血液和精液中艾滋病病毒量評估抗病毒阻斷后病毒變化的臨床價值

崔楠君，劉英濤，梁琪

(登封市人民醫(yī)院感染科，河南 登封452470)

艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，是因后天感染艾滋病病毒即人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)造成患者免疫系統(tǒng)紊亂甚至癱瘓的一種傳染性疾病，該病與患者本身基因遺傳沒有很大關(guān)系[1]。AIDS主要是通過一些外界因素進(jìn)行傳播，常見的傳播方式有母嬰傳播、血液傳播及性傳播，性傳播是最常見的傳播方式[2]。艾滋病病毒是破壞免疫系統(tǒng)的罪魁禍?zhǔn)?，患者免疫系統(tǒng)被破壞后，會出現(xiàn)一些機(jī)會性感染，嚴(yán)重的會發(fā)展為惡性腫瘤[3]。常見的機(jī)會性感染源有細(xì)菌、病毒、原蟲、真菌等，造成患者呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼部、淋巴、口腔等發(fā)生病變[3]。常見的惡性腫瘤有惡性淋巴癌、卡波氏肉瘤、子宮癌、宮頸癌等，目前艾滋病主要有HIV1和HIV2這兩種類型，全球流行的主要是HIV1，HIV2主要在西非[4]。無論是HIV1還是HIV2，抗病毒治療是治療艾滋病最根本的方法，HAART最常用[5]。CD4+T淋巴細(xì)胞與人體免疫功能有關(guān)，HIV RNA與病毒量有關(guān)[6]。本文通過探究抗HIV病毒治療AIDS，HIV阻斷后患者血液和精液中HIV病毒量來評估艾滋病的病毒變化，確定其臨床價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年3月至2020年6月本院收治的AIDS患者160例，其中男87例，女73例，年齡24～45歲，平均(33.18±3.45)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《中國艾滋病診療指南(2018版)》中對AIDS的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]：①流行病學(xué)史：不安全性生活史、靜脈注射毒品史、輸入未經(jīng)抗HIV抗體檢測的血液或血液制品、HIV抗體陽性者所生子女或職業(yè)暴露史等；②臨床表現(xiàn)：出現(xiàn)咽喉痛、惡心嘔吐、盜汗、腹部及神經(jīng)疼痛等綜合病癥；③實(shí)驗(yàn)室檢查：經(jīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)，須得到HIV抗體結(jié)果呈陽性，以上①②主要是起篩選作用，必須滿足③才可確診AIDS[5]；(2)均行HAART治療；(3)參與患者均知情，并親自簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有其他傳染病史者；(2)合并器官功能障礙者；(3)精神障礙者。研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過。

1.2 方法

所有患者均持續(xù)進(jìn)行三聯(lián)抗病毒藥物HAART治療[8]。替諾福韋[葛蘭素史克(天津)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20153090]：300mg/(次·d)；齊多夫定(江西匯仁藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20070097)：250mg/(次·d)，2次/d；硫酸阿扎那韋膠囊(Bristol-Myers Squibb Company，批準(zhǔn)文號H20110493)：400mg/(次·d)。每6月對患者進(jìn)行回訪，測量不同時間段的CD4+T淋巴細(xì)胞及HIV RNA病毒載量水平。

患者血液和精液中CD4+T淋巴細(xì)胞及HIV RNA病毒載量水平測定[9]：分別于治療前及治療6月、12月、18月、24月采集患者血液和精液標(biāo)本，靜置約5h后分離出需要測定的血漿及精漿，存于-70℃冰箱中備用。使用流式細(xì)胞儀(BD，型號Accuri C6)進(jìn)行CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)，使用熒光探針法PCR技術(shù)測定HIV RNA病毒載量水平，采用核酸提取儀(東北制藥集團(tuán)股份有限公司，型號DYSW-AUTO48)提取核酸樣本，采用Roche熒光定量PCR儀(東北制藥集團(tuán)股份有限公司，型號LightCycler?480)測定HIV RNA病毒載量。

比較治療前及治療6月、12月、18月、24月患者血液和精液中CD4+T淋巴細(xì)胞及HIV RNA病毒載量水平的變化。

1.3 定期回訪

分別于患者治療6月、12月、18月、24月測定其血清及精液中的CD4+T淋巴細(xì)胞及HIV RNA病毒載量水平的變化并詳細(xì)記錄。每次回訪時詢問并解答患者遇到的問題，使患者放心接受治療。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 不同時間段血液和精液中CD4+ T淋巴細(xì)胞含量

治療前，患者血液和精液CD4+T淋巴細(xì)胞含量最低，血液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量多于精液中(P<0.05)，治療6月血液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量較治療前升高至最低均含量以上，精液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量較治療前上升(P<0.05)，但大多數(shù)患者精液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量仍在最低均含量以下，12月、18月血液及精液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量均升高至最低均含量以上，血液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量多于精液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量(P<0.05)。24月時，患者血液及精液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量出現(xiàn)降低的現(xiàn)象，但均高于200個/μL(P<0.05)。見表1。CD4+T淋巴細(xì)胞最低均含量為：200個/μL。

表1 不同時間段血液和精液中CD4+ T淋巴細(xì)胞含量比較個/μL)

2.2 不同時間段血液和精液中HIV RNA病毒載量比較

治療前，患者血液和精液中HIV RNA病毒載量最高，血液中HIV RNA病毒載量少于精液中HIV RNA病毒載量(P<0.05)，治療6月血液中HIV RNA病毒載量較治療前降低至最低水平線以下，精液中HIV RNA病毒載量較治療前降低，但大多數(shù)患者精液中HIV RNA病毒載量仍在最低檢測水平線以上，12月、18月血液中HIV RNA病毒載量為0，精液中HIV RNA病毒載量大多數(shù)已在最低線以下，至24月，大多數(shù)患者血液及精液中均檢測到HIV RNA病毒，血液中HIV RNA病毒載量少于精液中HIV RNA病毒載量(P<0.05)。見表2。HIV RNA病毒檢測最低載量水平線：HIV RNA<50拷貝/mL。

