誘導(dǎo)痰中細(xì)胞因子與支氣管哮喘嚴(yán)重程度和氣道反應(yīng)性的關(guān)系分析

周敏 陶東英 郭鳳

支氣管哮喘是一種氣道慢性炎性病變，往往涉及到多種細(xì)胞。當(dāng)支氣管哮喘發(fā)病時(shí)，患者往往會(huì)出現(xiàn)喘息、氣促、胸悶、咳嗽等癥狀表現(xiàn)，而且在夜間、凌晨時(shí)發(fā)作頻率較高[1]。誘導(dǎo)痰技術(shù)是一種無(wú)創(chuàng)操作方法，將其應(yīng)用到支氣管哮喘的診斷治療中具有重要價(jià)值[2]。痰液內(nèi)炎性介質(zhì)往往具有較高含量，可對(duì)疾病進(jìn)行有效檢測(cè)與病情評(píng)估，對(duì)臨床診斷治療具有明顯作用[3]。誘導(dǎo)痰技術(shù)的運(yùn)用可對(duì)氣道炎癥細(xì)胞、趨化因子進(jìn)行檢測(cè)，可由此使氣道炎癥嚴(yán)重程度得到有效評(píng)估，對(duì)制定合理治療方案具有重要作用[4]。本研究選取130例支氣管哮喘患者，探討誘導(dǎo)痰中各種細(xì)胞因子與支氣管哮喘嚴(yán)重程度和氣道反應(yīng)性的關(guān)系。如下所示。

資料與方法

一、一般資料

選取2018年8月至2019年9月130例支氣管哮喘患者，按哮喘控制測(cè)試(ACT)評(píng)分將患者分成完全控制組(n=52)、緩解組(n=42)和急性發(fā)作組(n=36)。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均確診為支氣管哮喘；患者均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：重要臟器嚴(yán)重功能障礙；精神異常；溝通交流障礙。急性發(fā)作組(ACT<20分)中男20例(55.56%)，女16例(44.44%)；年齡36～68歲，平均年齡(50.26±2.03)歲。緩解組(ACT 20～25分)中男25例(59.52%)，女17例(40.48%)；年齡35～69歲，平均年齡(50.31±2.01)歲。完全控制組(ACT>25分)中男30例(57.69%)，女22例(42.31%)；年齡35～67歲，平均年齡(50.22±2.05)歲。三組患者一般資料進(jìn)行比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

二、方法

誘導(dǎo)痰獲?。涸谡T導(dǎo)前，患者吸入沙丁胺醇2噴(400μg)，對(duì)患者肺功能進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)壓縮霧化吸入機(jī)吸入4%高滲鹽水5mL，通常持續(xù)5min，指導(dǎo)患者深咳痰液。在吸入高滲鹽水過(guò)程中，若患者自感有痰，可停止吸入，咳痰，之后霧化吸入到劑量充足。

誘導(dǎo)痰液標(biāo)本制備：得到痰液量1g以上后，將痰標(biāo)本進(jìn)行處理。痰液在無(wú)唾液成分時(shí)，放置到離心管內(nèi)，混合2倍體積0.1%二硫蘇糖醇，持續(xù)震蕩15s，放置到37℃恒溫水浴振蕩箱內(nèi)進(jìn)行振蕩，持續(xù)15min。將其進(jìn)行離心處理，轉(zhuǎn)速3500r/min，持續(xù)20min，分離上清液，放置到-70℃環(huán)境下保存。痰標(biāo)本合格標(biāo)準(zhǔn)：顯微鏡下，每低倍視野中白細(xì)胞數(shù)量多于25個(gè)，鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)低于10個(gè)。

氣道反應(yīng)性檢測(cè)：對(duì)患者實(shí)施檢查時(shí)，應(yīng)確?；颊咴谥辽?h內(nèi)未采用吸入短效β2受體激動(dòng)劑進(jìn)行治療，12h內(nèi)未采用長(zhǎng)效β2受體激動(dòng)劑、吸入激素進(jìn)行治療,12h內(nèi)未采用抗組胺劑進(jìn)行治療。采取1高滲鹽水激發(fā)試驗(yàn)法進(jìn)行檢查，在室溫環(huán)境下，通過(guò)氧氣射流霧化吸入4.5%高滲鹽水,在第1次時(shí)吸入時(shí)間為30S,在間隔60～90S后,檢測(cè)患者第1秒用力呼氣容量(FEV1),當(dāng)FEV1降低幅度>10%時(shí),可再次吸入；當(dāng)FEV1降低幅度<10%時(shí),可倍增患者吸入時(shí)間,可按照1、2、4、8min的倍增法進(jìn)行吸入。一直持續(xù)到FEV1降低幅度≥12%,會(huì)使試驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)為陽(yáng)性，此時(shí)表明患者氣道高反應(yīng)性,并對(duì)吸入的高滲鹽水總量進(jìn)行計(jì)算，當(dāng)吸入量>12mL，或是總霧化時(shí)間超過(guò)30min，F(xiàn)EV1降低幅度<12%,可停止試驗(yàn)。如有必要可對(duì)患者實(shí)施支氣管舒張劑進(jìn)行癥狀緩解。

三、觀察指標(biāo)

