DNA倍體分析聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物篩查宮頸癌價值研究

梁 媛，蔡江義，謝 云，蔡 娜

(1.西北婦女兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)遺傳中心，陜西 西安 710061；2.西安航天總醫(yī)院病理科，陜西 西安710010； 3.西北婦女兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗中心，陜西 西安 710061)

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，具有高發(fā)病率及病死率[1]。相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計[2]，全球范圍內(nèi)每年宮頸癌新發(fā)病例約50萬例，年死亡例數(shù)約20萬，中國約占10.00%。宮頸癌早期治愈率高達(dá)90.00%～92.00%，故而宮頸癌早期篩查工作的開展十分重要[3]。目前臨床多采用液基薄層細(xì)胞學(xué)(Thinprep cytologic test，TCT)檢查篩查宮頸癌，該項技術(shù)具有操作簡單特點，故而得到臨床廣泛運用[4-5]。但在早期宮頸癌篩查過程中，TCT診斷準(zhǔn)確性易受到諸多因素影響(如染色技術(shù)、取材及制片方法等)[6-7]。脫氧核糖核酸倍體分析檢查是一種篩查宮頸癌的新型手段，通過對細(xì)胞遺傳基因變異過程的觀察，來區(qū)分異常增生細(xì)胞，判斷癌前病變[8]。糖類抗原125(Carbohydrate antigen 125，CA125)、糖類抗原19-9(Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)是臨床常用血清腫瘤標(biāo)志物，可為宮頸癌篩查提供參考[9-10]。為明確在宮頸癌篩查中血清腫瘤標(biāo)志物和倍體分析的聯(lián)用價值，本文對420例行宮頸癌篩查患者展開探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年12月至2020年12月到醫(yī)院行宮頸癌篩查的患者420例作為研究對象。420例患者年齡24～75歲，平均(38.42±5.39)歲；手術(shù)病理檢查顯：正?；?qū)m頸炎癥208例，宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ級72例，CINⅡ級56例，CINⅢ級43例，宮頸癌41例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：自愿進(jìn)行宮頸癌篩查者；非經(jīng)期女性；了解且知情研究內(nèi)容，自愿加入研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：具有盆腔放療、子宮切除史者；無法配合檢查或不適宜檢查者；精神疾病者。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 實驗方法

1.2.1 DNA倍體分析：檢查前，提醒患者樣本收集前24 h禁止陰道灌腸、性交及陰道檢查，且避開經(jīng)期。通過窺陰器顯露子宮頸，以消毒棉簽收集分泌物，利用宮腔刷在子宮頸口沿著順時針方向轉(zhuǎn)4～6圈，取出宮頸刷并脫去刷頭，將刷頭尖放于含有細(xì)胞保存液的樣本管內(nèi)。制取細(xì)胞學(xué)薄片，行Feulgen染色。通過全自動細(xì)胞DNA倍體分析儀，檢測DNA倍體。

1.2.2 血清標(biāo)志物檢測：收集患者清晨狀態(tài)下空腹靜脈血5 ml，在3000 r/min條件下離心約15 min，留取上清液。通過化學(xué)發(fā)光免疫分析法，檢測CA125、CA19-9；借助酶聯(lián)免疫吸附法，檢測CEA水平。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 將DNA指數(shù)2.5作為臨界值用于評估細(xì)胞狀態(tài)。分析結(jié)果提示主要為2C細(xì)胞，未見異倍體細(xì)胞、DNA指數(shù)未超過2.5細(xì)胞為陰性；細(xì)胞增生超過5%，或可見1個及以上DNA指數(shù)高于2.5細(xì)胞，需實施組織活檢為可疑；4倍體細(xì)胞增生超過10%，或有3個及以上DNA指數(shù)高于2.5的細(xì)胞為陽性。CA19-9陽性>40 μg/L，CA19-9陽性>35 kU/L,CEA陽性>5 μg/L。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察DNA倍體分析與血清腫瘤標(biāo)志物檢測結(jié)果，分析以上兩種檢測方式單獨及聯(lián)合篩查宮頸癌價值。敏感性=真陽例數(shù)÷(真陽例數(shù)+假陰例數(shù))×100%，特異性=真陰例數(shù)÷(真陰例數(shù)+假陽例數(shù))×100%，準(zhǔn)確性=(真陽例數(shù)+真陰例數(shù))÷總例數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1 病理學(xué)檢測結(jié)果分析 病理學(xué)檢查顯示，陽性檢出率為9.76%(41/420)。其中檢出陰性、宮頸炎208例(49.52%)，宮頸癌41例(9.76%)，CINⅠ72例(17.14%)、CINⅡ56例(13.33%)、CINⅢ43例(10.24%)。

