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    國內(nèi)外抗體鑒定譜細胞抗原譜質(zhì)量對比分析

    2021-10-22 11:10:30陳榮華馮文斌周清李潔張雪睿蘭炯采
    臨床輸血與檢驗 2021年5期
    關(guān)鍵詞:純合子血型抗原

    陳榮華 馮文斌 周清 李潔 張雪睿 蘭炯采

    譜細胞是鑒定紅細胞不規(guī)則抗體特異性的試劑細胞。如果患者體內(nèi)存在不規(guī)則抗體,此時輸入含有該不規(guī)則抗體對應(yīng)抗原的紅細胞,可能引起溶血性輸血反應(yīng)(HTR)或新生兒胎兒溶血?。℉DFN)[1]。精準鑒定不規(guī)則抗體的特異性是確保臨床輸血安全有效的方法和防治HDFN的前提之一。

    國內(nèi)市場上采用的譜細胞分為國產(chǎn)和進口兩大類,我們對其抗原覆蓋率、抗原陰陽比例及具有劑量效應(yīng)抗原的純合子比例等進行對比分析,現(xiàn)報道如下。

    材料與方法

    1 一般材料 國內(nèi)市場上采用的20個批次國產(chǎn)譜細胞(G1~G20)和11個批次進口譜細胞(J1~J11)的抗原格局表。

    2 研究方法

    2.1 抗原鑒定方法:譜細胞中各抗原的鑒定方法參考文獻[2]操作。

    2.2 統(tǒng)計譜細胞中各抗原的覆蓋面及覆蓋率:對20個批次國產(chǎn)譜細胞和11個批次進口譜細胞抗原覆蓋面及覆蓋率進行統(tǒng)計分析,分析譜細胞在不規(guī)則抗體鑒定中可能出現(xiàn)的漏檢情況。

    2.3 統(tǒng)計譜細胞各抗原的陰陽性比例:對20個批次國產(chǎn)譜細胞和11個批次進口譜細胞抗原陰性與陽性比例進行統(tǒng)計,利用四格表資料的Fisher確切概率法進行概率計算分析,計算其在不規(guī)則抗體鑒定中的可靠性。

    2.4 統(tǒng)計譜細胞中具有劑量效應(yīng)抗原的純合子比例:對20個批次國產(chǎn)譜細胞和11個批次進口譜細胞抗原純合子比例進行統(tǒng)計,分析譜細胞在不規(guī)則抗體鑒定中可能的漏檢情況。

    3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計,抗原可靠性分析采用四格表資料的Fisher確切概率法進行概率計算。國內(nèi)外抗原可靠性對比采用Pearson卡方檢驗處理。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 譜細胞中各抗原的覆蓋率 覆蓋率指覆蓋該抗原的譜細胞批次占國產(chǎn)或進口譜細胞總批次的百分比。覆蓋率100%即表示該抗原在國內(nèi)或進口譜細胞的所有批次中均有覆蓋。國產(chǎn)譜細胞20個批次共覆蓋29種抗原,各抗原平均覆蓋率為76.00%±34.3%,進口譜細胞11個批次共覆蓋28種抗原,各抗原平均覆蓋率為83.00%±21.9%。比較兩組譜細胞,進口譜細胞缺乏抗原:Mur、Dia、Dib、Doa、Dob、Yta、Ytb,國產(chǎn)譜細胞缺乏抗原:Cw、V、f、Jsa、Jsb、Xga,見表1。

    表1 譜細胞中各抗原的覆蓋率(%)

    2 譜細胞中各抗原的陰性與陽性比例 當抗原在譜細胞中陰性和陽性的比例為1∶9、9∶1、1∶15、15∶1、1∶10、10∶1時,P>0.05,無統(tǒng)計學(xué)意義,鑒定抗體特異性不可靠,判定該抗原為本批次譜細胞的不可靠抗原[2]。統(tǒng)計20個批次國產(chǎn)譜細胞和11個批次進口譜細胞抗原的陰陽性比例,對照表2按公式:

