京津冀地區(qū)貓傳染性腹膜炎疑似病例流行病學(xué)回顧調(diào)查

安 蕊，吳實(shí)權(quán)，劉 章，周常喜，趙一帆，姜代勛，李 佳，陳 武

（1.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 102206；2.獸醫(yī)學(xué)中醫(yī)藥北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102206）

貓傳染性腹膜炎（feline infectious peritonitis，F(xiàn)IP）是由貓傳染性腹膜炎型冠狀病毒引起的臨床常見寵物傳染病，死亡率高，嚴(yán)重危害貓的健康。貓冠狀病毒（feline coronavirus，F(xiàn)CoV）分為胃腸炎型（FECV）和傳染性腹膜炎型（FIPV）兩種。因此，F(xiàn)IP 的診斷需要通過病毒核酸和基因突變位點(diǎn)檢測(cè)，并結(jié)合臨床多項(xiàng)檢查指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)估[1-3]。目前尚未有對(duì)京津冀地區(qū)FIP 病例進(jìn)行系統(tǒng)流行病學(xué)調(diào)查的報(bào)道。本研究選取京津冀地區(qū)2018—2020 年數(shù)十家寵物醫(yī)院臨床疑似FCoV 感染病例725 例，分別從性別、年齡、品種、絕育情況、發(fā)病季節(jié)以及臨床特征（干濕類型）等方面進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，了解近年來京津冀地區(qū)FIP 的發(fā)生發(fā)展及流行規(guī)律，豐富和更新FIP 流行病學(xué)數(shù)據(jù)，以期為FIP 的預(yù)防及控制提供參考。

1 材料和方法

1.1 病例信息和樣本來源

收集2018—2020 年京津冀地區(qū)73 家動(dòng)物醫(yī)院725 例疑似貓F(tuán)CoV 感染病例臨床數(shù)據(jù)，以及對(duì)應(yīng)的腹水（406 份）、胸水（96 份）、糞便/血漿（221份）、心包穿刺液（2 份）等樣本。其中：北京市525 例（72.41%）、天津市101 例（13.93%）、河北省99 例（13.66%），年齡范圍在2 個(gè)月以上9歲以下，包含絕育貓143 例、未絕育貓582 例，雄性483 例、雌性242 例，品種包括中華田園貓、英國(guó)短毛貓、美國(guó)短毛貓、暹羅、布偶、波斯、喜馬拉雅貓、俄羅斯藍(lán)貓、無毛貓以及其他混合品種。樣本及臨床數(shù)據(jù)，由北京拓瑞檢測(cè)技術(shù)有限公司提供，但部分病例無法獲得精確的預(yù)后信息。

1.2 主要儀器

PCR 儀和電泳儀，BIO-RAD 公司；移液槍，Eppendorf 公司；凝膠成像儀，上海天能科技有限公司；超微量分光光度計(jì)NANO，賽默飛科技有限公司。

1.3 主要試劑

DL 2 000 DNA Marker、2×ProTaqMaster Mix（dye plus）、Evo M-MLV 一步法RT-PCR 試劑盒、AG-CelRed 核酸凝膠染料、SteadyPure 病毒DNA/RNA 提取試劑盒、膠回收試劑盒，均購自湖南艾科瑞生物工程有限公司；無水乙醇、DEPC 水、50×電泳液、瓊脂糖（Agarose），購自北京愛普銳晟科技有限公司。

1.4 病原檢測(cè)

使用RT-PCR 方法對(duì)725 份樣本進(jìn)行病原檢測(cè)，對(duì)陽性樣本使用chromas 軟件進(jìn)行測(cè)序分析。首先使用冠狀病毒（CoV）通用引物（表1）檢測(cè)，對(duì)篩選出的陽性樣本，再使用Chang 等[1]和Licitra 等[2]使用的引物S1、S2（巢式）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)突變位點(diǎn)。引物均由上海生工生物工程有限公司合成。涉及的檢測(cè)位點(diǎn)包含S 蛋白的幾個(gè)特殊氨基酸殘基。檢測(cè)出突變表明該病例罹患FIP風(fēng)險(xiǎn)顯著升高，未檢測(cè)出則表明風(fēng)險(xiǎn)一般，但不能排除罹患FIP 及發(fā)展為FIP 的可能。