表2 不同時間段血液和精液中HIV RNA病毒載量比較較拷貝/mL)

2.3 血液和精液中CD4+ T淋巴細(xì)胞與HIV RNA病毒載量水平的相關(guān)性

血液和精液中CD4+T淋巴細(xì)胞水平變化與HIV RNA病毒載量水平的變化均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.196，P=0.027；r=-0.210，P=0.018)，CD4+T淋巴細(xì)胞水平越高，HIV RNA病毒載量水平越低；反之亦然。

3 討論

艾滋病是一種潛伏期較長的全球性慢性疾病，95%存在于一些發(fā)展較緩慢的中低收入國家或家庭，非洲是高發(fā)區(qū)[10-11]。AIDS可通過直接接觸黏膜組織的生殖器、口腔、傷口、肛門等或帶有病毒的血液、精液、陰道分泌物、乳汁等傳播。HIV能夠特異性接觸免疫系統(tǒng)細(xì)胞，損害免疫系統(tǒng)中輔助性的T淋巴細(xì)胞及其他多種免疫系統(tǒng)細(xì)胞，最終導(dǎo)致免疫系統(tǒng)癱瘓，使患者抵抗外界不良因素的能力嚴(yán)重降低甚至完全喪失[12]。機(jī)體易發(fā)各種疾病，且不是單純一種，呈現(xiàn)綜合征并發(fā)狀，嚴(yán)重會發(fā)展成為惡性腫瘤。該疾病主要有3個較明顯的時期，按照順序依次是急性期、無癥狀期和艾滋病期。急性期一般在2～4周就能檢測出HIV，被確診為AIDS，有些患者會出現(xiàn)咽喉痛、惡心嘔吐、盜汗、腹部及神經(jīng)疼痛等癥狀，有些患者無癥狀[13]。無癥狀期患者無任何發(fā)病癥狀，其潛伏期很長，一般是6～8年，該時期的長短與病毒數(shù)量、類別、患者本身身體狀況等多種因素有關(guān)[14]。CD4+T淋巴細(xì)胞參與人體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)與穩(wěn)定，其含量能夠反映患者免疫能力的高低，HIV RNA病毒載量能夠反映患者體內(nèi)HIV病毒量的多少，從而評估AIDS患者病情嚴(yán)重性及臨床治療效果。AIDS治療主要是抗病毒治療，通過有效抑制HIV復(fù)制，減少HIV RNA病毒載量，重建并保護(hù)正常免疫功能，使CD4+T淋巴細(xì)胞含量上升，提升整體免疫力，降低綜合征的發(fā)生率，從而降低患者病死率、減少AIDS傳播量、提高其生活質(zhì)量[15]。

本文結(jié)果顯示，治療前，患者血清及精液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量最低，HIV RNA病毒載量最高，治療6月、12月、18月患者血液和精液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量逐漸增加，HIV RNA病毒載量逐漸降低，24月患者血液及精液中的CD4+T淋巴細(xì)胞水平較之前18月時有所降低，血液及精液中的HIV RNA病毒載量水平較之前18月時有所上升，可能是因?yàn)樘嬷Z福韋、齊多夫定作為核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，能夠在受病毒感染的細(xì)胞內(nèi)被細(xì)胞胸苷激酶磷酸化為三磷酸，三磷酸齊多夫定能選擇性抑制HIV逆轉(zhuǎn)酶，導(dǎo)致HIV鏈合成終止從而阻止HIV復(fù)制。而硫酸阿扎那韋膠囊是一種蛋白酶抑制劑，具有高度選擇性，能夠抑制HIV病毒Gag和Gag-Pol多聚蛋白的加工過程，阻斷HIV成熟病毒的形成[16]。24月時數(shù)據(jù)出現(xiàn)回升的趨勢，可能是與抗病毒藥物的耐藥性增加有關(guān)[17]。該三聯(lián)藥物能夠有效阻止HIV形成，降低HIV RNA病毒載量，提升患者體內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞含量，恢復(fù)正常免疫功能。本文結(jié)果顯示，血液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量多于精液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量，血液中HIV RNA病毒載量少于精液中HIV RNA病毒載量，可能是因?yàn)橛行┗颊吒腥酒鹗嫉脑虿煌?，有些是通過血液，有些是性行為，有些是母乳等，導(dǎo)致HIV開始進(jìn)行裂解復(fù)制的起始位點(diǎn)不同，所以其HIV RNA病毒載量也就不同，最后導(dǎo)致患者該處的CD4+T淋巴細(xì)胞含量不同，還有可能是因?yàn)榭共《舅幬飳τ诰旱拇┩感匀跤谘?，抗病毒藥物發(fā)揮作用較少，導(dǎo)致遺留在精液中的HIV RNA病毒載量多于血液中[18]。

綜上所述，在AIDS臨床診斷和抗病毒治療中，CD4+T淋巴細(xì)胞含量與HIV RNA病毒載量可作為判定AIDS患者病情嚴(yán)重程度和抗病毒治療效果評價的指標(biāo)。但是當(dāng)血液中測不到HIV RNA病毒時，精液中依然能夠檢測到。臨床診斷和治療AIDS時，為確保診斷及治療的準(zhǔn)確性和及時性，應(yīng)對患者進(jìn)行嚴(yán)格的綜合檢測。