2.2 DNA倍體與病理學(xué)檢測陽性比較 DNA倍體檢查顯示：陰性275例，可疑81例，陽性64例，見表1。DNA倍體陽性檢出率15.24%(64/420)和病理學(xué)檢查9.76%(41/420)比較有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=5.758，P=0.016)，見表1。

表1 DNA倍體與病理學(xué)檢測陽性比較(例)

2.3 血清腫瘤標(biāo)志物檢測結(jié)果 正?；?qū)m頸炎、CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌組CA125、CA19-9、CEA水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表2 血清腫瘤標(biāo)志物檢測結(jié)果

2.4 DNA倍體分析、血清腫瘤標(biāo)志物篩查的敏感度及特異度 DNA倍體分析篩查宮頸癌敏感性92.68%(38/41)，特異性93.14%(353/379)，準(zhǔn)確性93.10%(391/420)；CA125篩查宮頸癌敏感性73.17%(30/41)，特異性50.13%(190/379)，準(zhǔn)確性52.38%(220/420)；CA19-9篩查宮頸癌敏感性78.05%(32/41)，特異性56.99%(216/379)，準(zhǔn)確性59.05%(248/420)；CEA篩查宮頸癌敏感性60.98%(25/41)，特異性60.16%(228/379)，準(zhǔn)確性60.24%(253/420)。DNA倍體分析+CA125+CA19-9+CEA篩查宮頸癌敏感性、特異性及準(zhǔn)確性高于DNA倍體分析、CA125、CA19-9、CEA(χ2=5.145、7.405、5.145、12.030，10.162、13.439、11.263、12.864，8.462、13.854、12.463、10.934；P=0.023、0.007、0.023、0.001，0.006、0.001、0.004、0.005，0.016、0.007、0.006、0.004)。見表3。

表3 DNA倍體分析、血清腫瘤標(biāo)志物篩查的敏感度及特異度(例)

3 討 論

以往臨床多采用宮頸細(xì)胞學(xué)涂片檢查進(jìn)行宮頸癌早期篩查，該種檢查方法具有費用少、成本低、運用范圍廣泛等優(yōu)勢，但在收集、制作樣本過程中，易出現(xiàn)涂片不均勻、上皮細(xì)胞重疊，造成病變細(xì)胞無法被及時發(fā)現(xiàn)，促使宮頸癌篩查假陰性顯著增加[11-12]。

近年來相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[13-14]，正常人體細(xì)胞內(nèi)DNA數(shù)量處于穩(wěn)定狀態(tài)，在出現(xiàn)腫瘤時，病變宮頸上皮細(xì)胞核中DNA含量及染色體發(fā)生改變，此種現(xiàn)象改變遠(yuǎn)早于病理學(xué)改變，多是因基因突變而致?；蛲蛔兛稍斐扇旧w重組，致使染色體片段增多或丟失，DNA含量也隨之發(fā)生相應(yīng)改變[15]。故而通過DNA倍體分析，可客觀反映細(xì)胞遺傳基因改變過程，區(qū)分異常增生細(xì)胞，為癌前病變提供可靠依據(jù)。DNA為細(xì)胞生長、繁殖及分化基礎(chǔ)，屬于遺傳物質(zhì)，其功能與結(jié)構(gòu)異常與細(xì)胞癌變存在密切關(guān)系[16]。非整倍體染色的形成是腫瘤發(fā)生的重要標(biāo)志之一，相關(guān)研究表示[17]，在諸多高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)、宮頸癌患者體內(nèi)均可發(fā)現(xiàn)DNA倍體異常細(xì)胞。DNA倍體分析技術(shù)通過將病變組織細(xì)胞放于細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)，經(jīng)過離心及分層等操作，獲取所需成分，從而減少雜質(zhì)對檢查結(jié)果的干擾，促使細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)更加清晰。在此條件下，采用全自動細(xì)胞DNA倍體分析儀技術(shù)，可有效避免人為觀察所造成的誤差，從而增加臨床診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性及客觀性。本研究中，DNA倍體分析發(fā)現(xiàn)隨著患者宮頸病變嚴(yán)重程度的增加，DNA指數(shù)高于2.5的細(xì)胞檢出例數(shù)也隨之增加，尤其是宮頸癌患者。可見通過DNA倍體分析能為宮頸癌早期篩查提供科學(xué)依據(jù)。