表1 本試驗(yàn)涉及的引物序列

1.5 數(shù)據(jù)分析

對(duì)病例的基本信息、臨床表現(xiàn)和發(fā)病情況進(jìn)行回顧性調(diào)查，使用Excel、SPSS 22.0 軟件，統(tǒng)計(jì)分析病例的臨床特征分布、時(shí)間分布、地理分布、群間分布等流行病學(xué)特征。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

收集的725 例疑似FCoV 感染病例均有FIP臨床常見癥狀，包括反復(fù)性發(fā)熱、體腔積液等。對(duì)FCoV 疑似感染病例樣本，使用RT-PCR 方法進(jìn)行FCoV 核酸檢測(cè)，將1 對(duì)檢測(cè)FCoV 感染和2 對(duì)檢測(cè)S 基因突變位點(diǎn)的引物同時(shí)擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增的基因片段與預(yù)期結(jié)果[1-2]相符。核酸檢測(cè)結(jié)果顯示，75.0%（544/725）的樣本呈FCoV 核酸陽性。對(duì)陽性樣本進(jìn)行測(cè)序分析，結(jié)合臨床表現(xiàn)進(jìn)行FCoV 分型。結(jié)果顯示，F(xiàn)ECV 陽性率為32.6%（236/725），F(xiàn)IPV 為42.5%（308/725）。

2.2 臨床特征分布

308 例FIP 確診病例中，298 例（96.7%）出現(xiàn)了厭食、消瘦、長(zhǎng)期反復(fù)發(fā)燒、腹腔或胸腔積液等臨床癥狀，48 例（15.6%）出現(xiàn)了貧血、黃疸以及慢性嘔吐腹瀉、腸道淋巴結(jié)腫大等消化道癥狀，14 例（4.5%）出現(xiàn)了口炎、流膿性鼻炎、自發(fā)性膀胱炎、大小眼、腎周積液、共濟(jì)失調(diào)、陰囊外陰腫大或流膿以及全身出現(xiàn)紅斑、皮膚脫毛、真菌感染等皮膚疾病癥狀，4 例并發(fā)心臟病、高血壓、胰腺炎、腫瘤（腸系膜、腹膜）。另外發(fā)現(xiàn)4 個(gè)確診病例存在與其他病毒的混合感染，其中與貓艾滋病毒共感染1 例、與貓杯狀病毒共感染1 例、與貓瘟病毒共感染2 例（表2）。

表2 2018—2020 年京津冀地區(qū)308 例FIP 確診病例的臨床癥狀分布 單位：例

2.3 時(shí)間分布

2018 年FIP 陽性檢出率為53.3%（48/90），2019年為37.9%（195/515），2020年為54.2%（65/120）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，各年份FIP 陽性檢出率分布不均勻，呈波浪狀變化，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.537，P＜0.01）。7—9 月FIP陽性檢出率最高，8 月最高達(dá)到16.6%（51/308）。將病例數(shù)按照季節(jié)進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，結(jié)果春、夏、秋、冬四季FIP 陽性檢出率分別為37.4%（34/91）、40.1%（129/322）、52.8%（121/229）和37.3%（24/83），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=18.051，P＜0.01），夏、秋兩季較春、冬季高發(fā)。

圖1 2018—2020 年京津冀地區(qū)不同月份FIP 陽性檢出率分布

2.4 地區(qū)分布

河北省FIP 陽性檢出率最高，為55.6%（55/99）；其次是天津市，為42.6%（43/101）；北京市最低，為40.0%（210/525）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，三個(gè)地區(qū)的FIP 陽性檢出率有顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.249，P＜0.05）。

2.5 群間分布

2.5.1 不同品種 各品種貓均可發(fā)病，其中英國(guó)短毛貓（36.0%）、中華田園貓（15.9%）和美國(guó)短毛貓（26.0%）FIP 陽性檢出率較高，而暹羅、布偶、加菲、曼基康、德文卷毛貓等常見純種貓以及混血貓相對(duì)較低（圖2）。

