及預(yù)后具有重要的評(píng)定意義。但本研究因納入患者數(shù)量有限，無(wú)法開(kāi)展長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)，因此還需要進(jìn)一步開(kāi)展多中心、大樣本量、長(zhǎng)期隨訪(fǎng)深入研究。

綜上所述，HIE 患兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1的水平較健康新生兒顯著升高，且與新生兒神經(jīng)行為發(fā)育有關(guān)。