4種藥物對貪食邁阿密蟲種群生長的影響

王紅宇，呂湘琳，石雪，齊紅莉

4種藥物對貪食邁阿密蟲種群生長的影響

王紅宇，呂湘琳，石雪，齊紅莉通信作者

（天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院 天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300392）

為探究致病性原生動物纖毛蟲貪食邁阿密蟲（）在4種藥物不同濃度影響下的種群生長情況，以貪食邁阿密蟲為試驗(yàn)材料，在25 ℃恒溫、光照強(qiáng)度1 000 lx的培養(yǎng)條件下，測定在4種藥物不同濃度下（氯化鈉：0、200、400、600、800、1 000 mg/L；氯化汞：0、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/L；敵百蟲：0、100、200、300、400、500 mg/L；硫酸銅：0、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030 mg/L）種群密度的變化。結(jié)果顯示，4種藥物對貪食邁阿密蟲的種群生長均起到抑制作用，且觀察到貪食邁阿密蟲對硫酸銅與氯化汞的敏感性相對較高，氯化鈉濃度為800 mg/L，敵百蟲濃度為500 mg/L，硫酸銅濃度為0.030 mg/L，氯化汞濃度為0.010 mg/L時(shí)對貪食邁阿密蟲種群生長抑制作用最為明顯。

貪食邁阿密蟲；氯化鈉；氯化汞；敵百蟲；硫酸銅；種群增長

近年來隨著休閑漁業(yè)興起，觀賞魚類養(yǎng)殖業(yè)蓬勃發(fā)展，已經(jīng)在漁業(yè)養(yǎng)殖中占據(jù)了十分重要的地位。目前，工廠化養(yǎng)殖和規(guī)?；W(wǎng)箱養(yǎng)殖方式已逐漸成為我國海洋魚類養(yǎng)殖的主要模式[1-4]，由于封閉的養(yǎng)殖水體通常存在“營養(yǎng)過富”的問 題[5]，導(dǎo)致原生動物纖毛蟲中某些嗜污類群過量繁殖，誘發(fā)海水養(yǎng)殖動物病害及死亡，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[6]。此外，抗生素的濫用也加劇水產(chǎn)養(yǎng)殖水體惡化[7]。在海水觀賞養(yǎng)殖魚類中，盾纖類纖毛蟲病帶來的危害越來越嚴(yán)重。因此，對這類纖毛蟲的防治是解決海水觀賞魚類養(yǎng)殖中病害問題的首要任務(wù)之一。

貪食邁阿密蟲（）隸屬于寡膜綱（Oligohymenophorade），盾纖目（Scuticoci- liatida），嗜污亞目（Philasterin），嗜污科（Philasteridae），邁阿密蟲屬（），可在魚體內(nèi)外棲生或行兼性寄生，最早由Thompson及Moewus發(fā)現(xiàn)并鑒定[8]。國內(nèi)外已有的報(bào)道表明[9-10]，貪食邁阿密蟲能寄生于多種海水養(yǎng)殖魚類，嚴(yán)重危害魚體健康，并導(dǎo)致死亡。因此，針對貪食邁阿密蟲感染的防治方法研究在海水養(yǎng)殖中具有重要意義。

目前，在水生動物寄生蟲的防治中，化學(xué)藥物治療仍是最有效的方法[11]。近年來，氯化鈉、硫酸銅、氯化汞、敵百蟲對水生生物毒性的報(bào)道較多。然而，硫酸銅、氯化汞和敵百蟲3種藥物對貪食邁阿密蟲的毒性研究尚未見相關(guān)報(bào)道。氯化鈉通過調(diào)節(jié)滲透壓從而達(dá)到殺蟲的目的；敵百蟲具有觸殺和胃毒作用、滲透活性，作為一種廣譜性藥物，使動物神經(jīng)中毒直至死亡[12]；硫酸銅溶液能殺死球狀菌類的病原體[13]，重金屬離子能使蛋白質(zhì)失去活性；氯化汞可以致使蛋白質(zhì)變質(zhì)，其毒性機(jī)理表現(xiàn)為Hg2＋與體內(nèi)許多重要酶的活性中心巰基結(jié)合從而抑制巰基的酶的生理機(jī)能，從而影響細(xì)胞的代謝功能[14]。本試驗(yàn)以貪食邁阿密蟲為研究對象，比較4種藥物（氯化鈉、硫酸銅、敵百蟲、氯化汞）的殺（抗）蟲效果，旨在找到能有效防治貪食邁阿密蟲感染的抗蟲藥物及最適藥物濃度，為進(jìn)一步篩選適合觀賞魚養(yǎng)殖中應(yīng)用的抗蟲藥物提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