    表2 抗體鑒定概率水平四格表

    計算概率值(P)[3], 結(jié)果見表3。根據(jù)P值統(tǒng)計各批次譜細胞的不可靠抗原比例:國產(chǎn)譜細胞20個批次不可靠抗原比例為49.16%±7.78%,進口譜細胞11個批次不可靠抗原比例為27.61%±5.48%,見表4。

    表3 譜細胞抗原陰性、陽性不同分布的概率

    表4 各批次譜細胞不可靠抗原比例

    3 劑量效應(yīng)抗原中純合子的比例 統(tǒng)計20個批次國產(chǎn)譜細胞和11個批次進口譜細胞中具有劑量效應(yīng)的抗原純合子比例。具有劑量效應(yīng)的抗原有D、C、E、c、e、M、N、S、s、Fya、Fyb、Jka、Jkb[1]。因大部分譜細胞未標識D抗原是否純合子,故只統(tǒng)計其余12種抗原的純合子比例。國產(chǎn)譜細胞中12種純合子抗原占比70.50%±4.62%,進口譜細胞中12種純合子占比為73.15%±4.59%。見表5。

    討 論

    1 抗原鑒定方法 紅細胞血型指紅細胞膜上的抗原,目前為止共發(fā)現(xiàn)有43個血型系統(tǒng)即抗原系統(tǒng)[4]。因供受者血型抗原不同的輸血可能會產(chǎn)生溶血性輸血反應(yīng),所以臨床輸血一般要求供受者血型抗原相同即同型輸血,所以輸血前試驗要求鑒定供受者的血型抗原。紅細胞血型抗原系統(tǒng)雖然多達43個,除ABO血型系統(tǒng)外只有Rh、Kidd、MNSs、Duffy、Diego、Xg、Kell、Lewis、P及Lutheran等血型抗原系統(tǒng)有臨床意義[5],所以國內(nèi)外譜細胞都覆蓋這些抗原系統(tǒng)。鑒定血型抗原一般采用血清學(xué)技術(shù),用己知特異性的商品抗血清與被檢者紅細胞做凝集試驗。抗血清有IgM和IgG兩種,前者作鹽水介質(zhì)試驗,后者作抗人球蛋白試驗、聚凝胺或酶介質(zhì)試驗。

    2 文獻對譜細胞的質(zhì)量要求 不規(guī)則抗體是指人血液中不符合Landsteiner法則的紅細胞抗體[1]。在檢測到不規(guī)則抗體后,應(yīng)鑒定其特異性,并評估其臨床意義。具有臨床意義的抗體是指能引起胎兒和新生兒溶血病(HDFN)、溶血性輸血反應(yīng)(HTR)和顯著降低輸入紅細胞壽命的抗體[1]。選擇不帶不規(guī)則抗體對應(yīng)抗原的紅細胞輸血才安全有效。

    譜細胞是鑒定不規(guī)則抗體特異性的試劑細胞,由已知不同血型系統(tǒng)抗原表型的O型紅細胞組合而成,通常8~16個供者的O型紅細胞為一套[5]。本次收集的國產(chǎn)譜細胞均為每套10個供者紅細胞,進口譜細胞則有每套16和11個供者紅細胞兩種。譜細胞必須能夠檢出具有臨床意義的抗體和當?shù)鼐哂械哪承┖币娍贵w,并且要保證在一組譜細胞中的抗原結(jié)構(gòu)合理[1,2]。全國臨床檢驗操作規(guī)程規(guī)定譜細胞應(yīng)包括Rh、Kidd、MNSs、Duffy、Diego、Xg、Kell、Lewis、P及Lutheran等血型系統(tǒng)的主要抗原并注明Rh血型的基因型[5]。英國國家衛(wèi)生服務(wù)血液和移植中心(NHSBT)要求譜細胞能排除所有具有臨床意義的抗體、應(yīng)使用純合子紅細胞排除有劑量效應(yīng)的抗體和只有當被檢樣本與一套譜細胞中至少兩個表達某抗原的紅細胞反應(yīng)及兩個缺乏該抗原的紅細胞無反應(yīng)時才能指定特異性[6]。

