凝膠滲透-負(fù)化學(xué)電離源質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中多種農(nóng)藥殘留

◎ 徐文科，孟祥龍，范廣宇，姚燕林，夏 夢(mèng)，宋 蘇

(連云港海關(guān)，江蘇 連云港 222042)

水產(chǎn)品作為優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物蛋白來源，普遍被人們所接受。但長(zhǎng)期以來，人們對(duì)于水產(chǎn)品的質(zhì)量安全問題主要關(guān)注的是其獸藥殘留，對(duì)農(nóng)藥殘留關(guān)注相對(duì)較少[1]。近年來，國外對(duì)我國出口水產(chǎn)品檢測(cè)項(xiàng)目及限量要求越來越苛刻，出口水產(chǎn)品因農(nóng)獸藥殘留超標(biāo)被國外通報(bào)及退貨現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，如出口泥鰍中硫丹、鰻魚中氟樂靈等農(nóng)藥殘留項(xiàng)目就因被通報(bào)而實(shí)施了命令檢查[2]。有機(jī)氯和菊酯類農(nóng)藥作為高效廣譜的殺蟲劑，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在環(huán)境中不易降解，殘留期較長(zhǎng)，特別是有機(jī)氯農(nóng)藥在水和土壤中的長(zhǎng)期殘留，可能隨環(huán)境遷移到水生動(dòng)物體內(nèi)，進(jìn)而危害人體健康[3]。在水產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)過程中，樣品的前處理過程至關(guān)重要，提取凈化的效果直接影響到最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[4]。本文采用凝膠滲透色譜（GPC）對(duì)提取物進(jìn)行純化，去除大分子雜質(zhì)，再用固相萃取小柱-正丙基乙二胺（PSA）進(jìn)行凈化，選用高選擇性的GCNCI/MS進(jìn)行測(cè)定。該方法的靈敏度大大提高，目標(biāo)物的檢出限能滿足進(jìn)口國家的要求。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑

試驗(yàn)中的氯化鈉為優(yōu)級(jí)純；環(huán)己烷、正己烷、乙腈、乙酸乙酯均為色譜純；艾氏劑、狄氏劑、異狄氏劑、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、硫丹硫酸鹽、氯氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲環(huán)唑和溴氰菊酯等10種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品，購自德國Dr公司,純度均大于99%；試驗(yàn)用水為超純水，密理博公司。

1.1.2 儀器

美國Agilent公司的7890N GC（配有ECD）和5975B GC-MSD（配有化學(xué)電離源（CI））；德國LCtech公司的凝膠滲透凈化裝置；美國Varian公司的PSA小柱（1g/6 mL）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備

分別準(zhǔn)確稱量10 mg（精確到0.1 mg）的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品于50 mL容量瓶，用正己烷溶解，配制成200 μg·mL-1的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，儲(chǔ)存于-18 ℃環(huán)境中備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)混合溶液制備

根據(jù)需要，取一定量的每種單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液加入10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋到刻度。

1.2.3 樣品前處理

（1）樣品提取。取待測(cè)水產(chǎn)樣品的肌肉組織放入組織搗碎機(jī)，徹底搗碎成糊狀備用。準(zhǔn)確稱取10.0 g制好的樣品于三角燒瓶中，加入20 mL乙腈，高速均質(zhì)3 min，用定性濾紙過濾到50 mL塑料離心管中，加入5 g氯化鈉，旋渦混合1 min，以2 000 r·min-1速度離心，分離乙腈相和水相5 min。將乙腈層完全轉(zhuǎn)移到100 mL旋蒸瓶中，在40 ℃水浴中減壓濃縮近干，然后用3 mL正己烷溶解殘?jiān)?將3 mL待凈化液過0.45 μm濾膜后上GPC凈化。

（2）GPC凈化。500 mm×20 mm凈化柱，填充10 g聚苯乙烯-二乙烯基苯（微球體，中性多孔）；柱床高：34 cm；流動(dòng)相：乙酸乙酯-環(huán)己烷（1∶1）；定量環(huán)：2.0 mL，流速2.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：2.0 mL；預(yù)洗脫量：20 mL；洗脫量：10 mL；清洗量，10 mL。洗脫液按凝膠滲透色譜條件，按照1.2.3（1）所述的待凈化液2 mL上GPC凈化后，收集在20 mL離心管中。將收集到的洗脫液在45 ℃的水浴中用氮?dú)獯抵? mL，進(jìn)一步凈化。

