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    河南省部分屠宰場生豬肉孢子蟲感染情況調(diào)查

    2021-10-09 11:52:56楊紅玉張敏馬超鋒閆文朝
    畜牧與獸醫(yī) 2021年10期
    關(guān)鍵詞:蟲病屠宰場孢子

    楊紅玉,張敏,馬超鋒,閆文朝

    (1. 南陽農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院,河南 南陽 473000;2. 焦作市動物疫病預(yù)防控制中心,河南 焦作 454150;3. 信陽市動物疫病預(yù)防控制中心,河南 信陽 464000;4. 河南科技大學(xué)動物科技學(xué)院,河南 洛陽 471023)

    肉孢子蟲病是由肉孢子蟲(Sarcocystis)寄生于多種宿主的肌肉而引起的一種人獸共患原蟲病,豬、牛、羊和鳥類等多種動物均可感染。肉孢子蟲屬于孢子蟲綱、真球蟲目、肉孢子蟲科。肉孢子蟲屬有200多個蟲種,不同蟲種的中間宿主和終末宿主也存在差異。一些蟲種感染動物后不表現(xiàn)明顯癥狀,而有些蟲種可對中間宿主表現(xiàn)明顯致病性,引起動物貧血、發(fā)熱、嗜酸性粒細胞肌炎、流產(chǎn)或者死亡。人因食用含有蟲體的肉制品主要是豬肉而感染,出現(xiàn)發(fā)熱、惡心、嘔吐和腹瀉等癥狀[1-2]。因此,開展豬的肉孢子蟲調(diào)查和研究具有重要的經(jīng)濟價值和公共衛(wèi)生意義。

    豬是肉孢子蟲的中間宿主。根據(jù)報道,豬有3種肉孢子蟲,米氏肉孢子蟲(S.miescheriana)、豬人肉孢子蟲(S.suihominis)和豬貓肉孢子蟲(S.porcifelis),其中米氏肉孢子蟲和豬人肉孢子蟲流行最為廣泛且致病性最強,曾引起豬場肉孢子蟲病暴發(fā),給養(yǎng)豬業(yè)帶來較大危害和損失[1,3]。本研究采用劉婕等[4]開發(fā)的豬源肉孢子蟲雙重套式PCR檢測試劑盒對河南省11個地市62家屠宰場開展生豬肉孢子蟲感染情況調(diào)查,以期掌握河南省豬的肉孢子蟲感染情況,為該地區(qū)肉孢子蟲病的防控提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 樣品的采集及處理

    2018年6月—2019年10月,在河南省11個地市62個屠宰場采集膈肌樣品2 038份,每份5~8 g,登記樣品來源(年存欄大于500頭為規(guī)模場,少于500頭為散養(yǎng)戶),冷藏帶回實驗室,統(tǒng)一編號登記,置-20 ℃冰箱保存?zhèn)錂z。

    1.2 主要檢測試劑

    普通Taq聚合酶、dNTP、DL2000 DNA Marker、10×緩沖液、瓊脂糖等購自大連寶生物工程有限公司;組織細胞DNA提取試劑盒購自TaKaRa公司;豬源肉孢子蟲雙重套式PCR檢測試劑盒由河南科技大學(xué)動物科技學(xué)院動物檢疫實驗室提供。

    1.3 主要試驗儀器

    全自動樣品快速研磨儀(上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司);5424R高速臺式冷凍離心機(德國Eppendorf公司);LC-800低速離心機(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司);核酸提取儀(西安天隆科技有限公司);PCR儀(德國Biometre公司);Eppendorf 不同量程單道移液器及25~300 μL多道移液器(德國Eppendorf公司);電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)(以色列DNA公司);HH數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇金壇晶玻實驗儀器廠)等。

    1.4 引物的設(shè)計與合成

    參考文獻[4]的報道米氏肉孢子蟲和豬人肉孢子蟲特異引物(如表1),引物由生工生物工程(上海)有限公司合成。

    表1 豬源肉孢子蟲雙重套式PCR檢測引物

    1.5 檢測方法

    將采集的樣品剪成小塊放入離心管中,隨后加入液體在全自動樣品快速研磨儀上制成勻漿;采用組織細胞DNA提取試劑盒提取處理過樣品的總DNA,操作方法參照試劑盒說明書進行;將提取的總DNA作為模板,采用文獻[4]建立的肉孢子蟲雙重套式PCR方法對待檢樣品進行PCR擴增,擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳,米氏肉孢子蟲和豬人肉孢子蟲擴增產(chǎn)物的大小分別為415和591 bp。

    反應(yīng)條件:第一輪擴增條件為94 ℃ 5 min;94 ℃ 40 s,56 ℃ 40 s,72 ℃ 90 s,共35 個循環(huán);72 ℃ 10 min。第二輪PCR 擴增條件為94 ℃ 5 min;94 ℃ 40 s,58 ℃ 40 s,72 ℃ 40 s,共35個循環(huán);72 ℃ 10 min。

    1.6 檢測數(shù)據(jù)分析

    結(jié)果采用SPSS 19.0軟件進行分析,分別對不同地區(qū)屠宰場肉孢子蟲場陽性率和樣品陽性率、不同規(guī)模豬群肉孢子蟲陽性率、不同季節(jié)屠宰場肉孢子蟲陽性率進行χ2檢驗分析差異顯著性,P<0.05時差異顯著,P<0.01差異極顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 河南省屠宰場肉孢子蟲總體感染情況