    3 譜細胞的抗原覆蓋面分析 人類紅細胞抗原具民族多態(tài)性和地區(qū)多態(tài)性,抗體鑒定時必須選擇符合本地區(qū)血型抗原及不規(guī)則抗體分布特點的譜細胞[7]。白種人和中國人MNS血型系統(tǒng)和Kidd血型系統(tǒng)頻率有差異,中國人大多數(shù)不表達S抗原而表達s抗原,其S+s-基因型頻率只有0.000 9左右,而S-s-型頻率甚至接近零[7]。Jka和Jkb頻率比較接近,漢族人群中Jkb>Jka[8-9]。一般認為中國漢族人群Kell血型系統(tǒng)K抗原頻率幾乎為零,有文獻顯示K抗原頻率為約0.000 4,而k抗原頻率約為0.999 6,故很少會產(chǎn)生抗-K抗體[10-11]。中國漢族人群中曾有幾例鑒定出抗-K抗體,均疑似細菌性感染后免疫所致[7]。也有文獻報道成都地區(qū)332位漢族獻血者Kell血型均為K-k+,而白種人K-k+基因頻率為0.910 0左右、K+k+基因頻率為0.088 0左右[12]。Lewis血型系統(tǒng),白種人Le(a+b-)表型為0.220 0,中國人群Le(a+b-)表型罕見[7]。Duffy血型系統(tǒng),F(xiàn)ya在白種人中的頻率為0.660 0,中國人中是0.990 0[7]。本次收集的國產(chǎn)譜細胞中有10%覆蓋了Lua和Lub抗原,5%覆蓋了Kpa和Kpb抗原。一般Lu抗體不具有臨床意義,抗-Lua與紅細胞凝集的最適溫度一般在37℃以下,抗-Lub的最佳反應(yīng)溫度為20℃[7]。有報道稱Lu抗體通常僅與輕度的遲發(fā)性輸血反應(yīng)(HTR)有關(guān),也不會引起嚴重的HDFN[1]。而Kpa和Kpb抗原雖可引起HTR,但Kpa抗原在亞洲人中極其罕見,Kpb則在所有人群中高頻率表達[13],這兩類抗原可考慮在譜細胞中剔除。本次收集的國產(chǎn)譜細胞中Fya抗原覆蓋率為95%,中國人群中Fya陽性者占99.7%,陰性者僅為0.3%,但時有抗Fya引起嚴重輸血反應(yīng)的報道[14],可在譜細胞中保留。譜細胞的以上血型系統(tǒng)抗原可根據(jù)本地區(qū)的抗原分布特點給予調(diào)整。本地區(qū)頻率大于3%的抗原皆應(yīng)包含在譜細胞內(nèi)[7]。進口譜細胞未覆蓋Dia抗原和Mur抗原,這兩種抗原在中國人群中的頻率分別為5%和7%,中國香港和臺灣地區(qū)曾報道,抗-Mur是除抗-A和抗-B之外最常見的血型抗體[2]。抗Dia抗體可引起嚴重的H D F N[1],而抗-M u r也可以導(dǎo)致嚴重的H T R和HDFN[15-16]。在本次收集的國產(chǎn)譜細胞中覆蓋率只有85%和80%,特別是在中國香港和臺灣地區(qū)使用的譜細胞應(yīng)全覆蓋。