試驗(yàn)儀器選擇OLYMPUS IX71倒置顯微鏡；試驗(yàn)試劑為95％氯化鈉；90％敵百蟲；98％硫酸銅；99％氯化汞。

1.2 試驗(yàn)材料

貪食邁阿密蟲由中國海洋大學(xué)原生動物學(xué)實(shí)驗(yàn)室種庫惠贈，試驗(yàn)前對貪食邁阿密蟲進(jìn)行種群活化培養(yǎng)。取適量的蟲體接種于米粒培養(yǎng)液中擴(kuò)大培養(yǎng)，至種群密度大于2 500 ind/mL。貪食邁阿密蟲在25 ℃恒溫、光照強(qiáng)度為1 000 lx的條件下培養(yǎng)。

1.3 試驗(yàn)方法

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)以滅菌的海水為稀釋液，設(shè)置0、200、400、600、800、1 000 mg/L的氯化鈉溶液；0、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/L的氯化汞溶液；0、100、200、300、400、500 mg/L敵百蟲溶液；0、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030 mg/L的硫酸銅溶液。每一濃度組設(shè)3個(gè)平行。顯微操作毛細(xì)玻璃管挑取10只貪食邁阿密蟲于一次性六孔培養(yǎng)板中，試驗(yàn)周期為7 d。每隔12 h在倒置顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，每個(gè)孔重復(fù)計(jì)數(shù)3次，計(jì)數(shù)過程要求2次計(jì)數(shù)誤差不能超過15％[15]。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)取平均值，Sigmaplot 13.0軟件繪圖，SPSS 16.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 氯化鈉對貪食邁阿密蟲種群生長的影響

不同濃度氯化鈉影響下貪食邁阿密蟲在培養(yǎng)液中的種群生長見圖1。由圖1可知，在氯化鈉濃度為0 mg/L時(shí)，種群在經(jīng)過96 h的指數(shù)生長期后達(dá)到種群密度的最大值（2.7×103ind/L）。貪食邁阿密蟲在氯化鈉濃度為200 mg/L作用下，24 h進(jìn)入指數(shù)生長期，指數(shù)生長期歷時(shí)72 h；96 h達(dá)到種群密度的最大值3.3×103ind/L；120 h后，隨著藥物作用時(shí)間延長，其種群密度降低。在氯化鈉為400、600 mg/L濃度下，種群指數(shù)生長期歷時(shí)同為96 h，均在120 h達(dá)到種群密度的最大值，其平均密度分別為2.9×103ind/L、2.8×103ind/L；144 h后，隨著作用的時(shí)間延長，其種群密度降低。在氯化鈉為800、1 000 mg/L濃度下，貪食邁阿密蟲的種群密度隨作用時(shí)間延長而降低，168 h內(nèi)，種群密度均為0 ind/L。

2.2 敵百蟲對貪食邁阿密蟲種群生長的影響

不同敵百蟲培養(yǎng)液濃度下，貪食邁阿密蟲的種群生長如圖2所示，由圖2可知，藥物濃度為0 mg/L時(shí)，種群在24 h進(jìn)入指數(shù)生長期，指數(shù)生長期持續(xù)72 h達(dá)到種群密度最大（6×103ind/L）；在120 h，隨著藥物作用時(shí)間延長，種群進(jìn)入衰退期。在100、200 mg/L濃度下，均在24 h達(dá)到指數(shù)生長期，指數(shù)生長期同為24 h；72 h后，種群密度隨著藥物作用時(shí)間延長而下降。在300 mg/L濃度下，0～120 h時(shí)間段內(nèi)，種群生長一直處于停滯期，144 h后種群密度開始降低。在敵百蟲為400、500 mg/L濃度下，0～24 h時(shí)間段內(nèi)，種群密度略微下降，隨后種群生長均長期處于停滯期，其平均密度分別為1.6×103ind/L、0.8×103ind/L。