圖2 2018—2020 年京津冀地區(qū)FIP 陽性檢出率品種分布

2.5.2 不同性別和絕育情況 性別統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表3）顯示：雄貓和雌貓均可發(fā)生FIP，其中雌貓的陽性檢出率為36.8%（89/242），雄貓為45.3%（219/483），二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.840，P＜0.05）。308 例FIP 確診病例中，未絕育貓（251例）明顯高于絕育貓（57 例），其中未絕育公貓的FIP 陽性檢出率最高（59.4%，183/308）。

表3 2018—2020 年京津冀地區(qū)FIP 確診病例的性別統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.5.3 不同年齡 統(tǒng)計(jì)結(jié)果（圖3）顯示，各個(gè)年齡段貓均可感染FCoV 甚至發(fā)展為FIP，但以2月齡到1 歲的感染率最高，1 歲以后感染率逐漸下降。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，各年齡段陽性檢出率存在差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖3 2018—2020 年京津冀地區(qū)FIP 陽性檢出率年齡段分布

3 討論

對(duì)2018—2020 年京津冀地區(qū)部分動(dòng)物醫(yī)院的貓F(tuán)CoV 疑似感染病例資料進(jìn)行回顧性調(diào)查，對(duì)收集的積液、糞便等樣本，采用RT-PCR 技術(shù)進(jìn)行FCoV 檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FCoV 陽性檢出率較高。其中，在FCoV 感染病例中，有32.6%為FECV 陽性。FECV 陽性病例也有轉(zhuǎn)變FIP 的可能，需時(shí)刻關(guān)注，提前介入治療。

FIP 在臨床上可分為濕性、干性兩種形式。前者以出現(xiàn)體腔積液為主，后者以出現(xiàn)多器官肉芽腫及眼部或神經(jīng)性病變?yōu)橹?。本研究發(fā)現(xiàn)，京津冀地區(qū)流行的FIP 臨床表現(xiàn)形式以濕性為主，主要表現(xiàn)為持續(xù)性且退熱藥物難以起效的反復(fù)發(fā)燒，以及厭食、迅速消瘦、貧血，大量液體滲出積聚于體腔，后常引起多器官受損、全身性炎癥，甚至出現(xiàn)眼部或神經(jīng)癥狀，或與其他病毒共感染，這一結(jié)果與先前報(bào)道相符合[4-5]。這可能是因?yàn)楦尚訤IP 發(fā)展相對(duì)較緩，且臨床癥狀多表現(xiàn)為肉芽腫，并不像體腔積液引起的腹圍明顯增大或呼吸困難明顯易于發(fā)現(xiàn)，一般在動(dòng)物身上發(fā)現(xiàn)有明顯積液時(shí)，才會(huì)采集滲出液樣本送檢[6]；同時(shí)，干性FIP 因臨床上很難在早期被診斷，被發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已發(fā)展為濕性FIP，這也是濕性FIP 病例較多的原因之一[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，涉及的FIP 貓大多數(shù)為濕性表現(xiàn)，僅少數(shù)出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，這驗(yàn)證了其他研究[5，8]的觀點(diǎn)，即相較于干性FIP（無積液）來說，僅少部分濕性FIP 患貓會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)異常癥狀。Séverine 等[9]表示多次進(jìn)行臨床檢查對(duì)于早期診斷FIP 非常重要，例如積液的形成或眼部病變等，因?yàn)镕IP 的臨床體征會(huì)隨著時(shí)間而改變。本研究發(fā)現(xiàn)部分FIP 確診病例存在口鼻眼炎癥，因此不可忽視這些早期臨床癥狀及變化對(duì)FIP 的提示意義，這些變化提示可能與FIP 有關(guān)。對(duì)FIP 來說，早期診斷早期介入治療，對(duì)FIP 預(yù)后十分重要。

結(jié)合時(shí)間及群間分布現(xiàn)狀及流行病學(xué)特點(diǎn)，總體上顯示出FIP 主要發(fā)生于夏秋（6—9 月）高溫季節(jié)，以8 月病例數(shù)最多。這可能是因?yàn)樵摃r(shí)期京津冀地區(qū)氣溫升高，貓活動(dòng)比較活躍密集，生育率較高，導(dǎo)致低月齡幼貓數(shù)量較多，而低月齡幼貓對(duì)FIP 較易感。這與張智文等[10]在大連市貓群中FIP 的研究結(jié)果相符，但與唐小娟等[11]在武漢市貓群中FIP 的研究結(jié)果存在差異。

