抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中的臨床研究

董曉微，劉 璐，張 靜，柴 華，王 偉，樸文花

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)屬于系統(tǒng)性自身免疫疾病，是由于產(chǎn)生大量自身抗體引起全身多系統(tǒng)、多器官受累，且反復(fù)性發(fā)作。若不及時(shí)治療將可能導(dǎo)致受累器官及系統(tǒng)出現(xiàn)不可逆損害，進(jìn)而威脅患者的生命安全[1-2]。臨床治療原則為早期實(shí)施個(gè)體化治療，最大程度抑制疾病進(jìn)展。而精確診斷技術(shù)對(duì)于早期治療有著重要臨床意義，隨著臨床對(duì)抗dsDNA抗體研究的逐漸深入，抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞的診斷價(jià)值逐漸得到臨床認(rèn)可?？筪sDNA抗體是SLE標(biāo)志性自身抗體及致病性抗體，但對(duì)于抗dsDNA抗體具體致病作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究[3-4]。有研究顯示，SLE的發(fā)病機(jī)制與細(xì)胞間相互作用存在密切聯(lián)系，B淋巴細(xì)胞可以促使機(jī)體產(chǎn)生抗dsDNA抗體，繼而引發(fā)SLE?；诖?，本研究將對(duì)SLE應(yīng)用抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞診斷效果進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選取我院風(fēng)濕免疫科2019年6月-2020年6月收治的40例SLE患者作為A組，同期收治的40例非SLE類風(fēng)濕性患者作為B組，同期40例健康體檢者作為C組。A組：性別(男/女)比為6/34，年齡21～64歲，平均(42.35±3.27)歲。B組：性別(男/女)比為7/33，年齡21～65歲，平均(42.47±3.13)歲。C組：性別(男/女)比為8/32，年齡20～64歲，平均(42.26±3.34)歲。3組SLE患者一般資料(性別、年齡)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①SLE患者滿足《2020中國(guó)系統(tǒng)性紅斑狼瘡診療指南》[5]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者出現(xiàn)面頰部皮疹、光過(guò)敏、口腔潰瘍等11項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)中的4項(xiàng)及以上標(biāo)準(zhǔn)；②SLE患者均為初治病例；③患者及體檢者均知情同意本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近期服用激素、免疫制劑等影響檢測(cè)結(jié)果藥物者；②既往出現(xiàn)心力衰竭、冠脈綜合征等急性心腦血管事件、嚴(yán)重感染、血液系統(tǒng)疾病者；③不同意定期隨訪患者。

1.2 方法:所有患者及體檢者均需要檢測(cè)抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞以及抗 dsDNA 抗體，選用試劑為GibcoRPMI 1640以及Cellix901細(xì)胞培養(yǎng)液(均來(lái)源上海英駿生物技術(shù)有限公司)，人外周血淋巴細(xì)胞分離液(來(lái)源于天津市灝洋生物制品科技有限公司)，抗dsDNA抗體IgG檢測(cè)試劑盒(歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司)。具體操作如下：提取4 mL外周血淋巴細(xì)胞，采用ELISA檢測(cè)抗dsDNA抗體；經(jīng)淋巴細(xì)胞分離單個(gè)核細(xì)胞，應(yīng)用40 mL無(wú)血清培養(yǎng)液(Cellix901)平均混懸于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，并置于37 ℃ 5% CO2孵育箱中培養(yǎng)72 h。提取足夠的淋巴細(xì)胞，并采用流式細(xì)胞分選法純化分離B細(xì)胞，確保B細(xì)胞濃度≥95%，再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，收集細(xì)胞，應(yīng)用BD FACSAriaTMⅡ Cell Sorter流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞。

1.3 觀察指標(biāo)：觀察對(duì)比3組抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞以及抗dsDNA 抗體陽(yáng)性率以及不同診斷技術(shù)的診斷效能。診斷效能包括敏感性(真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性))、特異性(真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性))、準(zhǔn)確性((真陽(yáng)性+真陰性)/總?cè)藬?shù))。

2 結(jié)果

2.1 3組應(yīng)用不同診斷技術(shù)的陽(yáng)性率對(duì)比：A組的抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞、抗dsDNA抗體陽(yáng)性率明顯高于B組、C組，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而在SLE診斷中，抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞與抗dsDNA抗體陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 3組應(yīng)用不同診斷技術(shù)的陽(yáng)性率(%)

2.2 不同檢測(cè)技術(shù)的診斷效能對(duì)比:A組抗dsDNA抗體真陽(yáng)性34例，假陽(yáng)性1例，真陰性1例，假陰性4例。抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞診斷SLE的特異性、準(zhǔn)確性、敏感度均明顯優(yōu)于抗dsDNA抗體，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同檢測(cè)技術(shù)的診斷效能對(duì)比[n(%)]

3 討論

SLE的發(fā)病病因與遺傳、環(huán)境、細(xì)菌感染等因素均有著密切聯(lián)系。相關(guān)研究顯示，我國(guó)大陸地區(qū)患病率為(30～70)/10萬(wàn)，隨著臨床診治技術(shù)及水平的不斷提高，SLE診治特征已經(jīng)逐漸由急性、高致死性轉(zhuǎn)變?yōu)槁钥煽兀疑媛室渤霈F(xiàn)逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)[6]。在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的背景下，有必要對(duì)診療方案不斷優(yōu)化，嚴(yán)格控制SLE診療風(fēng)險(xiǎn)。相關(guān)研究顯示，抗dsDNA抗體可能是SLE的直接致病因素，而SLE的發(fā)病機(jī)制與細(xì)胞間相互作用存在密切聯(lián)系，抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞可以促進(jìn)抗dsDNA抗體生成，因此可用于臨床SLE診斷[4]。

B細(xì)胞作用機(jī)制是通過(guò)細(xì)胞表面膜相關(guān)抗原受體進(jìn)行特異性捕獲及提呈抗原，繼而誘導(dǎo)B細(xì)胞出現(xiàn)活化反應(yīng)，產(chǎn)生大量自身抗體，結(jié)合自身抗原形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過(guò)Toll樣受體配體，保持B細(xì)胞高度活化狀態(tài)。同時(shí)B細(xì)胞可以產(chǎn)生多克隆抗體及細(xì)胞因子輔助T細(xì)胞活化，繼而參與SLE發(fā)病過(guò)程[7]。正是由于抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞與SLE發(fā)病機(jī)制存在密切聯(lián)系，且流式細(xì)胞技術(shù)可以有效提高檢測(cè)因子敏感性，因此該指標(biāo)對(duì)于SLE有著較高的特異性及靈敏度，可以有效診斷及鑒別SLE患者[8]。由于該指標(biāo)可以有效預(yù)測(cè)疾病的活動(dòng)性，因此可作為評(píng)價(jià)病情活動(dòng)的監(jiān)測(cè)指標(biāo)[9]。本研究結(jié)果顯示，抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞可以有效鑒別SLE，且抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞診斷SLE的特異性、準(zhǔn)確性、敏感度均明顯優(yōu)于抗dsDNA抗體，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其原因在于抗dsDNA抗體屬于SLE特異性抗體，而淋巴細(xì)胞減少是SLE最常見(jiàn)臨床表現(xiàn)之一，也是診斷該病癥是否出現(xiàn)血液系統(tǒng)損害的重要依據(jù)之一，抗dsDNA抗體及細(xì)胞高反應(yīng)性均參與SLE的發(fā)病機(jī)制，因此采用抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細(xì)胞檢測(cè)具有較高診斷準(zhǔn)確性。