    4 譜細胞的抗原格局分析 每套譜細胞每一種血型抗原應(yīng)保持一定的陰性和陽性比例,以便從統(tǒng)計學(xué)上保證抗體特異性[2]。全國臨床檢驗操作規(guī)程規(guī)定,抗體鑒定概率達到95%(即P值<0.05)時可報告抗體特異性[5]。使用譜細胞鑒定抗體時應(yīng)該使用“陰性結(jié)果排除陽性抗原對應(yīng)抗體”的方法,“陰性排陽性”本質(zhì)上是不完全歸納推理,所得結(jié)論是否可靠還需要通過假設(shè)檢驗來驗證,以判斷所得結(jié)論是隨機事件還是必然事件。假設(shè)檢驗統(tǒng)計推理的基本思路是用小概率原理來對假設(shè)進行判斷,推斷的基礎(chǔ)是得出這一結(jié)論的概率值(P)。根據(jù)這一原理,如P>0.05可認為試驗結(jié)果為偶然事件引起[3]。表3中,當陰性和陽性抗原的比例為1∶9、9∶1;1∶15、15∶1;1∶10、10∶1時的P值分別為0.101、0.101、0.062、0.062、0.091、0.091,判定為該比例的抗原不能準確鑒定不規(guī)則抗體的特異性。本文采用四格表Fisher確切概率法來計算概率值,血型抗原陰陽性比例與概率值的關(guān)系見表3。由此表計算得出本次收集的國產(chǎn)譜細胞不可靠抗原比例為49.16%±7.78%,而進口譜細胞的不可靠抗原比例僅為27.61%±5.48%,兩組數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。因進口譜細胞中45.5%為16個供者細胞,54.5%為11個供者細胞,而國產(chǎn)譜細胞均為10個供者細胞,故進口譜細胞的不可靠抗原比例明顯低于國產(chǎn)譜細胞。國產(chǎn)譜細胞應(yīng)通過增加供者數(shù)或調(diào)整抗原格局,降低不可靠抗原比例,提高不規(guī)則抗體鑒定的準確度。

    5 譜細胞具有劑量效應(yīng)抗原的純合子細胞分析 劑量效應(yīng)是指抗體反應(yīng)強度的差異取決于目標紅細胞上存在的目標抗原的數(shù)量。而純合子細胞的抗原數(shù)量多于雜合子細胞的抗原數(shù)量,故純合子細胞的反應(yīng)強度要強于雜合子細胞。如果譜細胞中具有劑量效應(yīng)的抗原為雜合子,則容易漏檢相對應(yīng)的低效價抗體[17]。AABB手冊中要求有劑量效應(yīng)的抗體使用純合子紅細胞檢測,以避免雜合子漏檢低效價不規(guī)則抗體。劑量效應(yīng)現(xiàn)象并不是在所有血型系統(tǒng)中都會出現(xiàn),劑量效應(yīng)往往表現(xiàn)于共顯性基因的抗原[18]。具有劑量效應(yīng)的血型抗原主要有:D、C、E、c、e、M、N、 S、s、Fya、Fyb、Jka和Jkb抗原[1]。本次收集的國產(chǎn)譜細胞中以上抗原純合子比例為70.50%±4.62%,進口譜細胞為73.15%±4.59%,兩者相差不大。除了劑量效應(yīng)Rh單倍型也會影響D抗原的表達水平,即“Ceppellini效應(yīng)”,應(yīng)引起注意。

    6 對提高國內(nèi)譜細胞質(zhì)量的建議 綜上所述,使用國產(chǎn)譜細胞鑒定不規(guī)則抗體時,應(yīng)充分考慮是否適合本民族和本地區(qū)、譜細胞抗原格局的科學(xué)性、劑量效應(yīng)抗原漏檢低效價抗體情況等。要精準鑒定不規(guī)則抗體,除了譜細胞的質(zhì)量,與實驗技術(shù)也有很大的關(guān)系,不規(guī)則抗體鑒定時要進行規(guī)范化操作,并盡量對有劑量效應(yīng)的抗原使用純合子細胞。每套譜細胞都不可能完美無缺,建議有條件的實驗室準備兩套不同格局的譜細胞。

    利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

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