環(huán)狀RNA 作為中國(guó)人群非小細(xì)胞肺癌潛在預(yù)后指標(biāo)的Meta分析△

洪佳如，樊星星，陳開(kāi)舉，楊倜

廣州醫(yī)科大學(xué)1 公共衛(wèi)生學(xué)院，2 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣州5114360

肺癌的發(fā)病率和病死率極高，嚴(yán)重威脅人類生命健康，其中非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）約占所有肺癌類型的83%。近年來(lái)，NSCLC 在診斷及治療（包括手術(shù)、放療和化療）方面取得了較大的進(jìn)展，但多數(shù)患者確診時(shí)的臨床分期就已經(jīng)處于Ⅲ～Ⅳ期，5 年生存率僅為23%，患者的生活質(zhì)量較差，預(yù)后不良，生存期較短。近年來(lái)，多項(xiàng)研究表明，環(huán)狀RNA 在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，成為NSCLC早期診斷及預(yù)后評(píng)估的新型生物標(biāo)志物。環(huán)狀RNA 是一類新型、廣泛存在于人體內(nèi)的內(nèi)源性非編碼RNA，是通過(guò)磷酸二酯鍵形成的不具有3'末端和5'末端的閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，比線性RNA 具有更好的穩(wěn)定性和保守性，在腫瘤診治及預(yù)后評(píng)估中具有極高的臨床應(yīng)用價(jià)值。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)狀RNA在NSCLC組織和癌旁組織中存在表達(dá)差異，其可通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源RNA、調(diào)控可變剪切和轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯等機(jī)制調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移及侵襲過(guò)程。目前，已有多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)狀RNA 對(duì)預(yù)測(cè)NSCLC 患者的預(yù)后有一定作用，初步表明環(huán)狀RNA 在腫瘤患者預(yù)后評(píng)估中有潛在的應(yīng)用價(jià)值，但關(guān)于環(huán)狀RNA 作為NSCLC 患者潛在預(yù)后因素的Meta 分析尚未見(jiàn)深入報(bào)道。因此，本研究采用Meta 定量分析方法評(píng)價(jià)環(huán)狀RNA 在中國(guó)NSCLC患者預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值，旨在為環(huán)狀RNA 是否可作為NSCLC 患者預(yù)后評(píng)估的新型生物標(biāo)志物提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 檢索策略

在PubMed、Web of Science、The Cochrane Library、Embase、CNKI、VIP 和萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，檢索關(guān)于環(huán)狀RNA 與NSCLC 患者預(yù)后關(guān)系的已發(fā)表文獻(xiàn)，檢索時(shí)間截至2020 年5 月5 日。采用主題詞與自由詞相結(jié)合的方式進(jìn)行檢索，中文檢索詞為“環(huán)狀RNA”“肺癌”“肺腫瘤”“非小細(xì)胞肺癌”“肺腺癌”“肺鱗癌”，英文檢索詞為“circular RNA”“circRNA”“l(fā)ung cancer”“l(fā)ung neoplasm”“pulmonary cancer”“pulmonary neoplasm”“nonsmall cell lung cancer”“NSCLC”“l(fā)ung adenocarcinoma”“l(fā)ung squamous cell carcinoma”。

1.2 文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)：①關(guān)于circRNA 表達(dá)的病例對(duì)照研究或隊(duì)列研究，診斷以病理學(xué)為金標(biāo)準(zhǔn)，樣本來(lái)源于NSCLC 組織；②病例來(lái)源于中國(guó)人群；③評(píng)估環(huán)狀RNA 對(duì)中國(guó)NSCLC 患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值；④病例數(shù)明確，風(fēng)險(xiǎn)比（hazard ratio，HR）及其95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）等參數(shù)可以直接或間接從文獻(xiàn)中獲取。排除標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)照例數(shù)未知或?qū)Σ±眍愋徒缍ú幻鞔_；②文獻(xiàn)類型為會(huì)議摘要、病例報(bào)道、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、綜述；③樣本量﹤20；④納入的NSCLC 患者不是原發(fā)性NSCLC。

1.3 數(shù)據(jù)提取和文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)