比較完全控制組、緩解組、發(fā)作組的氣道反應(yīng)性及ECP、TNF-α、ICAM-1、IL-13水平，將深咳痰液進(jìn)行稱(chēng)重處理，放置4倍量0.1%二硫蘇糖醇(DTT)，在37℃溫水中進(jìn)行震蕩，持續(xù)15min，然后根據(jù)痰液4倍量，再放置磷酸鹽緩沖液(PBS)，對(duì)其實(shí)施震蕩，持續(xù)5min，轉(zhuǎn)動(dòng)速度200r/min，持續(xù)10min。分離上清液，放置于-80℃環(huán)境下進(jìn)行保存。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法，對(duì)痰標(biāo)本內(nèi)細(xì)胞間黏附因子-1(ICAM-1)、嗜酸細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)和白細(xì)胞介素-13(IL-13)、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)。分析支氣管哮喘患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞因子與ACT評(píng)分、氣道反應(yīng)性關(guān)系；比較哮喘發(fā)作患者不同病情程度時(shí)的Ectaxin、肺功能一秒率；分析急性發(fā)作患者痰液Ectaxin與ECP、肺功能相關(guān)性。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、病情嚴(yán)重程度細(xì)胞因子與氣道反應(yīng)情況比較

完全控制組氣道反應(yīng)性高于緩解組、發(fā)作組，ECP、TNF-α低于緩解組、發(fā)作組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；緩解組氣道反應(yīng)性高于發(fā)作組，ECP、TNF-α低于發(fā)作組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；三組ICAM-1、IL-13對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 病情嚴(yán)重程度細(xì)胞因子與氣道反應(yīng)情況比較

二、支氣管哮喘患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞因子與ACT評(píng)分相關(guān)性

誘導(dǎo)痰內(nèi)ECP、TNF-α水平均與ACT評(píng)分保持負(fù)相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ICAM-1、IL-13與ACT評(píng)分具有一定負(fù)相關(guān)性，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 支氣管哮喘患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞因子與ACT評(píng)分相關(guān)性

三、支氣管哮喘患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞因子與氣道反應(yīng)性相關(guān)性

誘導(dǎo)痰內(nèi)ECP、TNF-α水平均與氣道反應(yīng)性保持負(fù)相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ICAM-1、IL-13與氣道反應(yīng)性具有一定負(fù)相關(guān)性，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表3)。

表3 支氣管哮喘患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞因子與氣道反應(yīng)性相關(guān)性

四、支氣管哮喘發(fā)作患者嚴(yán)重程度比較

發(fā)作患者重度Ectaxin濃度高于輕度、中度，肺功能一秒率低于輕度、中度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中度Ectaxin濃度高于輕度，肺功能一秒率低于輕度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表4)。

表4 支氣管哮喘發(fā)作患者嚴(yán)重程度比較

五、支氣管哮喘急性發(fā)作患者痰液Ectaxin與ECP、肺功能相關(guān)性

痰液Ectaxin濃度與ECP具有正相關(guān)性，與肺功能一秒率具有負(fù)相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表5)。

表5 支氣管哮喘發(fā)作患者痰液Ectaxin與ECP、肺功能相關(guān)性

討 論

氣道高反應(yīng)性在支氣管哮喘患者中較常見(jiàn)，臨床可通過(guò)臨床癥狀、肺功能指標(biāo)對(duì)病情進(jìn)行評(píng)估，從而制定治療方案[5]。當(dāng)患者持續(xù)出現(xiàn)氣道高反應(yīng)性時(shí)，往往表明肺功能有持續(xù)惡化的趨勢(shì)[6]。在支氣管哮喘發(fā)病過(guò)程中，大量細(xì)胞因子參與了炎癥過(guò)程，而且大量細(xì)胞因子可在痰液內(nèi)檢出[7]。采用誘導(dǎo)痰技術(shù)，可獲得深咳痰液，制定痰液標(biāo)本后，檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子，可對(duì)支氣管哮喘病情進(jìn)行有效評(píng)估[8]。

經(jīng)研究可知，完全控制組氣道反應(yīng)性最高，ECP、TNF-α最低，誘導(dǎo)痰內(nèi)ECP、TNF-α水平均與ACT評(píng)分保持、氣道反應(yīng)性保持負(fù)相關(guān)性，P<0.05。由此可知，隨著病變程度緩解，痰液中ECP、TNF-α明顯降低，而且氣道反應(yīng)性明顯緩解。臨床上可采用合理治療方法，有效控制ECP、TNF-α，從而改善患者病情。ICAM-1作為細(xì)胞之間的一種黏附分子，其在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中具有重要作用[9]。ECP由嗜酸性粒細(xì)胞發(fā)生活化而形成的堿性蛋白，其細(xì)胞毒性較高，具有較強(qiáng)的滅菌效果[10]。IL-13是一種具有調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子，可以讓嗜酸細(xì)胞大量釋放細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)，可有效促進(jìn)血液IgE合成[11]。在研究中，雖然ICAM-1、IL-13與氣道反應(yīng)性的負(fù)相關(guān)性并無(wú)明顯差異，但兩者在病情評(píng)估中均發(fā)揮了重要作用[12]。TNF-α水平適宜情況下，可使機(jī)體功能得到有效保護(hù)，但出現(xiàn)大量釋放的情況后，會(huì)導(dǎo)致組織免疫功能受損[13]。因此，TNF-α可用于評(píng)估哮喘病情嚴(yán)重程度[14]。研究中，痰液Ectaxin濃度與ECP具有正相關(guān)性，與肺功能一秒率具有負(fù)相關(guān)性。Eotaxin是一種細(xì)胞趨化因子，其在一定程度上可以反應(yīng)患者氣道反應(yīng)性，對(duì)患者病情評(píng)估具有重要意義[15-16]。

總之，誘導(dǎo)痰中各種細(xì)胞因子可反映病情嚴(yán)重程度，與氣道反應(yīng)性、肺功能具有一定相關(guān)性，可由此對(duì)患者實(shí)施合理治療，應(yīng)用價(jià)值高。