2015-2019年云南省紅河州蒙自市禽流感、新城疫血清學(xué)調(diào)查研究

王艷芬，黃 鑫，舒相華，董 燕，宗月蘭，張雅靖，呂 濤，王余磊，張智慧，張雅倫，宋春蓮

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，昆明 650201；2.云南省紅河州蒙自市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，蒙自 661199；3.昆明偉牧得生物科技有限公司，昆明 650201）

禽流行性感冒（avian influenza，AI），是由正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起，以感染禽類為主的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病[1]。近年來(lái)有人感染禽流感的報(bào)道，屬于人禽共患傳染病。該病的主要傳染源是病禽和帶毒的禽，病毒通過(guò)呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)隨分泌物、排泄物排出并通過(guò)直接接觸和間接接觸來(lái)進(jìn)行擴(kuò)散傳播。雞新城疫（Newcastle disease，ND）又稱為亞洲雞瘟，是由副黏病毒科腮腺炎病毒屬新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的一種烈性病毒性傳染病。NDV存在于病禽的全部組織和器官、體液、分泌物和排泄物中，對(duì)大腦、脾臟和肺臟具有高度毒性，以呼吸困難、下痢、神經(jīng)癥狀明顯，黏膜和漿膜出血為特征的急性敗血性傳染病，死亡率高。雞在各個(gè)階段都可能感染此病，雛雞的感染率比成年雞高。因此，禽流感和新城疫可對(duì)養(yǎng)禽業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展產(chǎn)生巨大的影響[2]。

禽流感和新城疫都曾給養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)毀滅性打擊。隨著現(xiàn)代養(yǎng)雞業(yè)的迅猛發(fā)展，雞產(chǎn)品流通快，市場(chǎng)交易頻繁，禽流感與新城疫的防控形式嚴(yán)峻，目前對(duì)禽流感與新城疫的預(yù)防主要采取強(qiáng)制免疫、加強(qiáng)消毒、隔離、無(wú)害化處理等多項(xiàng)防疫措施。定期進(jìn)行血清學(xué)的主動(dòng)監(jiān)測(cè)，強(qiáng)化補(bǔ)免，形成高水平的免疫抗體屏障，有效防疫兩種病的發(fā)生。

云南省紅河州蒙自市地處云南東南，與 越南接壤，規(guī)?；B(yǎng)殖程度不高，有23個(gè)的規(guī)模場(chǎng)（5個(gè)蛋雞場(chǎng)、6個(gè)蛋鴨場(chǎng)、12個(gè)肉雞場(chǎng)），大部分是林下養(yǎng)殖的散養(yǎng)戶。為了解本地區(qū)禽流感、新城疫疫苗免疫情況，本研究對(duì)2015-2019年的全市規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶進(jìn)行了跟蹤檢測(cè)，通過(guò)數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)，可為該地區(qū)的防疫工作提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源 2015-2019年云南省紅河州蒙自市的規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶的雞血清2687份。

1.2 樣品采集 11個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）每年春、秋兩季接種疫苗后1個(gè)月，采集雞翅下靜脈血液，靜置或3000 ×g離心15 min后取上層血清，置于4℃保存，備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 禽流感疫苗：山東信得（20150201）；哈爾濱維科（2016010、201605）；廣東永順（2018034、2019002）；哈藥集團(tuán)（2019129）等。雞新城疫疫苗：云南生物藥廠Ⅰ系、Ⅳ系或新支2聯(lián)苗，批號(hào)分別為20150315、20160421、20170623、20180425和20180803等。禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原：哈爾濱維科，批號(hào)分別為2018004、2018006、2019004、2019005等。禽流感H5亞型和雞新城疫陽(yáng)性血清均購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，批號(hào)分別為2015010、2016003、2017001、2018003、050721、20170801、20181003和20181106等。PBS緩沖液購(gòu)自天津洋華科技生物有限公司。1%雞紅細(xì)胞懸液：采集健康并且未免疫成年公雞血液，加入采血量十分之一抗凝劑，加入PBS緩沖液2500 ×g離心5～8 min，洗滌3次后棄上清液，加入10倍血量PBS緩沖液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 檢測(cè)方法 依據(jù)國(guó)家《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2003）和《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T 16550-2008R）的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)。群體免疫抗體陽(yáng)性率到達(dá)70%以上為免疫合格。

1.5 結(jié)果判定 血凝試驗(yàn)（HA）以能使紅細(xì)胞完全凝集的抗原最大稀釋倍數(shù)為抗原血凝價(jià)，以完全抑制4個(gè)HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為血凝抑制試驗(yàn)（HI）效價(jià)，HI效價(jià)＜51og2判定為陰性，HI效價(jià)≥5log2判為陽(yáng)性。

