市售食用植物油中玉米赤霉烯酮的檢測與分析

◎ 劉 正，李 婧

（天津市乳品食品監(jiān)測中心有限公司，天津 300381）

玉米赤霉烯酮（ZEN）是真菌毒素的一種，又稱F-2毒素，主要是由禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、木賊鐮刀菌、雪腐鐮刀菌等真菌菌種產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物。ZEN具有類雌激素作用，不僅影響生殖機能，還會產(chǎn)生免疫毒性、細胞毒性、遺傳毒性，損傷肝、腎等器官[1]，中毒癥狀會有惡心、發(fā)冷、頭痛、抑郁等現(xiàn)象。在極低濃度下，ZEN能促進細胞增殖、菌落形成和細胞遷移，且ZEN可導(dǎo)致DNA損傷[2]。

玉米赤霉烯酮污染范圍廣、危害大，主要分布于中國、日本、韓國、北歐、中歐等國家、地區(qū)，存在于小麥、玉米、高粱、大米等糧油作物中[3]。存儲加工環(huán)境、加工方式、制品類型、包裝方式等因素均對食用植物油的ZEN污染情況有影響，我國針對不同環(huán)節(jié)糧油作物中ZEN的污染情況持續(xù)進行監(jiān)測。根據(jù)污染現(xiàn)狀和消費習(xí)慣各國制定了玉米赤霉烯酮在食品中的限量標準。我國根據(jù)人群膳食結(jié)構(gòu)制定的《食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）對ZEN在小麥、小麥粉和玉米、玉米面（渣、片）中的限量均為60 μg·kg-1[4]。為了掌握食用植物油中玉米赤霉烯酮的污染狀況，因此設(shè)計本試驗，初步調(diào)查分析M市市場此產(chǎn)品的質(zhì)量安全水平，指導(dǎo)消費者合理消費。

基于前期調(diào)查工作，本試驗隨機抽取M市市場、超市食用油樣品共計24批次，對食用植物油中ZEN污染進行液相色譜檢測，并對結(jié)果進行分析。

1 材料與方法

1.1 材料

隨機抽取M市市售食用植物油24批次，玉米油、花生油、大豆油、調(diào)和油樣品抽取比例為5∶3∶2∶2；玉米赤霉烯酮標準品。

1.2 儀器

島津LC-20AD液相色譜儀，配RF-20A熒光檢測器；氮吹儀；高速均質(zhì)器。

1.3 試劑

PBS/吐溫-20緩沖液（稱取8.0 g氯化鈉、1.2 g磷酸氫二鈉、0.2 g磷酸氫二鉀、0.2 g氯化鉀，用900 mL水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.0，加入1 mL吐溫-20,用水定容至1 L）；乙腈、甲醇；免疫親和柱。

1.4 樣品提取與凈化

1.4.1 提取

稱取油樣40.0 g于均質(zhì)杯中,加入4.0 g氯化鈉和100 mL提取液,以高速均質(zhì)器高速攪拌提取1 min,4 500 r·min-1離心10 min。移取10.0 mL上清液并加入40 mL水稀釋,混勻后4 500 r·min-1離心10 min，上清液備用。

1.4.2 凈化

將免疫親和柱連接于玻璃注射器下,準確移取10.0 mL上清液,注入玻璃注射器中。調(diào)節(jié)泵壓以1～2滴·s-1的流速通過免疫親和柱,直至有部分空氣進入親和柱中。依次用10 mLPBS/吐溫-20緩沖液和10 mL水淋洗免疫親和柱,流速為1～2 滴·s-1,直至空氣進入親和柱中,棄去全部流出液。準確加入1.5 mL甲醇洗脫,流速約為1 滴·s-1。收集洗脫液于干凈的玻璃試管中,于55 ℃以下氮氣吹干后,用1.0 mL流動相溶解殘渣,過膜后供液相色譜測定。

1.5 高效液相色譜分析條件

色譜柱：C18柱，柱長150 mm，內(nèi)徑4.6 mm，粒度4 μm，或等效柱；流動相：乙腈-水-甲醇(46∶46∶8體積比)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：激發(fā)波長274 nm，發(fā)射波長440 nm；進樣量：100 μL；柱溫：35 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線

準確吸取100 μg·mL-1的標準儲備液,用流動相稀 釋,配 制 成10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、80 ng·mL-1和100 ng·mL-1的系列標準工作液。玉米赤霉烯酮標準曲線見圖1。由圖1可知，其標準曲線為Y=234.915*X+197.825，R2=0.999 930 3。

圖1 玉米赤霉烯酮標準曲線圖

2.2 質(zhì)控樣品加標回收率

稱取空白食用油樣品40.0 g，設(shè)計3個濃度水平加標試驗，混勻提取凈化，上機測定。質(zhì)控樣品回收率結(jié)果見表1。

表1 質(zhì)控樣品加標回收率表

2.3 樣品檢測結(jié)果

對市場、超市抽取的24批次食用植物油樣品進行檢測，結(jié)果顯示ZEN全部未檢出。結(jié)果見表2。

表2 食用植物油抽檢結(jié)果統(tǒng)計表

3 結(jié)論與討論

通過對M市市場、超市的食用植物油的隨機抽樣檢測結(jié)果看，此環(huán)節(jié)污染物ZEN全部未檢出，說明M市ZEN超標風(fēng)險較低，生產(chǎn)廠家對食用植物油原料和工藝管控較好。然而不同地區(qū)、不同氣候真菌毒素分布不同，且目前污染嚴重[5]。下一步結(jié)合真菌毒素之間的關(guān)聯(lián)性，分析不同地區(qū)的糧油作物真菌毒素污染情況，提高抽樣基數(shù)，擴大調(diào)查范圍，進一步提高試驗的科學(xué)性、代表性。