    從圖1可以看到,本次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的只有米氏肉孢子蟲(415 bp)。本次檢測調(diào)查河南省11個地市的62個屠宰場,肉孢子蟲陽性場37個,平均場陽性率為59.7%,最高的為駐馬店、商丘和鄭州,均為66.7%,其次為信陽,為62.5%;場陽性率最低的為安陽和漯河,陽性率均為33.3%。2 038份樣品的平均陽性率為29.4%,南陽、駐馬店、信陽、鄭州、周口和新鄉(xiāng)樣品陽性率均超過30%,周口樣品陽性率最高,為37.1%;陽性率最低為漯河和安陽,分別為為10.5%和11.1%(見表2)。χ2檢驗分析表明,河南不同地區(qū)屠宰場肉孢子蟲場陽性率差異不顯著(P>0.05),不同地區(qū)間樣品陽性率均差異極顯著(P<0.01)。

    表2 樣品來源及抗體陽性率

    M.DL2000 DNA Marker;1~6.被檢樣品;7.陽性對照;8.陰性對照

    2.2 河南省不同規(guī)模豬場肉孢子蟲感染情況

    本次調(diào)查根據(jù)豬的來源,分為規(guī)模場(存欄500頭以上)和散養(yǎng)戶(存欄500頭以下)。從表3可以看出,散養(yǎng)戶的肉孢子蟲陽性率(32.3%)略高于規(guī)模場(27.7%)。χ2檢驗分析表明,不同規(guī)模豬場肉孢子蟲陽性率差異顯著(P<0.05)。

    表3 不同場點類型豬場肉孢子蟲感染率

    2.3 河南省屠宰場不同季節(jié)豬肉孢子蟲感染情況

    本次屠宰場生豬肉孢子蟲感染調(diào)查,每個季節(jié)均有陽性檢出,其中,春季最高,達到33.8%,冬季最低為26.1%(見表4)。χ2檢驗分析表明,不同季節(jié)豬群肉孢子蟲陽性率差異不顯著(P>0.05)。

    表4 屠宰場不同季節(jié)肉孢子蟲感染率

    3 討論

    肉孢子蟲病是一種重要的人獸共患寄生蟲病,感染后會對人體健康造成一定的危害。牛、羊、豬等動物是肉孢子蟲傳播的中間宿主,與人類密切接觸,因此查清肉孢子蟲的感染狀況,有重要公共衛(wèi)生意義。豬肉因其較高的營養(yǎng)價值而為人們所喜愛,我國每人年平均豬肉消費量為27.1 kg(2019年),豬肉是國人餐桌的主要肉類。2019全年,河南省生豬出欄量達3 170萬頭,對屠宰生豬開展肉孢子蟲感染調(diào)查有重要的公共衛(wèi)生意義。本次共調(diào)查11個地區(qū)的62個屠宰場,場陽性率為59.7%,樣品陽性率為29.4%;這與曹謙[5]調(diào)查的青海同仁縣隆務(wù)地區(qū)豬感染率83.15%,馮成蘭等[6]調(diào)查的青海共和地區(qū)屠宰生豬感染率61.91%,周偉業(yè)[7]調(diào)查的青海冷湖地區(qū)的感染率47.34%,王榮菊等[8]調(diào)查的青海西寧屠宰場豬感染率44%相比,都要低;與薛瑞等[9]2018年調(diào)查的河南洛陽豬源肉孢子蟲感染率26.8%接近;遠高于李明偉等[10]對湛江市豬肉孢子蟲調(diào)查的感染率2.05%,張浩吉等[11]對廣州地區(qū)豬肉孢子蟲調(diào)查的感染率0.7%,李小軍等[12]對河南豫北地區(qū)豬肉孢子蟲調(diào)查的感染率0.238%。需要說明的是以上調(diào)查所采用的方法均是鏡檢壓片法,檢測結(jié)果靠主觀判斷,與檢測者水平有較大關(guān)系,存在一定誤差。周望平等[13]采用ELISA 方法對湖南地區(qū)開展豬肉孢子蟲病血清學(xué)調(diào)查,感染率為4.4%,低于本次調(diào)查的感染率。本次調(diào)查肉孢子蟲感染情況采用的雙重套式PCR檢測方法,具有敏感、特異和快捷等優(yōu)點,可以實現(xiàn)對豬肌肉組織和血液等樣品中肉孢子蟲的快速、準(zhǔn)確檢測,可以為豬肉孢子蟲病診斷和流行病學(xué)調(diào)查提供高效的檢測手段和方法,可以大范圍推廣應(yīng)用。

    本次調(diào)查將根據(jù)屠宰場豬的來源,將豬群劃分為規(guī)模場和散養(yǎng)戶,均有肉孢子蟲陽性檢出,說明不同場點豬場均有感染,分析散養(yǎng)戶陽性率高于規(guī)模場可能與規(guī)模場大多集約化養(yǎng)殖,有效切斷了中間宿主與終末宿主的聯(lián)系有關(guān)。從本次調(diào)查結(jié)果來看,河南省豬群一年四季均有肉孢子蟲感染,但是不同季節(jié)感染率有差異,春季感染率最高,夏季、秋季和冬季感染率較接近,其中冬季感染率最低。當(dāng)前還沒有特效藥物治療肉孢子蟲病,防治肉孢子蟲病主要采取綜合性防控措施切斷傳播途徑:一是豬場禁止飼養(yǎng)犬貓,犬貓作為肉孢子蟲的終末宿主,在肉孢子蟲的感染中起到重要作用;二是病死動物及時處理,禁止用生肉或者下水飼喂犬貓等動物。

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