噁唑酰草胺及其代謝物在水稻上的殘留檢測(cè)方法和儲(chǔ)藏穩(wěn)定性研究

楊 靜，牛 艷，吳 燕，趙子丹，劉 霞，茍春林

（寧夏農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，寧夏 銀川 750002）

噁唑酰草胺為韓國化工技術(shù)研究院開發(fā)的新型芳氧苯氧丙酸酯類除草劑[1-3]，可極好地防除大多數(shù)一年生禾本科雜草，它的作用機(jī)理是通過抑制乙酰輔酶A羧化酶而發(fā)揮除草作用[4-6]。與大多數(shù)此類除草劑不同，噁唑酰草胺對(duì)水稻安全，是一種高效、低毒、環(huán)境友好、可廣泛使用的新型除草劑[7-11]。

目前，噁唑酰草胺的殘留檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法、液相色譜質(zhì)譜法等。張?jiān)耓12]采用液相色譜質(zhì)譜法測(cè)定水稻和水田中噁唑酰草胺殘留，但該方法只測(cè)定噁唑酰草胺的殘留量，未測(cè)定其代謝物的殘留情況。Barik等[13]測(cè)定了噁唑酰草胺及其代謝物N-（2-氟苯基）-2-羥基-N-甲基丙酰胺（HFMPA）在稻田生態(tài)系統(tǒng)中的持久性行為，但代謝物只測(cè)定了HFMPA。豆葉枝等[14]采用分散萃取-液相色譜質(zhì)譜法測(cè)定了水稻和環(huán)境介質(zhì)中的噁唑酰草胺及其代謝物，但儀器方法復(fù)雜，代謝物6-氯-2-苯噁唑啉酮（6-CBO）需與噁唑酰草胺及其余代謝物分別檢測(cè)。羅傲等[15]建立了水稻中噁唑酰草胺及其代謝物的液相色譜質(zhì)譜方法，但其色譜圖未完全分離。

本文采用QuEChERS前處理方法，建立了水稻中噁唑酰草胺及其代謝物的超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法，該方法簡單快捷，準(zhǔn)確且靈敏度高?？疾炝藝f唑酰草胺及其代謝物在水稻基質(zhì)中的穩(wěn)定性，可為其他農(nóng)作物中噁唑酰草胺及其代謝物的殘留檢測(cè)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料與試劑

99.7 %噁唑酰草胺，天津阿爾塔科技有限公司；99.5%代謝物N-（2-氟苯基）-2-（4-羥基苯氧基）-N-甲基丙酰胺（HPMFPA）、HFMPA、6-CBO標(biāo)準(zhǔn)品，北京博雅開元科技有限公司；乙腈（色譜純），德國默克公司；氯化鈉（140℃烘烤4 h），N-丙基乙二胺（PSA）和C18，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；試驗(yàn)用水為Milli-Q超純水，美國Millipore公司。

1.1.2 儀器與設(shè)備

Ultimate 3000 TSQ Quantum Access液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國Thermo公司；TDL-40C低速臺(tái)式大容量離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；THZ-82A水浴恒溫振蕩器，金壇榮華儀器公司；MS3 digital型渦旋混合器，德國IKA公司；PL202-L、XS205型電子天平，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制：準(zhǔn)確稱取HPMFPA、HFMPA、6-CBO標(biāo)準(zhǔn)品（精確于0.000 1 g）于100 mL容量瓶，用乙腈定容至刻度，搖勻，配制成1 000 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18℃冰箱冷凍保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制：用乙腈將上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制成濃度為0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取稻殼、糙米樣品各5.00 g、稻桿2.00 g于50 mL離心管中，加入10.00 mL水浸泡30 min后加入20.0 mL乙腈，振蕩提取40 min，加入5.0 g氯化鈉，振搖約1 min，于4 000 r/min離心3 min。移取上清液1.00 mL于盛有100 mg PSA和50 mg C18的離心管中，渦旋1 min，于4 000 r/min離心5 min，上清液過0.22μm濾膜，待測(cè)。