FIP 多發(fā)于幼齡及青壯年（2 月齡至3 歲）、未絕育的雄性貓，尤以異國(guó)短毛貓、中華田園貓或一些暹羅、布偶等受人喜愛的流行純種貓為多，這也驗(yàn)證了Pesteanu 等[12]的觀點(diǎn)。但也有人認(rèn)為，F(xiàn)IP 的發(fā)生與絕育狀態(tài)無關(guān)。Grossman 等[13]推測(cè)，雄性貓感染率相對(duì)較高可能與雄性激素對(duì)免疫系統(tǒng)有抑制作用有關(guān)。由于本研究涉及的FIP 病例樣本尚少，無法得出動(dòng)物品種與FIP 之間的確切相關(guān)性，但Pesteanu 等[12]認(rèn)為，受人喜愛的昂貴的純種貓主人可能會(huì)更頻繁將動(dòng)物帶到寵物診所等多貓環(huán)境，且純種貓由于繁殖需求多處于多貓環(huán)境中，從而增加了FCoV 感染風(fēng)險(xiǎn)。因此，探求品種與FIP發(fā)生之間的相關(guān)性需要進(jìn)行更有針對(duì)性和更系統(tǒng)的調(diào)查。在年齡上，幼齡貓易感可能由于其免疫力相對(duì)較弱，且容易對(duì)環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)激，易受病毒侵害從而發(fā)病，亦或是經(jīng)產(chǎn)母貓或許已經(jīng)處于FCoV 感染的潛伏期從而感染。而青壯年貓可能由于FCoV 感染后，機(jī)體產(chǎn)生的細(xì)胞免疫或體液免疫應(yīng)答較強(qiáng)，產(chǎn)生抗體依賴增強(qiáng)（ADE）現(xiàn)象，促使了濕性FIP的發(fā)生，從而加速疾病進(jìn)程[14]。

本次檢測(cè)樣本均為臨床上已經(jīng)出現(xiàn)癥狀的疑似FCoV 感染貓，又缺乏京津冀地區(qū)整體的貓數(shù)量基數(shù)統(tǒng)計(jì)，因此本研究統(tǒng)計(jì)分析的FCoV 感染率和FIP 陽性檢出率較高。研究[15]表明，流浪貓感染FCoV 的概率并不高于家庭、貓舍或救助站等多貓環(huán)境的貓。本項(xiàng)研究并不清楚被調(diào)查貓的飼養(yǎng)環(huán)境及來源，因而無法證明這一點(diǎn)，也無法對(duì)患病動(dòng)物的預(yù)后結(jié)果進(jìn)行追蹤。對(duì)于FIP 的預(yù)防，應(yīng)盡量減少貓接觸多貓環(huán)境，例如將FCoV 陽性貓的幼崽盡早斷奶，同時(shí)盡量防止貓發(fā)生應(yīng)激[15]。此外，減少貓糞便和受污染環(huán)境的暴露以及定期進(jìn)行衛(wèi)生消毒管理和健康飼養(yǎng)習(xí)慣培養(yǎng)可能會(huì)有效降低FCoV的感染概率[15]。若家庭中已有FIP 病貓出現(xiàn)，不建議再引進(jìn)其他貓，避免再次感染環(huán)境中的FCoV而引發(fā)FIP。

目前該病在國(guó)內(nèi)外都沒有成熟疫苗，因此應(yīng)該深入了解病原毒力或致病力變化規(guī)律。本研究對(duì)京津冀地區(qū)的FIP 確診貓進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，或許可為FIP 的分子流行病學(xué)調(diào)查相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

在京津冀地區(qū)FCoV 感染及FIP 發(fā)生較普遍；FIP 的發(fā)生與年齡、性別、品種、絕育情況和發(fā)病季節(jié)相關(guān)性較高，主要多發(fā)于幼齡、青壯年（2 月齡至3 歲）以及純種、未絕育的雄性貓，夏秋季多發(fā)，多表現(xiàn)濕性臨床癥狀。因此，應(yīng)重視FIP 預(yù)防，密切關(guān)注貓的反復(fù)持續(xù)發(fā)熱、體腔積液、肉芽腫等常見癥狀，針對(duì)其流行特點(diǎn)制定相應(yīng)措施，盡早診斷并介入治療。