獸藥中非法添加物檢測(cè)及風(fēng)險(xiǎn)防范技術(shù)研究

顧進(jìn)華,張秀英,汪 霞,范 強(qiáng),于曉輝,韓寧寧,趙 暉,龔旭昊,高 光

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

獸藥處方外添加其他化學(xué)物質(zhì)或藥物屬于非法添加，極易造成不知情用藥或者濫用藥物，存在嚴(yán)重的動(dòng)物源性食品獸藥殘留和耐藥性等生物安全風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，此類行為也侵害到合法獸藥生產(chǎn)企業(yè)的正當(dāng)利益，極大地?cái)_亂獸藥市場(chǎng)秩序。

2009年以前，對(duì)于非法添加，僅依據(jù)國家獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)結(jié)果，難以給予嚴(yán)厲查處和打擊。為達(dá)到提前預(yù)警，向主動(dòng)保障轉(zhuǎn)變的目的，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所牽頭開展獸藥制劑中非法添加物的篩查與確認(rèn)技術(shù)研究，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公布施行了系列防范非法添加的檢測(cè)方法和通用方法，并據(jù)此開展禁用藥物和非法添加物監(jiān)督檢查，為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)發(fā)揮了重要作用。

繼續(xù)開拓思路，深入研究獸藥中非法添加物檢測(cè)方法，梳理現(xiàn)有檢測(cè)方法的內(nèi)在聯(lián)系，提升快速篩查技術(shù)和手段，探索建立新檢測(cè)方法，對(duì)于打擊非法添加行為，減少非法添加風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。

1 獸藥中非法添加規(guī)律及成因分析

1.1 獸藥中非法添加規(guī)律及特點(diǎn) 2008年，獸藥檢驗(yàn)人員在監(jiān)督抽檢中發(fā)現(xiàn)處方外添加其他化合物的現(xiàn)象。獸藥散劑和注射液是非法添加的重災(zāi)區(qū)，其次是抗菌類獸藥的可溶性粉劑。

添加方式多樣：(1)中藥中添加化學(xué)藥品。(2)化學(xué)藥品以同類藥物替代標(biāo)稱藥物。(3)一種制劑添加多種藥物。

添加藥物種類繁多：(1)添加處方外獸藥，常見的有對(duì)乙酰氨基酚、安乃近等解熱鎮(zhèn)痛類藥物；氟喹諾酮類、磺胺類等抗菌藥物； 茶堿等鎮(zhèn)咳平喘類藥物等。(2)添加違禁藥品及人用藥如β-受體激動(dòng)劑、氯霉素類、硝基呋喃類藥物[1]。

1.2 獸藥標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充和完善 2005年以前歷版《中國獸藥典》對(duì)“摻入或污染的外來物質(zhì)”的檢驗(yàn)沒有明確的要求和具體檢測(cè)方法。2010年版《中國獸藥典》開始有所考慮；2015年版規(guī)定“任何違反獸藥GMP或有未經(jīng)批準(zhǔn)添加物質(zhì)所生產(chǎn)的獸藥，即使符合《中國獸藥典》或按照《中國獸藥典》沒有檢出其添加物質(zhì)或相關(guān)雜質(zhì)，亦不能認(rèn)為其符合規(guī)定?！?020年版《中國獸藥典》延續(xù)以上表述[2]。系列“獸藥處方外非法添加物檢測(cè)方法”是獸藥典質(zhì)量控制方法的重要補(bǔ)充。

1.3 獸藥中非法添加成因分析 獸藥中的非法添加，主要是冒用合法標(biāo)準(zhǔn)名稱，標(biāo)稱安全用藥成分，隱瞞添加其他藥物成分或化合物，有的自認(rèn)為處方合理但未能獲得研發(fā)數(shù)據(jù)，審批未通過。對(duì)利潤(rùn)的追求，以及逃避國家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的僥幸，是獸藥中非法添加的基本成因。

1.3.1 西藥的合并使用 部分西藥的臨床合用屬于合理用藥，但由于生產(chǎn)工藝、安全性等問題，很多臨床合用品種并不適合制成復(fù)方制劑。復(fù)方制劑的研制需要多方數(shù)據(jù)支持，企圖走捷徑的想法容易導(dǎo)致非法添加的發(fā)生，特別是抗菌藥品種。

1.3.2 中西復(fù)方制劑的應(yīng)用 中西復(fù)方制劑在發(fā)揮中西藥物協(xié)同作用、減少藥物用量、降低毒性，以及實(shí)現(xiàn)標(biāo)本兼治等方面具有一定意義，但很多未經(jīng)充分研究的中西復(fù)方制劑淪為處方外非法添加[3]。

2 獸藥中非法添加物檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)分析

2.1 現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì) 截止2021年1月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布處方外非法添加物檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)的公告/文件共23個(gè)，發(fā)布標(biāo)準(zhǔn)82個(gè)。歷年非法添加物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布情況見圖1。

