2016―2019年臨滄市豬偽狂犬病病毒gE抗體流行病學(xué)調(diào)查

周玉照，張小苗*，陳云明，蔡高萍，李亞琴，譚東，楊靜竹

(1.大理農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 大理 671003； 2. 臨滄市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 臨滄 677000)

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的一種急性傳染病，臨床上主要表現(xiàn)為妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎及弱仔，新生仔豬出現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀以及腹瀉死亡，育肥豬突然發(fā)熱和呼吸困難等癥狀，是危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一[1]。自2011年以來，我國(guó)不同地區(qū)豬場(chǎng)相繼出現(xiàn)接種 PRV 基因缺失弱毒疫苗后仍發(fā)生PR的現(xiàn)象，因此，加強(qiáng)PR的監(jiān)測(cè)及防控對(duì)促進(jìn)和保障養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展有重要意義[2]。蘇琳琳[3]等對(duì)云南省部分地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，其結(jié)果顯示PRV gE 抗體陽性率為 13.5%；昆明市PRV gE 抗體陽性率為16.6%；曲靖市PRV gE抗體陽性率為8.2%；德宏州PRV gE抗體陽性率為20.3%；玉溪市PRV gE抗體陽性率為20.7%；紅河州PRV gE抗體陽性率為7.8%；楚雄市PRV gE抗體陽性率為21.8%；大理市的PRV gE 抗體陽性率為6.0%；宣威市PRV gE抗體陽性率為13.5%；西雙版納州PRV gE抗體陽性率為7.5%。說明云南省存在豬偽狂犬病病毒感染，但臨滄市近幾年沒有豬偽狂犬病病毒感染情況的報(bào)道。本試驗(yàn)從臨滄市8個(gè)縣(區(qū))采集了豬的血清樣品，進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，從而了解臨滄市近4年豬偽狂犬病病毒感染情況，為臨滄市豬偽狂犬病的防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

2016—2019年從臨滄市臨翔區(qū)、鳳慶縣、云縣、永德縣、雙江縣、滄源縣、耿馬縣、鎮(zhèn)康縣1 468個(gè)豬場(chǎng)中共采集免疫過PRV gE缺失疫苗的6 672份血清樣品，血清樣品置-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｒ姳?。

1.2 主要試劑與儀器

豬偽狂犬病病毒gE糖蛋白阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京天之泰生物科技有限公司； 酶標(biāo)儀 (型號(hào)為ELx800)，購(gòu)自美國(guó)伯騰儀器有限公司；低速離心機(jī)(型號(hào)為 LD4-2A)，購(gòu)自北京醫(yī)用離心機(jī)廠；電子恒溫水浴鍋(型號(hào)為 HHW21.600)，購(gòu)自北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司。

1.3 方法

按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，最后于450nm處測(cè)定各孔的 OD 值。

1.4 結(jié)果判定

試驗(yàn)成立的條件是陰性對(duì)照孔OD450 nm算術(shù)平均值與陽性對(duì)照孔OD450 nm算術(shù)平均值差異應(yīng)大于0.6；且陽性對(duì)照孔的抑制百分?jǐn)?shù)(IN%)應(yīng)大于60。

判定標(biāo)準(zhǔn):如果樣品孔的IN%<40.0，則判為陰性；如果40.0 ≤ IN% ≤ 45.0，則判為可疑；如果IN%>45.0，則判為陽性。

表1 2016—2019年臨滄市豬血清樣品采集情況

2 結(jié)果與分析

2.1 臨滄市規(guī)模豬場(chǎng)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

2016年從臨翔區(qū)、鳳慶縣、云縣、永德縣、耿馬縣8個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采集了160份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果全為陰性。2017年從臨翔區(qū)、鳳慶縣、云縣、永德縣、耿馬縣8個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采集了70份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果全為陰性。2018年從臨翔區(qū)、雙江縣、滄源縣、鎮(zhèn)康縣14個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采集了270份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果檢出6份陽性樣品，其陽性率為2.22%。2019年從臨翔區(qū)、鳳慶縣、云縣、永德縣、滄源縣8個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采集了114份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果全為陰性。2016—2019年臨滄市規(guī)模豬場(chǎng)PRV gE抗體總陽性率分別為0、0、2.22%、0。其中只有2018年雙江縣和鎮(zhèn)康縣檢測(cè)出PRV gE抗體陽性，陽性率分別為5.00%、1.00%。從檢測(cè)結(jié)果看，2018年臨滄市規(guī)模豬場(chǎng)存在PRV的感染，特別是雙江縣和鎮(zhèn)康縣。見表2。

表2 2016—2019年臨滄市規(guī)模豬場(chǎng)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 臨滄市散養(yǎng)戶豬場(chǎng)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