1.6 數(shù)據(jù)分析 對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行匯總和描述性分析，差異顯著性用IBM SPSS statistics 25中的卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 2015-2019年各年度禽流感、新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果 如表1可見，禽流感除2018、2019年低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)外，其余年份均高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，抗體總陽(yáng)性率為78.15%，為免疫合格，高于貴州省（68.10%）[3]和安徽?。?7.7%）[4]部分地區(qū)。新城疫在這5年間抗體陽(yáng)性率均達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，且抗體陽(yáng)性率均高于84%，總陽(yáng)性率為87.72%，低于2017年西安市（95%）[5]；高于2015年廈門市同安區(qū)（50.1%）[6]；與2018年玉溪通海市（89.87%）[7]檢測(cè)結(jié)果相差不多。

表1 云南省紅河州蒙自市 2015-2019年禽流感、新城疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果Table 1 Antibody monitoring results of avian influenza and Newcastle disease from 2015 to 2019 in Mengzi, Honghe prefecture, Yunnan province

2.2 春秋防抗體檢測(cè)結(jié)果比較 云南省紅河州蒙自市2015-2019年禽流感、新城疫免疫抗體陽(yáng)性率季節(jié)差異情況如表2和表3所示。2015-2018年禽流感抗體陽(yáng)性率春防均高于秋防，且2015-2017年陽(yáng)性率高于80%，免疫效果較好；2019年抗體陽(yáng)性率秋防高于春防。2018年秋防（50.58%）和2019年春防（65.94%）陽(yáng)性率低于70%，免疫失敗。2015-2018年新城疫抗體陽(yáng)性率春防均高于秋防，且陽(yáng)性率均高于89%，免疫效果較好；2019年抗體陽(yáng)性率秋防高于春防。

表2 禽流感春、秋免疫檢測(cè)情況比較Table 2 Comparison of spring and autumn immunodetection of avian influenza

表3 新城疫春、秋防免疫檢測(cè)情況比較Table 3 Comparison of spring and autumn immunodetection of Newcastle disease

2.3 2015-2019年11個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）禽流感、新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果 云南省紅河州蒙自市11個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）2015-2019年禽流感、新城疫監(jiān)測(cè)結(jié)果見表4和表5。禽流感抗體免疫合格率，2015年11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)比較中，1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（冷泉）未檢測(cè)，4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（新安所、鳴鷲、老寨、水田）不合格，6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格；2016年1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（芷村）未檢測(cè)，3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（老寨、冷泉、西北勒）不合格，7個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格；2017年5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（芷村、鳴鷲、老寨、期路白、西北勒）不合格，6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格；2018年1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（芷村）未檢測(cè)，5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（雨過(guò)鋪、新安所、鳴鷲、老寨、西北勒）不合格，5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格；2019年6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（雨過(guò)鋪、草壩、新安所、期路白、水田、西北勒）不合格，5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格。5年的禽流感總平均陽(yáng)性率除文瀾（93.29%）、草壩（89.31%）合格外，其余均為不合格。

表4 2015-2019年11個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）禽流感抗體檢測(cè)結(jié)果Table 4 Detection results of avian influenza antibody in 11 townships (towns) from 2015 to 2019

表5 2015-2019年11個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果Table 5 Detection results of Newcastle disease antibodies in 11 townships (towns) from 2015 to 2019

新城疫抗體免疫合格率，2015年11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)比較1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（冷泉）未檢測(cè)，3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（鳴鷲、老寨、水田）不合格，7個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格；2016年1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（芷村）未檢測(cè)，5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（新安所、老寨、期路白、水田、西北勒）不合格，5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格；2017年5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（芷村、老寨、期路白、水田、西北勒）不合格，6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格；2018年1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（芷村）未檢測(cè)，3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（期路白、水田、西北勒）不合格，7個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格。2019年3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（老寨、期路白、西北勒）不合格，8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)合格。5年的新城疫總平均陽(yáng)性率除老寨（53.78%）、期路白（30%）、水田（50.94%）、西北勒（20.54%）不合格外，其余均為合格。

