白花玉簪組培快繁技術(shù)研究

張碧薇，樊繼德，陸信娟，劉燦玉，趙永強，楊 峰

（江蘇徐淮地區(qū)徐州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，江蘇 徐州 221121）

玉簪屬于[Hosta plantaginea（L.） Aschers.]百合科（Liliaceae）玉簪屬（Hosta），為多年生宿根草本花卉，原產(chǎn)于中國、韓國和日本以及原蘇聯(lián)遠東地區(qū)，主要分布在亞洲溫帶和亞熱帶地區(qū)[1]。玉簪習(xí)性耐陰耐寒，品種繁多，葉片的形狀、大小、顏色、紋理和質(zhì)地等各不相同[2-3]。到了花期，玉簪花姿優(yōu)美，香氣宜人，花色豐富多彩，有白色、紫色、淡紫色和藍紫色等。玉簪既可觀花又可觀葉，是非常受歡迎的園林景觀地被植物，具有很高的觀賞應(yīng)用前景[4-5]。該試驗選用的白花玉簪（YZ14）有粗壯的根狀莖，多數(shù)須狀根。葉叢基生，葉卵狀心臟形，葉片邊緣有深綠色縱紋，中間葉色嫩綠，有光澤?；ㄇo從葉叢中抽出，頂生總狀花序，花色潔白，管狀漏斗形，有香味。該玉簪品種抗寒耐陰能力強，對強光照具有一定適應(yīng)性，并且自身具有較強的抗病抗蟲害的特點。

常規(guī)的玉簪繁殖技術(shù)為播種和分蘗繁殖[6]，繁殖速度慢[7]，受季節(jié)和環(huán)境的影響特別大，而且極易出現(xiàn)植株變異及退化現(xiàn)象[8]，無法滿足市場需求和推廣應(yīng)用玉簪種苗的要求[9-11]。因此，采用現(xiàn)代植物組培快繁技術(shù)，對玉簪增殖、生根培養(yǎng)基的進行優(yōu)化研究，篩選出最適宜的培養(yǎng)基配方，提高繁殖速度，同時也為玉簪組培苗快速繁育提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以白花玉簪（編號 YZ14）的幼芽為試驗材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體的選擇 選取新鮮無病蟲害的完整植株，剝?nèi)ト~片，剪去下部須狀根，用自來水反復(fù)清洗新發(fā)幼芽。用解剖刀切取幼芽，用洗衣粉水浸泡10 min左右進行表面清洗，再置于流水下沖洗30 min。將預(yù)處理過的幼芽放在超凈工作臺上用75%酒精浸泡30 s，用無菌水沖洗1～2次，再用40%花王消毒溶液浸泡消毒3 min，無菌水沖洗3～5次，濾去無菌水后用無菌濾紙吸干備用。再次剝?nèi)ネ獍娜~片，保留基部包含生長點的幼芽，將里面的嫩芽接種到制備好的培養(yǎng)基上。

1.2.2 培養(yǎng)條件 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度和類型的激素進行處理，另外培養(yǎng)基加蔗糖30 g/L，瓊脂6 g/L，并將pH值調(diào)至5.8（生根培養(yǎng)基以1/2 MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，另外培養(yǎng)基加蔗糖20 g/L，瓊脂6 g/L，并將pH值調(diào)至5.8）。培養(yǎng)溫度為（25±2）℃，光照強度1 000～2 000 Lx，光照時間10～14 h/d。

1.2.3 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選 誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度和類型的激素進行處理，細胞分裂素選擇6-BA ，生長素NAA，共設(shè)4個處理，分別為：（Y1）MS + 0.2 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA；（Y2）MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA；（Y3）MS+ 1.0 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA；（Y4）MS + 2.0 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA。

每組5瓶，每瓶接入4個外植體，于組培室進行培養(yǎng)，觀察接種外植體的生長發(fā)育狀態(tài)，確定最合適玉簪誘導(dǎo)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.2.4 增值培養(yǎng)基的篩選 增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度和類型的激素進行處理，細胞分裂素選擇6-BA，生長素NAA ，共設(shè)5個處理，分別為：（Z1）MS + 2.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA；（Z2）MS + 2.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA；（Z3）MS +3.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA；（Z4）MS + 3.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA；（Z5）MS + 4.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA。