2016年從臨滄市8縣(區(qū))的455個(gè)散養(yǎng)戶豬場(chǎng)采集了1735份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果滄源縣、耿馬縣、鎮(zhèn)康縣抗體陽性率分別為0.23%、0.67%、1.00%，其他縣均為陰性。2017年從臨滄市8縣(區(qū))的382個(gè)散養(yǎng)戶豬場(chǎng)采集了1528份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果耿馬縣、鎮(zhèn)康縣抗體陽性率分別為8.42%和0.18%，其他縣均為陰性。2018年從臨滄市8縣(區(qū))的423個(gè)散養(yǎng)戶豬場(chǎng)采集了1709份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果臨翔區(qū)、鳳慶縣、永德縣、滄源縣、耿馬縣、鎮(zhèn)康縣抗體陽性率分別為8.57%、5.49%、3.33%、1.27%、0.60%、3.30%，云縣和雙江縣均為陰性。2019年從臨滄市8縣(區(qū))的369個(gè)散養(yǎng)戶豬場(chǎng)采集了1122份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，結(jié)果鳳慶縣、永德縣抗體陽性率分別為11.67%、3.89%，其他縣均為陰性。2016—2019年臨滄市散養(yǎng)戶豬場(chǎng)8個(gè)縣(區(qū))PRV gE抗體總陽性率分別為4.35%、6.86%、0、2.86%、0、0.39%、1.68%、1.21%，其中以鳳慶縣PRV gE抗體陽性率最高，而云縣和雙江縣PRV gE抗體陽性率均為0(圖1)。2016—2019年臨滄市散養(yǎng)戶豬場(chǎng)各年度PRV gE抗體總陽性率分別為0.58%、1.11%、2.87%、2.50%，其中以2018年P(guān)RV gE抗體陽性率最高。從結(jié)果可以看出臨滄市存在PRV的感染，而且每個(gè)縣的散養(yǎng)戶感染差異較大。見表3。

表3 2016—2019年臨滄市散養(yǎng)戶豬場(chǎng)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

圖1 2016-2019年臨滄市8個(gè)縣(區(qū))散養(yǎng)戶豬場(chǎng)PRV gE抗體總陽性率

3 討論與結(jié)論

PRV的感染給我國(guó)的生豬養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。近年來，使用基因缺失疫苗進(jìn)行免疫，有效地控制了該病的暴發(fā)，但不能夠控制該病的零星發(fā)生[4]。2011—2015 年我國(guó)PR的流行有持續(xù)上升的趨勢(shì)，樣品陽性率由 13.6%上升至41.3%，豬場(chǎng)陽性率由41.7%上升至78.1%[5]；楊孟鴻對(duì)贛州地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬病血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果在 2014—2015 年P(guān)RV野毒感染率為 27.5%；在 2015—2016 年P(guān)RV野毒感染率為 64.8%[6]；何淑芝[7]等對(duì)廣東省規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病抗體檢測(cè)分析，結(jié)果顯示PRV gE 抗體陽性率為4.65%；何文峰對(duì)江蘇省豬偽狂犬病野毒感染的抗體調(diào)查，結(jié)果顯示PRV gE 抗體陽性率為37.8%[8]；張利平對(duì)河南省部分種豬場(chǎng)豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示PRV gE 抗體總陽性率為 12.24%[9]；胡玲玲對(duì)貴州省豬偽狂犬病的分子流行病學(xué)調(diào)查及變異分析，結(jié)果顯示PRV gE 抗體陽性率為1.89%[10]；2019年李圣元對(duì)福建省龍巖市部分地區(qū)豬偽狂犬病野毒感染血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示樣品PRV gE 抗體總陽性率為 30.41%[11]；寧慧波[12]等對(duì)我國(guó)規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病毒感染及傳播風(fēng)險(xiǎn)因素調(diào)查，結(jié)果顯示華北、華東、華中地區(qū)的豬場(chǎng)陽性率、樣品陽性率相對(duì)較高；華南及西南地區(qū)的陽性率相對(duì)較低。

本試驗(yàn)通過對(duì)2016—2019年臨滄市豬偽狂犬病病毒gE抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，臨滄市存在豬偽狂犬病野毒的感染，2018年臨滄市規(guī)模豬場(chǎng)存在PRV的感染，2019年P(guān)RV gE 抗體全為陰性；2016—2019年臨滄市散養(yǎng)戶豬場(chǎng)每年都存在豬偽狂犬病野毒的感染。

研究表明，豬偽狂犬病毒新分離毒株存在變異現(xiàn)象且變異株的致病性有所增強(qiáng)，現(xiàn)有的 PRV基因缺失疫苗難以對(duì)新的流行毒株提供安全有效的保護(hù)，導(dǎo)致無法有效阻止 PRV 在豬群之間乃至地區(qū)之間的傳播循環(huán)，這很有可能是偽狂犬病野毒感染率居高不下的一個(gè)重要原因[13]。目前，加強(qiáng)豬場(chǎng)生物安全措施以及科學(xué)使用疫苗免疫接種仍是防控PR的主要方法。所以豬場(chǎng)應(yīng)當(dāng)選擇場(chǎng)內(nèi)流行或者區(qū)域內(nèi)流行的毒株作為 PRV 疫苗株，制定科學(xué)合理的免疫程序，定期開展 PRV gB 和PRV gE 抗體監(jiān)測(cè)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，得到原始的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)資料，準(zhǔn)確分析豬場(chǎng)的免疫現(xiàn)狀，科學(xué)制定免疫方案，把控好每一個(gè)免疫環(huán)節(jié)，選擇質(zhì)量?jī)?yōu)質(zhì)的疫苗，提升中和抗體水平，提高免疫效果[14]。同時(shí)定期開展血清抗體監(jiān)測(cè)，制定合理的免疫程序，及時(shí)淘汰PRV gE抗體陽性豬，確保疫苗的免疫保護(hù)效果，最終達(dá)到凈化目的[15]。臨滄市存在豬偽狂犬病野毒的感染，特別是散養(yǎng)戶豬場(chǎng)每年都存在豬偽狂犬病野毒的感染，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)散養(yǎng)戶的疫苗免疫，及時(shí)淘汰PRV gE抗體陽性豬。