（3）固相萃取柱凈化。PSA小柱，用丙酮-正己烷（2∶8體積比）5 mL預(yù)先柱活化，然后將1.2.3（2）得到的1 mL溶液轉(zhuǎn)移到柱上，分3次，每次用2 mL丙酮-正己烷（2∶8）洗脫液洗脫，收集于10 mL離心管中；于45 ℃水浴中用氮?dú)鈱⑹占降南疵撘捍蹈芍? mL，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4 GC-MS檢測(cè)條件

氣相色譜條件。色譜柱：HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；柱溫：初始溫度80 ℃，保持1 min，以30 ℃·min-1速率升溫至 130 ℃，再以 10 ℃·min-1速率升溫至260 ℃，保持15 min。載氣：高純氦氣，純度≥99.999%；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量，1 μL。進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，溶劑延遲3.0 min；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；質(zhì)譜接口溫度，270 ℃。

1.2.5 質(zhì)譜條件

發(fā)射電流：49.5 μA；電離電壓：118.6 eV；四極桿溫度：160 ℃；離子源溫度：160 ℃；反應(yīng)氣甲烷，純度≥99.99%。10種目標(biāo)農(nóng)藥的定性及定量離子，見表1。

表1 多種農(nóng)藥的定量及定性離子表

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理方式的選擇

水產(chǎn)品基質(zhì)復(fù)雜,基體中含有色素、脂肪等大分子雜質(zhì)。為了減少雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)檢測(cè)的干擾，避免雜質(zhì)對(duì)離子源的污染，需要采取有效的凈化方法去除這些雜質(zhì)。由于PSA固相萃取柱能有效吸附脂肪酸、有機(jī)酸等極性雜質(zhì)，凝膠色譜（GPC）能有效去除油脂等大分子雜質(zhì)，廣泛用于動(dòng)物源性食品及水產(chǎn)品中多種農(nóng)藥殘留的測(cè)定[5]。因此，本文研究了凝膠色譜和固相萃取柱的凈化效果。將二者結(jié)合使用對(duì)提取液進(jìn)行凈化,可達(dá)到理想的凈化效果。通過比較發(fā)現(xiàn),用PSA小柱凈化效果最好，基質(zhì)干擾較少，所以選擇PSA柱作為凈化萃取柱。

2.2 儀器方法的選擇

雖然許多雜質(zhì)可以通過一系列的提純過程被除去，但仍然有一些未知的物質(zhì)類似于目標(biāo)物質(zhì)而產(chǎn)生干擾，應(yīng)選擇合適的儀器檢測(cè)方法，提高方法的抗干擾性能和良好的選擇性[6]。試驗(yàn)比較了GC-ECD、GC-EI/MS SIM（選擇性離子監(jiān)測(cè)模式）和GC-NCI/MS SIM，通過比較發(fā)現(xiàn)，GC-NCI/MS SIM圖譜非常干凈，雜質(zhì)峰很少且基線非常低，有良好的選擇性和高靈敏度，因此選擇GC-NCI/MS SIM進(jìn)行檢測(cè)。

2.3 多種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流色譜圖

多種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖，如圖1所示。

圖1 多種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.05 μg·mL-1）的總離子流色譜圖

2.4 線性方程及檢出限

準(zhǔn)確配制 0.01 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1和 1.00 mg·L-1的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在“1.2.4”節(jié)所述儀器條件下分別進(jìn)樣，用每種農(nóng)藥的定量離子峰面積對(duì)其質(zhì)量濃度繪圖，分別得到每種待測(cè)組分的線性方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)，結(jié)果如表2所示。用陰性泥鰍樣品基質(zhì)溶液配制成0.01 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,以去除基質(zhì)效應(yīng)，根據(jù)信噪比（S/N）≥3推斷出檢出限，見表2，多種農(nóng)藥的檢出限均能滿足韓國、日本等的最低限量要求。

表2 多種農(nóng)藥的保留時(shí)間、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、回收率、精密度、檢出限及定量限表

2.5 方法的精密度及準(zhǔn)確度

在10 μg·kg-1添加水平下，分別取泥鰍陰性樣品做加標(biāo)回收試驗(yàn)，重復(fù)平行試驗(yàn)6次，計(jì)算每種待測(cè)物的回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），以驗(yàn)證方法的精密度、準(zhǔn)確度，結(jié)果見表2。由表2可知，相關(guān)目標(biāo)物的回收率均在71.3%～107.2%。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)將固相萃取柱（PSA）與凝膠滲透色譜（GPC）聯(lián)合使用，對(duì)水產(chǎn)樣品進(jìn)行凈化處理，并選用高選擇性的GC-NCI/MS進(jìn)行定性和定量分析。本試驗(yàn)方法的凈化效果好，選擇性強(qiáng)，靈敏度高，適合于口岸出口水產(chǎn)樣品多種農(nóng)藥殘留的準(zhǔn)確測(cè)定。