2.3 硫酸銅對貪食邁阿密蟲種群生長的影響

在硫酸銅培養(yǎng)液中，貪食邁阿密蟲的種群密度隨藥物作用時(shí)間延長而下降，如圖3所示。在24 h內(nèi)，藥物濃度為0 mg/L時(shí)，顯微觀察可見蟲體運(yùn)動活潑；在0.010、0.015、0.020 mg/L濃度下，蟲體游動遲緩，少數(shù)個(gè)體爬行；在0.025、0.030 mg/L濃度下，多數(shù)個(gè)體附底，棘毛擺動迅速，少數(shù)個(gè)體棘毛擺動遲緩或偶有擺動。

2.4 氯化汞對貪食邁阿密蟲種群生長的影響

在氯化汞培養(yǎng)液中，貪食邁阿密蟲種群密度呈明顯下降趨勢（圖4）。在24 h之內(nèi)，對照組0 mg/L濃度下，顯微觀察可發(fā)現(xiàn)蟲體正常游動；試驗(yàn)組0.002、0.004、0.006 mg/L濃度下，多數(shù)蟲體運(yùn)動遲緩，附底且棘毛迅速擺動；在0.008、0.010 mg/L濃度下，蟲體全部附底，少數(shù)個(gè)體爬行。隨著藥物作用時(shí)間延長，貪食邁阿密蟲在0.010 mg/L濃度下全部裂解死亡，而在其余試驗(yàn)組中，蟲體在168 h內(nèi)全部死亡。

3 討論

3.1 貪食邁阿密蟲的種群生長特征

貪食邁阿密蟲屬于海洋盾纖類纖毛蟲，營兼性寄生或自由生活在各類水環(huán)境中，尤其在富營養(yǎng)化的水體中可大量出現(xiàn)，是水產(chǎn)養(yǎng)殖動物各類寄生蟲病害中最為嚴(yán)重的病害之一[16]。

在離體單克隆培養(yǎng)條件下，貪食邁阿密蟲種群經(jīng)過12 h的停滯期后開始進(jìn)入指數(shù)生長期，持續(xù)72 h后達(dá)到種群最大密度，之后進(jìn)入衰退期。有相關(guān)研究表明，25 ℃恒溫條件下，貪食邁阿密蟲在米粒培養(yǎng)液中，在接種后的72 h達(dá)到種群密度的最大值[17]，這與本研究結(jié)果基本一致；其他研究表明，拉式游仆蟲（）種群經(jīng)過36 h的停滯期之后開始指數(shù)增長，指數(shù)生長期持續(xù)108 h，達(dá)到種群最大密度；縮原克魯蟲（）種群經(jīng)過48 h的停滯期后進(jìn)入增長期，持續(xù)增長168 h達(dá)到種群密度的最大值，隨后進(jìn)入穩(wěn)定期[18]；中華游仆蟲（）種群經(jīng)過60 h的停滯期開始指數(shù)增長，指數(shù)增長期長達(dá)144 h，達(dá)到種群最大密度，經(jīng)過短暫的穩(wěn)定后進(jìn)入衰退期；在28℃恒溫條件下，海洋擬阿腦蟲（）的種群在經(jīng)過36 h的停滯期后進(jìn)入指數(shù)增長期，在指數(shù)增長期持續(xù)48 h達(dá)到種群最大密度，經(jīng)過36 h的衰退期進(jìn)入穩(wěn)定期[19]。這與本試驗(yàn)結(jié)果貪食邁阿密蟲種群增長的趨勢基本一致。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在25℃恒溫培養(yǎng)條件下，貪食邁阿密蟲進(jìn)入指數(shù)生長期的時(shí)間較短暫，且穩(wěn)定期不長即進(jìn)入衰退期，這與沈琳琳等[20]針對不同條件對水滴偽康纖蟲種群生長研究及曾紅等[21]針對不同營養(yǎng)條件對海洋尾絲蟲種群生長影響的研究結(jié)果基本一致。