圖1 非法添加物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布情況Fig 1 Release of standards for the detection of illegal additives

經(jīng)過修訂，現(xiàn)行有效檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)51個(gè)，檢測(cè)非法添加目標(biāo)物132種，篩查紫外光譜圖庫153種和非特定物質(zhì)。現(xiàn)行有效檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 現(xiàn)行有效獸藥非法添加物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[4-14]Tab 1 Current effective standards for the detection of illegal additives in veterinary drugs

續(xù)上表

2.2 現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)對(duì)象和目標(biāo)物質(zhì) 獸藥非法添加物檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)對(duì)象和目標(biāo)物質(zhì)，從單個(gè)制劑檢測(cè)向一類制劑檢測(cè)發(fā)展，從檢測(cè)單個(gè)目標(biāo)化合物檢測(cè)向一類目標(biāo)化合物擴(kuò)增，標(biāo)準(zhǔn)名稱從“XX制劑非法添加XX品種”到“獸藥中非法添加XX類物質(zhì)”轉(zhuǎn)變。出現(xiàn)了獸藥中非特定非法添加物質(zhì)檢查方法。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)涉及73種目標(biāo)獸藥制劑、2個(gè)獸藥通用檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)、1個(gè)中獸藥散劑檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。其中6個(gè)兼顧中藥和化藥制劑檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)；26個(gè)專門用于化藥制劑的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，主要用于注射液、可溶性粉、粉劑、預(yù)混劑(如氟喹諾酮類制劑、氟苯尼考制劑)；19個(gè)專門用于中藥制劑的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，其中9個(gè)用于注射液(主要是魚腥草注射液、柴胡注射液、黃芪多糖注射液)，7個(gè)用于中藥散劑，以及顆粒劑、口服液等。有關(guān)數(shù)據(jù)見表2。

表2 檢測(cè)非法添加物有關(guān)制劑標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)表Tab 2 Statistical table of target preparations in thedetection standard of illegal additives

檢測(cè)目標(biāo)藥物(物質(zhì))，除非特定物質(zhì)以外，包括84種(140個(gè)次)，以及紫外光譜圖庫涵蓋的153種目標(biāo)物。在添加物品種類別上，主要是解熱鎮(zhèn)痛類藥物(12項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn))，氟喹諾酮類藥物(5項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn))，β-受體激動(dòng)劑(2項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn))，以及磺胺類、抗生素類、抗病毒類，其中，對(duì)乙酰氨基酚、安乃近、氧氟沙星、諾氟沙星、乙酰甲喹、安替比林、氨基比林、恩諾沙星、磺胺間甲氧嘧啶、甲氧芐啶、喹乙醇都是重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象。有關(guān)數(shù)據(jù)見表3。

表3 檢測(cè)非法添加目標(biāo)藥物(物質(zhì))關(guān)注度統(tǒng)計(jì)表Tab 3 Statistical table of target drugs(substances)in the detection standard of illegal additives

2.3 現(xiàn)有獸藥非法添加物檢測(cè)方法 目前獸藥非法添加物檢測(cè)方法主要應(yīng)用高效液相色譜法，或結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜法、高分辨質(zhì)譜法；以及顯微鏡檢查法、薄層色譜法。

現(xiàn)行有效的51個(gè)非法添加物檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)中，應(yīng)用高效液相色譜-二極管陣列法40項(xiàng)，超高效液相色譜法-二極管陣列法1項(xiàng)，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法10項(xiàng)，高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜法1項(xiàng)，薄層色譜法2項(xiàng)；顯微鏡檢查法4項(xiàng)。

2.3.1 同時(shí)測(cè)定多種非法添加獸藥的方法 同時(shí)測(cè)定多種非法添加獸藥的方法可以有效提高檢測(cè)效率,如“獸藥制劑中非法添加磺胺類及喹諾酮類25種化合物檢查方法”同時(shí)測(cè)定25種化合物、“獸藥制劑中非法添加磺胺類藥物檢查方法”能將5種磺胺類化合物從9種沙星類化合物和中藥中分離出來。

2.3.2 檢測(cè)方法適用性的拓展 從2016年開始，包括2448號(hào)公告發(fā)布的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，增加了“用于其他制劑中某種藥物(物質(zhì))檢查時(shí)，需進(jìn)行空白試驗(yàn)和檢測(cè)限測(cè)定”內(nèi)容，擴(kuò)大了檢測(cè)方法的適用性。