該市地形多為山區(qū)和壩區(qū)，其中文瀾、雨過(guò)鋪、草壩、新安、冷泉等地處壩區(qū)，與其余鄉(xiāng)鎮(zhèn)比經(jīng)濟(jì)相對(duì)發(fā)達(dá)，農(nóng)戶科學(xué)防病思想意識(shí)高，家禽養(yǎng)殖規(guī)模大，數(shù)量多，便于科學(xué)管理和 疫情控制，因此免疫合格率較高。而老寨、期路白、西北勒等屬于山區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，養(yǎng)殖戶居住分散，每戶零星養(yǎng)上幾十只禽類，防疫意識(shí)較差，疫苗基本不做，因此相對(duì)檢測(cè)結(jié)果均不達(dá)標(biāo)。這與張小苗[8]云南省建水縣調(diào)查結(jié)果類似。采樣困難，數(shù)據(jù)少，甚至有些鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）某些年份采集不到樣品，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生誤差，結(jié)果影響總體水平。且很多鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）野生禽類棲息在周邊山區(qū)，有攜帶禽流感、新城疫病毒入侵的風(fēng)險(xiǎn)；市區(qū)存在的鴿群、觀賞禽類沒有進(jìn)行過(guò)任何形式的免疫；一些散養(yǎng)戶中飼養(yǎng)多種禽類動(dòng)物但只對(duì)雞進(jìn)行禽流感、新城疫疫苗免疫，也存在著較大的安全隱患。通過(guò)監(jiān)測(cè)及分析，掌握不同鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）禽群免疫狀態(tài)并向養(yǎng)殖鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）反饋監(jiān)測(cè)結(jié)果，有助于養(yǎng)殖場(chǎng)制定科學(xué)合理的免疫程序，督促免疫抗體不合格和未免疫養(yǎng)殖場(chǎng)及時(shí)做好補(bǔ)免、重免工作[9]。

2.4 該市禽流感和新城疫的免疫程序及分析 規(guī)模場(chǎng)禽流感疫苗免疫程序?yàn)椋旱半u7～14日齡初免，3～4周加免，開產(chǎn)前再進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫，之后根據(jù)抗體檢測(cè)結(jié)果每半年免疫1次；肉雞7～14日齡初免，3～4周可加免1次或不免；散養(yǎng)戶春、秋兩季各進(jìn)行1次集中免疫，每月定期補(bǔ)免。規(guī)模場(chǎng)新城疫疫苗免疫按各自的免疫程序，散養(yǎng)戶同禽流感。規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)具有相對(duì)較強(qiáng)的防疫意識(shí)，嚴(yán)格科學(xué)的免疫程序；而很多散養(yǎng)戶免疫程序不合理或落實(shí)不到位，沒有規(guī)模場(chǎng)的經(jīng)驗(yàn)免疫[10]。為了確保免疫水平還應(yīng)實(shí)施合理的免疫措施，規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶的抗體陽(yáng)性率低于70%時(shí)，應(yīng)對(duì)所在群體實(shí)施緊急免疫接種[11]。

2.5 規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶檢測(cè)結(jié)果比較 2015-2019年監(jiān)測(cè)的規(guī)模場(chǎng)分別有13戶（472羽）、12戶（456羽）、14戶（406羽）、13戶（399羽）、16戶（395羽），散戶分別為19戶（140羽）、16戶（145羽）、13戶（107羽）、15戶（103羽）、9戶（64羽）。

2.5.1 禽流感檢測(cè)結(jié)果 2015-2019年，規(guī)模化戶免疫合格率均在70%以上為合格，散養(yǎng)戶均為不合格；規(guī)模戶和散養(yǎng)戶比較，除2019年外，其余年份均為差異極顯著（P＜0.01）。但規(guī)模戶免疫陽(yáng)性率呈下降趨勢(shì)，散養(yǎng)戶呈上升趨勢(shì)。

圖1 規(guī)模戶和散養(yǎng)戶免疫合格率比較Fig.1 Comparison of immunization pass rate between large-scale farms and free-range households

2.5.2 新城疫檢測(cè)結(jié)果 2015-2019年，規(guī)?；瘧裘庖吆细衤示?0%以上為合格，散養(yǎng)戶均為不合格；規(guī)模戶和散養(yǎng)戶比較5個(gè)年份均為差異極顯著（P＜0.01），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

規(guī)模戶和散養(yǎng)戶比較，禽流感和新城疫免疫合格率均為顯著差異，規(guī)模戶均達(dá)到合格，散養(yǎng)戶均為不合格，可見散養(yǎng)戶的防疫意識(shí)較差，免疫程序不合理，甚至部分不愿免疫。這與元振杰等[12]以及潘福寶等[13]對(duì)家禽高致病禽流感調(diào)查中表明規(guī)模場(chǎng)的禽流感免疫合格率極顯著高于散養(yǎng)戶的情況一致。

本次研究通過(guò)對(duì)云南省紅河州蒙自市規(guī)?；吧B(yǎng)戶禽流感、新城疫疫苗免疫效果進(jìn)行調(diào)查，為了解該地區(qū)禽流感、新城疫的免疫情況并提供科學(xué)有效的防控依據(jù)。

圖2 2015年至2019年規(guī)模場(chǎng)與散養(yǎng)戶檢測(cè)結(jié)果Fig.2 Comparison of immunization pass rate between large-scale farms and free-range households