3.2 不同藥物對貪食邁阿密蟲種群生長的影響

觀賞魚養(yǎng)殖中致病性纖毛蟲的生態(tài)毒理學(xué)研究，對篩選有效的防治纖毛蟲病的藥物具有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)，在4種藥物不同濃度下，貪食邁阿密蟲的種群生長存在一定的差異，在氯化鈉培養(yǎng)液中，低濃度下，氯化鈉培養(yǎng)液對種群生長具有一定的促進(jìn)作用，與對照組相比種群密度達(dá)到峰值的時(shí)間較短，高濃度下則對種群生長起到了明顯的抑制作用。在敵百蟲培養(yǎng)液中，高濃度組中，種群生長長期處于停滯期，這說明隨著藥物作用時(shí)間延長，高濃度敵百蟲培養(yǎng)液對種群生長起到了明顯的抑制作用，這與張辰笈等[22]的四環(huán)素及鹽酸四環(huán)素對尾草履蟲（）的毒性效應(yīng)研究的結(jié)果基本一致。本研究發(fā)現(xiàn)，在氯泵汞培養(yǎng)液為0.01 mg/L濃度下，貪食邁阿密蟲在12 h內(nèi)裂解死亡，王孟華[23]研究發(fā)現(xiàn)，福爾馬林濃度為600 mg/L時(shí)，盾纖毛類纖毛蟲在60 min內(nèi)，蟲體全部死亡且裂解。

4 結(jié)論

本研究表明，高濃度氯化鈉與敵百蟲培養(yǎng)液對貪食邁阿密蟲的種群生長具有抑制作用。貪食邁阿密蟲的種群在硫酸銅與氯化汞培養(yǎng)液中呈明顯下降的趨勢。但在實(shí)際應(yīng)用中，在達(dá)到有效殺蟲效果的同時(shí)，可能對海水養(yǎng)殖動物造成一定的傷害。目前，國內(nèi)外在觀賞魚養(yǎng)殖中濫用藥物的現(xiàn)象十分嚴(yán)重，這導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生抗藥性及破壞水體中有益的生物類群，因此，研制出高效、無毒、無污染的藥物仍是觀賞魚養(yǎng)殖業(yè)中亟待解決的問題。

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Effect of four drugs on Population Growth of

Wang Hongyu, Lü Xianglin, Shi Xue, Qi HongliCorrespondingAuthor

（Tianjin Key Laboratory of Aqua-Ecology and Aquaculture, College of Fisheries, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300392, China）

is a common marine pathogentic ciliate which can multiply quickly in eutrophic waters, causing fish disease and great loss to fishery resources and aquaculture.There are no drugs to prevent fish from being infected until now.In recent years, Sodium chloride, Mercury chloride, Trichlorfon, Cupric sulfate have been commonly used in aquaculture, but there was no report on the toxicity of four drugs to animals low on the aquatic food chain.In this study, the toxicity of four drugs towas investigatedwas cultured to a density of 2 500 ind/mL, at 25℃ and a light intensity of 1 000 lx.Based on the result of pre-test , the effect of four drugs（sodium chloride: 0, 200, 400, 600, 800, 1 000 mg/L; Mercury chloride: changes in population density at 0, 0.002, 0.004, 0.006, 0.008, 0.010 mg/L; Trichlorfon: 0, 100, 200, 300, 400, 500 mg/L; Cupric sulfate: 0, 0.010, 0.015, 0.020, 0.025, 0.030 mg/L）was studied.The tests showed that four drugs all inhibited the population growth of.Respectively, the sodium chloride 800 mg/L, Trichlorfon 500 mg/L, Cupric sulfate 0.03 mg/L, Mercury chloride 0.01 mg/L, the inhibition ofpopulation growthis the most obvious.

; sodium chloride; trichlorfon; cupric sulfate; mercury chloride; population growth

1008-5394（2021）03-0046-04

10.19640/j.cnki.jtau.2021.03.010

S943

A

2020-01-15

天津市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（17JCYBJC29800，15JCYBJC23900）；山東省重大科技創(chuàng)新工程專項(xiàng)（2018SDKJ0406-4）；中國海洋大學(xué)海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題（KLM2018003）；天津農(nóng)學(xué)院研究生創(chuàng)新培育計(jì)劃（2019XY024）

王紅宇（1995—），女，碩士在讀，主要從事原生動物學(xué)研究。E-mail：1393978327@qq.com。

齊紅莉（1978—），女，副教授，碩士，主要從事水生態(tài)毒理學(xué)及原生動物學(xué)研究。E-mail：qihl2000@163.com。

責(zé)任編輯：張愛婷