2.3.3 獸藥非法添加物目標(biāo)數(shù)據(jù)庫的建立 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2019年公告169號(hào)公布適用于獸藥及其原料與輔料中紫外光譜圖庫中所列非法添加藥物篩查的檢測(cè)方法“獸藥中非法添加藥物快速篩查法(液相色譜-二極管陣列法)”，其數(shù)據(jù)庫涵蓋150余種化合物，300余張光譜圖，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的溶液濃度、色譜條件、色譜圖及其保留時(shí)間等信息。獸藥非法添加物數(shù)據(jù)庫的建立為快速篩查打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

3 獸藥非法添加物檢測(cè)方法提升方向

隨著發(fā)展，仍然存在新的非法添加可能，需要繼續(xù)開展處方外非法添加物風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)檢測(cè)技術(shù)研究，提升檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性，持續(xù)遏制非法添加風(fēng)險(xiǎn)。

3.1 篩查與確證技術(shù)并重 定性篩查技術(shù)是快速判斷獸藥是否被非法添加的重要手段，是指示采用何種方法進(jìn)行進(jìn)一步確證的關(guān)鍵步驟。要充分利用顯微鑒別方法、薄層色譜法、高效液相色譜-二級(jí)管陣列法、膠體金免疫層析法、質(zhì)譜法建立篩查方法。

確證與定量檢測(cè)方法是最終判定獸藥非法添加情況的技術(shù)手段，具有法定效力。要進(jìn)一步推廣應(yīng)用高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[15]等。

3.2 進(jìn)一步擴(kuò)大檢測(cè)方法適用性 梳理現(xiàn)有獸藥非法添加物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，針對(duì)檢測(cè)目標(biāo)化合物，特別是高頻非法添加物(如：對(duì)乙酰氨基酚、安乃近、氧氟沙星、諾氟沙星、乙酰甲喹、安替比林、氨基比林、恩諾沙星、磺胺間甲氧嘧啶、甲氧芐啶、喹乙醇)，修訂整合有關(guān)檢測(cè)方法，建立操作簡(jiǎn)便、適用范圍更廣的通用型檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步增強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)適用性。

3.3 加強(qiáng)高效、高通量檢測(cè)技術(shù)研究 利用新的技術(shù)手段建立新方法，提升快速篩查和確證技術(shù)[15]。

建立質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，提升篩查效率。將高分辨質(zhì)譜法運(yùn)用到獸藥非法添加物檢查中，利用高分辨質(zhì)譜法，建立高通量篩查和確證方法，建立質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，可以克服現(xiàn)有法定方法不能篩查檢測(cè)無紫外吸收化合物的缺陷。

探索建立拉曼光譜檢測(cè)方法。拉曼光譜是采用散射光譜進(jìn)行分析并應(yīng)用于分子結(jié)構(gòu)研究的一種方法，因其高通量無損、譜圖特征強(qiáng)、穿透力強(qiáng)，可進(jìn)行原位、無損分析[15]。將顯微拉曼光譜成像技術(shù)[16]運(yùn)用在獸藥非法添加物篩查中，可實(shí)現(xiàn)快速無損篩查，提高初篩效率。

值得研究運(yùn)用的方法還有：微生物管碟法、近紅外光譜法、離子遷移色譜法等[17]。

3.4 拓展非法添加物檢測(cè)品種范圍 針對(duì)非法添加新情況，如中藥制劑中添加處方外中藥成分[18]、疫苗中非法添加抗菌藥物、漁藥和水產(chǎn)養(yǎng)殖投入品中非法添加藥物等，添加方式更為隱蔽。亟需開展中藥制劑中的中藥類抗菌成分、疫苗中可能添加的抗菌藥物含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)；開展?jié)O藥和水產(chǎn)養(yǎng)殖投入品中非法添加物的檢查研究。不斷拓展檢查品種范圍，嚴(yán)密防范非法添加風(fēng)險(xiǎn)。

4 獸藥中非法添加風(fēng)險(xiǎn)防范與思考

4.1 加強(qiáng)檢查與宣傳 切實(shí)按照農(nóng)業(yè)部獸藥質(zhì)量監(jiān)督抽檢要求，組織好有獸藥中非法添加物篩查能力的省級(jí)獸藥監(jiān)察所開展前期篩查工作，提高獸藥中非法添加物檢測(cè)針對(duì)性和工作效率[19]。開展宣傳教育，引導(dǎo)合法合規(guī)生產(chǎn)獸藥。

4.2 疏堵結(jié)合，降低非法添加風(fēng)險(xiǎn) 獸藥被非法添加其他藥物(物質(zhì))是一個(gè)復(fù)雜的問題，在嚴(yán)格執(zhí)行檢測(cè)和監(jiān)控的同時(shí)，也要考慮疏堵結(jié)合，引導(dǎo)開展中西藥復(fù)方、化藥復(fù)方制劑應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，提煉安全有效獸藥組方，在生產(chǎn)工藝合理，質(zhì)量可控的前提下，提升復(fù)方制劑研究和應(yīng)用水平。