由兩名研究員獨(dú)立完成數(shù)據(jù)提取和文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)，若出現(xiàn)分歧與第三名研究員協(xié)商確定。提取內(nèi)容主要包括：①納入研究的基本特征，包括作者、發(fā)表年份、環(huán)狀RNA 類型、環(huán)狀RNA 表達(dá)水平、檢測(cè)方法、對(duì)照例數(shù)、病例數(shù)等；②直接提取或間接使用Engauge Digitizer 4.1 軟件從生存曲線上獲取所需數(shù)據(jù)，再通過(guò)Jayne F Tierney 提供的HR計(jì)算表格獲得總生存率的HR 及其95%CI。根據(jù)紐卡斯?fàn)枴や滋A量表（Newcastle-Ottawa scale，NOS）對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，內(nèi)容包括：①研究對(duì)象的代表性、研究起始時(shí)結(jié)局指標(biāo)是否確定等；②暴露組和非暴露組的可比性；③結(jié)果的測(cè)定方法、隨訪時(shí)間是否足夠長(zhǎng)、隨訪的完整性等3 個(gè)方面。NOS 評(píng)分范圍為0～9 分，評(píng)分≥6 分表明納入文獻(xiàn)的質(zhì)量較高。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Review Manager 5.3 進(jìn)行Meta 分析。依據(jù)統(tǒng)計(jì)量

I

判斷各研究間的異質(zhì)性，

I

﹥50%時(shí)，表明各研究間存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型；反之，采用固定效應(yīng)模型。合并效應(yīng)量采用HR 及其95%CI，用于評(píng)估環(huán)狀RNA 與NSCLC 患者預(yù)后的關(guān)系，以

P

﹤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用敏感性分析評(píng)估Meta 分析結(jié)果的穩(wěn)定性，通過(guò)漏斗圖檢測(cè)是否存在發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)篩選結(jié)果

按照檢索策略共獲得相關(guān)文獻(xiàn)850 篇，剔除重復(fù)文獻(xiàn)386 篇，剔除會(huì)議摘要、病例報(bào)道、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、綜述類文獻(xiàn)409 篇后得到55 篇文獻(xiàn)，剔除不能直接或沒(méi)有充分?jǐn)?shù)據(jù)計(jì)算HR 和95%CI 的文獻(xiàn)后，最終納入27 篇文獻(xiàn)。

2.2 納入文獻(xiàn)的基本特征

共納入27 篇文獻(xiàn)，均發(fā)表于2018—2019年，樣本量為2197 例，均為NSCLC 患者，其中環(huán)狀RNA 高表達(dá)1142 例，低表達(dá)1055 例，隨訪時(shí)間為16～150 個(gè)月，結(jié)局指標(biāo)均包括總生存率。27 篇文獻(xiàn)中，12 篇文獻(xiàn)可直接獲得HR 及95%CI，15 篇文獻(xiàn)需要提取生存曲線數(shù)據(jù)間接計(jì)算。根據(jù)NOS 量表對(duì)27 篇文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，總體NOS 評(píng)分為6～8 分，提示納入預(yù)后分析研究的質(zhì)量較高。（表1）

表1 納入文獻(xiàn)的基本特征

2.3 Meta 分析結(jié)果

2.3.1 促癌環(huán)狀RNA 對(duì)NSCLC 患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值 本研究中共22 篇文獻(xiàn)探討了促癌環(huán)狀RNA 對(duì)NSCLC 患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值，異質(zhì)性分析結(jié)果顯示，

I

=0，

P

﹥0.05，故采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行預(yù)后Meta 分析，結(jié)果顯示，與促癌環(huán)狀RNA 低表達(dá)的患者相比，促癌環(huán)狀RNA 高表達(dá)NSCLC 患者的總生存率明顯更低（HR=2.07，95%CI：1.81～2.38，

P

﹤0.01）。（圖1）

圖1 促癌環(huán)狀RNA不同表達(dá)情況NSCLC患者的總生存森林圖

2.3.2 抑癌環(huán)狀RNA 對(duì)NSCLC 患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值 本研究中共5 篇文獻(xiàn)探討了抑癌環(huán)狀RNA 與對(duì)NSCLC 患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值，異質(zhì)性分析結(jié)果顯示，