血清腫瘤標(biāo)志物是一種反映腫瘤細(xì)胞存在及生長的化學(xué)類物質(zhì)，由宿主和腫瘤間相互作用生成，或單由腫瘤細(xì)胞生成，廣泛存在于腫瘤組織、組織液及血液內(nèi)。于腫瘤形成早期腫瘤標(biāo)志物便會出現(xiàn)[18]。CA125屬于臨床常用腫瘤標(biāo)志物之一，利用CA125單克隆抗體區(qū)分高分子糖蛋白，多見于卵巢癌患者宮頸內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜及輸卵管內(nèi)。當(dāng)患者體內(nèi)出現(xiàn)癌變細(xì)胞時，CA125水平會出現(xiàn)顯著增高。本研究中，宮頸癌組CA125水平和正?；蜓装Y、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組比較，均顯著較高，同樣提示了在宮頸癌篩查中CA125可起到良好作用。但值得注意的是，CA125水平異常增高也可見于部分良性病變，如卵巢囊腫、盆腔炎、肝炎等，因此還應(yīng)將其和其他檢驗方式進(jìn)行聯(lián)合運用，以提升臨床診斷準(zhǔn)確性。CA19-9為細(xì)胞膜上脂質(zhì)，于血清內(nèi)呈糖蛋白方式存在，由消化道癌變細(xì)胞分泌合成，因此被臨床廣泛用于消化道部位惡性腫瘤鑒別診斷及療效評估。本研究中，宮頸癌組CA19-9水平較正?；蜓装Y、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組高，提示CA19-9可指導(dǎo)宮頸癌篩查工作的進(jìn)行。CEA為一種含多糖蛋白復(fù)合物，屬于非特異性血清腫瘤標(biāo)志物，其水平顯著增加多見于乳腺癌、肺癌及胰腺癌。CEA多存在于腫瘤細(xì)胞表面，結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，可在多種惡性病變中表達(dá)，和腫瘤組織大小、浸潤程度及轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系。

本研究中，宮頸癌組CEA水平與正?；蜓装Y、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組比，顯著較高，說明在宮頸癌篩查中CEA可起到良好參考作用。無論是DNA倍體分析還是血清腫瘤標(biāo)志物檢查均存在一定局限性，為保證宮頸癌篩查質(zhì)量，本研究提出將以上兩種檢測技術(shù)進(jìn)行聯(lián)合運用。本研究結(jié)果顯示：DNA倍體分析+CA125+CA19-9+CEA篩查宮頸癌敏感性、特異性及準(zhǔn)確性與DNA倍體分析、CA125、CA19-9、CEA比較，均明顯較高，提示DNA倍體分析結(jié)合血清腫瘤標(biāo)志物篩查宮頸癌的價值更高。雖然本項研究已經(jīng)初步得出在宮頸癌早期篩查中DNA倍體分析與血清腫瘤標(biāo)志物具有良好聯(lián)合運用價值，但本次研究還存在一定局限性，如未充分驗證不同腫瘤標(biāo)志物和DNA倍體分析的聯(lián)用價值、腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)減少等，后期還應(yīng)明確不同腫瘤標(biāo)志物與DNA倍體檢查的不同價值，尋求一種經(jīng)濟(jì)且準(zhǔn)確性較高的聯(lián)合檢測方式，以減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

綜上所述，宮頸癌對女性身體健康危害性較為顯著，早期診斷工作的開展十分必要。DNA倍體分析、血清腫瘤標(biāo)志物檢測均能在早期發(fā)現(xiàn)細(xì)胞癌變，促進(jìn)臨床診療工作的開展，尤其是兩種檢測方式聯(lián)合運用價值更高。