1%谷維菌素可溶液劑的高效液相色譜分析方法

王龍，卞傳飛，劉浪，高美珠，吳天琦，李保同

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 國土資源與環(huán)境學(xué)院，江西 南昌 330045)

植物生長調(diào)節(jié)劑是模仿了植物激素的生長調(diào)節(jié)作用而人工合成的化合物，在蔬菜、水果、糧食等方面廣泛應(yīng)用[1-4]，現(xiàn)已成為作物高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)高效的重要工藝[5-10]。谷維菌素是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，有使用劑量低、高藥效的特征，可降低株高、增粗莖基部、降低重心，從而增加產(chǎn)量。本文建立了高效液相色譜測量1%谷維菌素可溶液劑中有效成分含量的方法，精確度好，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，結(jié)果可靠，適用于定量分析谷維菌素。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)品(≥98%，江西農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院)；1%谷維菌素可溶液劑(東北農(nóng)業(yè)大學(xué))；乙腈、磷酸均為色譜純。

安捷倫1260型Ⅱ代液相色譜儀；Poroshell 120 EC-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，4-Micron)；EX224ZH電子天平。

1.2 溶液配制

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 用電子天平準(zhǔn)確稱取谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g，于100 mL容量瓶中，加入 10 mL 乙腈，進(jìn)行溶解，再用超聲波水浴助溶，冷卻至室溫、溶液清澈透明后，用乙腈定容至刻度線，搖勻，配制成100 mg/L的溶液，放置冰箱冷藏備用。

1.2.2 試樣溶液配制 用電子天平精準(zhǔn)稱量1%谷維菌素可溶液劑1.000 0 g，于100 mL容量瓶中，加入10 mL乙腈，進(jìn)行溶解，再用超聲波水浴助溶，冷卻至室溫、溶液清澈透明后，用乙腈定容至刻度線，搖勻，配制成100 mg/L的溶液，放置冰箱冷藏備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

可變波長檢測器(VWD)，檢測波長261 nm；流動(dòng)相為C2H3N∶1%磷酸水=20∶80(體積比v/v)，流速0.35 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

等待儀器泵的壓力和基線趨于穩(wěn)定后，移取1份標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過0.22 μm有機(jī)濾膜再注入進(jìn)樣瓶，然后上機(jī)檢測，在重復(fù)跑完幾組標(biāo)準(zhǔn)品后，觀察相鄰2組的峰面積，待峰面積變化幅度低于1.5%時(shí)，按照標(biāo)→試→試→標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣，進(jìn)行上述操作。測定結(jié)果見圖1、圖2。

圖1 谷維菌素標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 1%谷維菌素可溶液劑液相色譜圖

根據(jù)谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和1%谷維菌素可溶液劑的峰面積(分別取平均值)，利用以下公式計(jì)算試樣溶液中谷維菌素的含量(W2，%)：

式中A1、A2——分別為標(biāo)樣峰面積和試樣峰面積；

M1、M2——分別為標(biāo)樣的質(zhì)量和試樣的質(zhì)量，g；

W1——標(biāo)樣中谷維菌素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

取一定量的100 mg/L的谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行紫外掃描，得到吸收光譜，見圖3。

由圖3可知，谷維菌素在261 nm附近吸收波長最大。因此，選擇261 nm為檢測波長。

圖3 谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液紫外吸收色譜圖

2.2 流動(dòng)相的確定

為了選擇合適的流動(dòng)相，反復(fù)測試了甲醇/水、乙腈/水、甲醇/0.1%磷酸水、甲醇/0.1%甲酸水、乙腈/0.1%磷酸水和乙腈/0.1%甲酸水體系的不同比例，以及測試了柱溫對(duì)峰面積以及保留時(shí)間的影響。經(jīng)測試發(fā)現(xiàn)，柱溫對(duì)其影響較小，不對(duì)其進(jìn)行單獨(dú)討論；而不同的流速對(duì)出峰時(shí)間的影響為：流速越小，保留時(shí)間越久；采用乙腈作為有機(jī)相，峰面積更大、峰更高、雜峰更少；乙腈/水的峰型中會(huì)出現(xiàn)拖尾以及峰型不對(duì)稱的現(xiàn)象，所以將水相更換為磷酸水或者甲酸水；而相對(duì)于甲酸水，磷酸水的峰型普遍對(duì)稱。因而選擇乙腈/0.1%磷酸水作為流動(dòng)相，并對(duì)其體積比進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)乙腈比例越少，峰型越完美，而乙腈的多少對(duì)于峰面積的影響較小。出于保留時(shí)間、峰型和經(jīng)濟(jì)考慮，最終決定色譜條件為：體積比為20∶80的乙腈和0.1%磷酸水作為流動(dòng)相，流速為0.35 mL/min，柱溫30 ℃。

2.3 線性相關(guān)性的測定

制備質(zhì)量濃度梯度為0.01，0.1，1，10，25，50，100 mg/L的谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)液，根據(jù)上述液相條件進(jìn)行檢測，利用外標(biāo)法(峰面積)進(jìn)行定量分析。以谷維菌素標(biāo)液的質(zhì)量濃度作為x橫坐軸，谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積作為y縱坐軸，做標(biāo)準(zhǔn)曲線圖(圖4)。

圖4 谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線

將數(shù)據(jù)擬合，得線性回歸方程為y=92.186x-24.665，R2=0.999 8，表明在0.01～100 mg/L濃度范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度具有良好的擬合度。

2.4 方法精密度的測定

按照上述液相條件，從同一100 mg/L谷維菌素可溶液劑試樣中吸取5份等量樣品，等儀器基線平穩(wěn)后連續(xù)測定，通過計(jì)算得到1%谷維菌素可溶液劑的結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)都為0.25%(見表1)，變異系數(shù)符合國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(huì)(CIPAC)的要求(<1.17%)，證明此方法精密度高。

表1 1%谷維菌可溶液劑精密度測定

2.5 方法準(zhǔn)確度的測定

稱取5份相同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的1%谷維菌素可溶液劑試樣于容量瓶中，分別加入不同質(zhì)量的谷維菌素標(biāo)準(zhǔn)品，混合定容之后搖勻，待儀器基線平穩(wěn)后，再上機(jī)進(jìn)行檢測，結(jié)果見表2。

表2 1%谷維菌素可溶液劑準(zhǔn)確度測定結(jié)果

由表2可知，該條件下谷維菌素的回收率在99.44%～101.45%之間。

3 結(jié)論

以Poroshell 120 EC-C18反相色譜柱作為分離柱，采用可變波長檢測器(VWD)，檢測波長為 261 nm，以乙腈/0.1%磷酸水(體積比20∶80)作為流動(dòng)相，流速為0.35 mL/min，建立了一種檢測1%谷維菌素可溶液劑的有效成分的高效液相色譜分析方法。該方法操作簡易，分離效果良好，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，具有良好的擬合度，且精密度和準(zhǔn)確度高，適用于1%谷維菌素可溶液劑的定量檢測。