1.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

稱取糙米和稻殼空白樣品5.00 g，稻桿空白樣品2.00 g于50 mL離心管中，按照0.5 mg·kg-1的添加水平直接在儲(chǔ)藏穩(wěn)定試驗(yàn)所需數(shù)量的空白樣品中添加噁唑酰草胺及代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液（注：標(biāo)液為單獨(dú)添加），將所有離心管進(jìn)行密封，放入-18℃冰箱中保存。

1.2.4 儀器條件

1.2.4.1 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18（100 mm×2.1 mm,3.5μm）；柱溫：45℃；流動(dòng)相：乙腈-水；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：2.0μL。洗脫方式為梯度洗脫，洗脫條件見表1。

表1 液動(dòng)相梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution conditions of UPLC

1.2.4.2 質(zhì)譜條件

離子源：ESI+；噴霧電壓：3.5 kV；鞘氣：30 arb[5]；輔氣：10 arb；毛細(xì)管傳輸溫度：300℃；碰撞壓力：0.2 Pa；掃描模式：選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM），質(zhì)譜條件見表2。

表2 質(zhì)譜條件Table 2 MS parameters

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2007軟件處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性方程和方法定量限

配制0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，在上述確定的檢測(cè)條件下進(jìn)樣，圖1為噁唑酰草胺及其代謝物的色譜圖。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。由表3可知，噁唑酰草胺及其代謝物在此濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r值均大于0.99，方法定量限為0.01 mg·kg-1。

表3 噁唑酰草胺及其代謝物的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)和定量限Table 3 Standard curve equation,correlation coefficients and LOQ of metamifop and its metabolites

圖1 0.2 mg·L-1噁唑酰草胺及其代謝物的SIM色譜圖Fig.1 Chromatograms of metamifop and its metabolites（0.2 mg·L-1）

2.2 方法回收率和精密度

分別在糙米、稻殼、稻桿的空白樣品中按照0.01、0.05、0.5 mg·kg-13個(gè)質(zhì)量濃度水平單獨(dú)添加噁唑酰草胺及其代謝物的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度5次平行，進(jìn)行添加回收試驗(yàn)。由表4可知，在0.01～0.5 mg·kg-1添加水平范圍內(nèi)，噁唑酰草胺及其代謝物在糙米中添加回收率為75.2%～108.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.8%～10.3%；在稻殼中添加回收率為70.1%～101.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～11.9%；在稻桿中添加回收率為73.4%～103.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～9.1%。因此該方法的回收率和精密度均較好，符合農(nóng)藥殘留分析的要求[16-17]。

表4 噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）Table 4 Recoveries and relative standard deviations of metamifop and its metabolitest in rice(n=5)

2.3 噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的穩(wěn)定性

由表5可見，分別在0、2、4、8、12、16、20、24、28、32周進(jìn)行取樣，測(cè)得噁唑酰草胺在水稻基質(zhì)中的降解率為2%～22%；噁唑酰草胺代謝物HFMPA在水稻基質(zhì)中的降解率為4%～21%；噁唑酰草胺代謝物HPFMPA在水稻基質(zhì)中的降解率為5%～25%；噁唑酰草胺代謝物6-CBO在水稻基質(zhì)中的降解率為6%～27%。32周時(shí)噁唑酰草胺及其代謝物的降解率均小于30%，表明在儲(chǔ)藏溫度-18℃、儲(chǔ)藏時(shí)間為32周的試驗(yàn)期間，噁唑酰草胺及其代謝物在水稻基質(zhì)中均比較穩(wěn)定。

表5 噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的降解率Table 5 The degradation rate of metamifop and its metabolitest in rice 單位：%

續(xù)表5 噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的降解率Continue table 5 The degradation rate of metamifop and its metabolitest in rice 單位：%

3 結(jié)論

本文建立了噁唑酰草胺及其代謝物在水稻上的超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，采用QuEChERS方法提取、凈化，前處理簡單快速，且噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的回收率70.1%～108.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～11.9%。在-18℃儲(chǔ)藏32周的試驗(yàn)期間，噁唑酰草胺及其代謝物在水稻基質(zhì)中比較穩(wěn)定。因此該方法的回收率和精密度均較好，符合農(nóng)藥殘留分析的要求，可為其他農(nóng)作物中噁唑酰草胺及其代謝物的殘留檢測(cè)提供參考依據(jù)。