I

=0，

P

﹥0.05，故采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行預(yù)后Meta 分析，結(jié)果顯示，與抑癌環(huán)狀RNA高表達(dá)的患者相比，抑癌環(huán)狀RNA 低表達(dá)NSCLC患者的總生存率明顯更低（HR=0.50，95%CI：0.36～0.70，

P

﹤0.01）。（圖2）

圖2 抑癌環(huán)狀RNA不同表達(dá)情況NSCLC患者的總生存森林圖

2.4 敏感性分析和發(fā)表偏倚

逐漸排除單個(gè)研究時(shí)，其余研究合并的HR 沒(méi)有明顯變化，表明該Meta 分析結(jié)果的穩(wěn)健性較好。本研究基于總生存率繪制HR 漏斗圖進(jìn)行發(fā)表偏倚檢測(cè)，結(jié)果顯示，漏斗圖集中趨勢(shì)明顯，不存在發(fā)表偏倚。（圖3）

圖3 納入研究文獻(xiàn)的發(fā)表偏倚漏斗圖

3 討論

全球范圍內(nèi)，肺癌對(duì)人類生命健康的威脅日益嚴(yán)重，其發(fā)病率及病死率均居中國(guó)首位。盡管NSCLC 的表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growthfactor receptor，EGFR）、程序性死亡受體配體1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也稱PD-L1）等靶向治療的應(yīng)用價(jià)值較高，但NSCLC起病隱匿、確診晚、治療緩解率較低、繼發(fā)性耐藥性較高、預(yù)后差等問(wèn)題仍亟待解決。準(zhǔn)確評(píng)估NSCLC 患者的預(yù)后可以作為治療方案調(diào)整的重要參考。因此，尋找一種能夠指導(dǎo)NSCLC 診斷、治療的新型特異性生物標(biāo)志物，特別是與NSCLC 患者總生存率相關(guān)的潛在靶點(diǎn)是肺癌治療領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。

近年來(lái)，隨著高通量測(cè)序技術(shù)和生物學(xué)信息技術(shù)的發(fā)展和完善，臨床關(guān)于環(huán)狀RNA 的研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)環(huán)狀RNA 在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。同時(shí)，環(huán)狀RNA 以其數(shù)量多、穩(wěn)定性高、高度進(jìn)化保守性及組織特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，可能成為腫瘤早期診斷和預(yù)后評(píng)估的新型生物標(biāo)志物。目前，已有多項(xiàng)研究初步發(fā)現(xiàn)，環(huán)狀RNA 對(duì)NSCLC 患者的預(yù)后評(píng)估具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值，初步表明環(huán)狀RNA 在NSCLC 預(yù)后評(píng)價(jià)中具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。

本研究共對(duì)27 篇關(guān)于環(huán)狀RNA 與NSCLC 患者預(yù)后關(guān)系的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行了Meta 分析，結(jié)果顯示，促癌環(huán)狀RNA 高表達(dá)NSCLC 患者的總生存率明顯更低，抑癌環(huán)狀RNA 低表達(dá)NSCLC 患者的總生存率明顯更低，表明高表達(dá)的促癌環(huán)狀RNA 和低表達(dá)的抑癌環(huán)狀RNA 可能成為NSCLC 患者預(yù)后的不良指標(biāo)。此外，本研究Meta 分析結(jié)果的穩(wěn)定性較好，且不存在發(fā)表偏倚。但本研究尚有一些不足之處：①樣本量有限，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量以增加可信度。②亞組分析可以得出一些新的結(jié)論，但分組后樣本量減小，再次合并后可能增大某些偏倚。③納入的研究皆為隊(duì)列研究或病例對(duì)照研究，文獻(xiàn)證據(jù)等級(jí)存在一定局限性。④預(yù)后分析中，部分文獻(xiàn)的HR 需要間接提取，可能與文獻(xiàn)結(jié)果存在一定偏差。

綜上所述，環(huán)狀RNA 可能作為中國(guó)NSCLC 患者預(yù)后評(píng)估的新型生物標(biāo)志物，但今后還需要更多大樣本、高質(zhì)量的前瞻性研究來(lái)進(jìn)一步證實(shí)其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。