將叢生芽分割成單芽，分別接種在不同的增殖培養(yǎng)基上，每組5瓶，每瓶接入4個單芽，組培室中培養(yǎng)，觀察芽的增殖情況，確定最合適玉簪生長的增殖培養(yǎng)基。

1.2.5 生根培養(yǎng)基的篩選 生根培養(yǎng)基以 1/2 MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度和類型的激素進行處理，生長素選擇IBA（0.0、0.1、0.5 mg/L），共設(shè)3個處理，分別為：（G1）1/2 MS ；（G2）1/2 MS +0.1 mg/L IBA ；（G3）1/2 MS +0.5 mg/L IBA 。

在增殖培養(yǎng)基形成的叢生芽中，輕輕去除基部老葉，切去芽高4 cm左右，生長健壯的芽體接種于不同的生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，每組5瓶，每瓶接入3個芽體，于組培室進行培養(yǎng)，觀察芽體的生根情況，30 d后統(tǒng)計生根情況，確定最合適玉簪生長的生根培養(yǎng)基。

2 結(jié)果與分析

2.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選

由表1可以看出，在同等的消毒措施和培養(yǎng)條件下，不同激素處理的外植體材料均可出芽。處理Y1叢生芽較少，隨著6-BA的濃度提高，叢生芽的誘導(dǎo)率也隨之提高，處理Y2的叢生芽誘導(dǎo)率提高至75%，這可能是6-BA有利于芽的形成，促進芽的分化。提高NAA的濃度，處理Y3叢生芽密集，芽誘導(dǎo)率最高可達95%，且生長狀態(tài)良好。而當(dāng)6-BA的濃度提高至2.0 mg/L時，處理Y4的叢生芽較弱，而且出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，由此可見，高劑量的6-BA和NAA激素組合也不利于叢生芽的誘導(dǎo)。在該試驗中，白花玉簪YZ14叢生芽誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA，該培養(yǎng)基叢生芽誘導(dǎo)效果較好且叢生芽長勢良好。

表1 不同培養(yǎng)基對玉簪叢生芽誘導(dǎo)的影響

2.2 增值培養(yǎng)基的篩選

由表2可知，添加低濃度的6-BA增殖較少，芽長勢一般；隨著6-BA濃度的提高，芽的增殖系數(shù)隨之提高，生長較快，質(zhì)量較好；繼續(xù)提高6-BA的濃度，芽的增殖系數(shù)反而逐漸降低，并且出現(xiàn)玻璃苗現(xiàn)象。其中處理Z3葉片增殖速度較快，長勢較好，葉片寬大，葉色正常且無畸形（圖1）。由此可見，6-BA的濃度在芽的增殖階段起到關(guān)鍵作用，白花玉簪YZ14芽增殖的適宜培養(yǎng)基為MS + 3.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA，該培養(yǎng)基組合可提高芽的質(zhì)量，且增殖效果較好。

圖1 Z3培養(yǎng)基上玉簪增殖情況

表2 不同培養(yǎng)基對玉簪增殖的影響

2.3 生根培養(yǎng)基的篩選

如表3所示，隨著IBA濃度的增加，白花玉簪的組培苗的生根率和生根數(shù)呈現(xiàn)出先增后減的趨勢。處理G2如圖2所示，經(jīng)過30 d的培養(yǎng)，有較好的生根效果，生根率可達100%，葉片濃綠，根系粗壯發(fā)達，長勢較好，整體植株形態(tài)正常，處理G2可作為最佳生根培養(yǎng)基。因此，白花玉簪YZ14的適宜生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.1 mg/L IBA。

圖2 G2培養(yǎng)基上玉簪生根情況

表3 不同培養(yǎng)基對玉簪生根的影響

3 結(jié) 論

試驗結(jié)果表明，在芽誘導(dǎo)階段，白花玉簪的最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.5 mg/L NAA；在芽增殖階段，最適繼代增殖培養(yǎng)基為MS+ 3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA；在生根階段，生根培養(yǎng)基1/2 MS+0.1 mg/L IBA的生根效果較好。

在白花玉簪的組織培養(yǎng)研究中發(fā)現(xiàn)，不同的培養(yǎng)溫度、光照時間和光照強度對組培苗的長勢，葉色以及增殖系數(shù)均有一定的影響，具體影響還有待進一步的研究。