183株沙門菌屬細菌的血清型分布、分子分型特征及耐藥性分析

石紅，王毅

寶雞市中心醫(yī)院檢驗科，陜西 寶雞 721008

沙門菌屬細菌是寄生在動物和人類腸道中的常見菌種，沙門菌屬細菌感染為臨床常見的食源性疾病和人畜共患病，可引起多種臨床表現(xiàn)，嚴重威脅機體健康安全[1]。沙門菌屬細菌的型別較多，抗原結(jié)構(gòu)和血清型較復(fù)雜，相關(guān)研究報道，腹瀉患者不同血清型的沙門菌屬細菌的致病力有明顯差異[2]。抗生素是臨床治療沙門菌屬細菌感染的常用手段，但近年來隨著抗生素的濫用，沙門菌屬細菌的耐藥率不斷增加，增加臨床治療難度[3]。朱德永等[4]研究也表明，目前沙門菌屬細菌的多重耐藥問題較嚴重，其對三代頭孢藥物和環(huán)丙沙星的敏感性較低。臨床加強沙門菌屬細菌的藥敏監(jiān)測對此類細菌耐藥性傳播的抑制有重要影響，且可指導(dǎo)臨床用藥。本研究主要分析183 株沙門菌屬細菌的血清型分布、分子分型特征和耐藥性情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料183株沙門菌屬細菌來自寶雞市中心醫(yī)院2016年2月至2020年10月門診及住院患者的臨床送檢標本，其中血液標本50 例，大便標本127例，尿液標本4 例，其他引流液標本2 例；其中女性89例，男性94例；年齡：≤10歲4例，11～20歲9例，21～30歲65例，31～40歲31例，41～50歲25例，51～60歲42例，＞60歲7例。183例患者年齡、性別信息均齊全。

1.2 方法

1.2.1 細菌鑒定及血清型分型將所有患者送檢標本進行培養(yǎng)，取無菌棉拭子蘸取可疑部分并立即送至實驗室。用亞硝酸鹽增殖液進行接種，37℃溫度下孵化24 h，并同時接種麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和HE 瓊脂培養(yǎng)基。36℃、24 h后查看細菌生長狀態(tài)，通過初步生化、細菌分離得到沙門菌屬，并進行分型。

1.2.2 藥物敏感性試驗全部試驗菌株均通過紙片擴散法進行體外藥物敏感性試驗。首先制備接種菌液，制作接種平板，貼紙片并賦育。培養(yǎng)后將平板取出，用游標卡尺測定抑菌環(huán)直徑，參照相關(guān)標準評價菌株對常見抗生素的敏感性結(jié)果[5]。

1.2.3 PFGE 分型首先進行膠塊制備，再裂解沙門菌屬細菌，洗膠塊，膠塊內(nèi)DNA酶切、加樣、電泳、染色、脫色和拍攝圖像。將拍攝圖像上傳至對應(yīng)數(shù)據(jù)庫軟件，進行處理和分析。以國際標準菌株H9218作為標準分子量進行校準，識別、標記條帶位置。用非加權(quán)配對算術(shù)平均法進行條帶的聚類分析[6]。

2 結(jié)果

2.1 183 株沙門菌屬細菌血清型分布183 株沙門菌屬細菌中鼠傷寒沙門菌為最常見血清型，其次為腸炎沙門菌，見表1。

表1 183株沙門菌屬細菌血清型分布

2.2 主要沙門菌屬細菌分子分型特征對183株沙門菌屬細菌前兩種血清型鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌進行PFGE分型。兩種血清型菌株共168株，參照100%相似度，119株鼠傷寒沙門菌可見81個PFGE型，29株腸炎沙門菌可見21個PFGE型。

2.3 183株沙門菌屬細菌耐藥性分析沙門菌屬細菌對四環(huán)素、頭孢哌酮、鏈霉素、萘啶酸、氨芐西林表現(xiàn)出耐藥，對卡那霉素、頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢曲松、阿莫西林/克拉維素的耐藥率較低，且全部菌株對環(huán)丙沙星、頭孢西丁、亞胺培南均敏感，見表2。

3 討論

沙門菌屬細菌的宿主廣泛，主要在動物腸道內(nèi)分布，少部分沙門菌屬細菌對宿主具有選擇性，其菌型較多，對動物及人均有程度不一的致病性，近年來沙門菌屬細菌感染已成為臨床嚴重的公共衛(wèi)生問題[7]。

血清分型為沙門菌屬細菌的主要表型分型方法，其操作簡單快速，可重復(fù)性高。沙門菌屬細菌的血清分型復(fù)雜且類別較多，腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌為沙門菌感染的最常見病原。其中鼠傷寒沙門氏菌的感染性強，室溫下能夠快速繁殖，致病速度極快，是胃腸炎及敗血癥的主要病原之一[8-9]。腸炎沙門菌為食物中毒事件檢出率最高的沙門菌血清型，可從雞群中分離[10]。另外副傷寒沙門菌、傷寒沙門菌感染則可引起腸熱癥。本研究中183株沙門菌屬細菌感染的最常見血清型為鼠傷寒沙門氏菌，另外腸炎沙門菌也是其優(yōu)勢血清型，此結(jié)果與臨床報道結(jié)果相符[11]。其次部分患者檢出副傷寒沙門菌、傷寒沙門菌、甲型副傷寒沙門菌、斯坦利沙門菌，德爾卑沙門菌等血清型。但血清分型存在高消耗、低產(chǎn)出等不足，且易和大腸埃希菌及其他細菌出現(xiàn)交叉反應(yīng)，此外血清分型的分辨力有限。另有研究報道，單一血清表型分型對傳染疾病跨地區(qū)傳播的追蹤、調(diào)查價值有限[12]。生物分型、噬菌體分型等表型方法的技術(shù)難度高，區(qū)分能力較低。

近年來沙門菌屬細菌的分子分型技術(shù)不斷改善，具有高通量、可重復(fù)性好和高靈敏度等特點，對流行病的調(diào)查有重要價值。PFGE目前已用于多種細菌分子生物學(xué)分型監(jiān)測中，其通過限制性內(nèi)切酶將菌株DNA 消化，再經(jīng)PFGE 進行分離，與染色體限制性內(nèi)切酶圖譜對比，對細菌分型進行鑒定[13]。臨床研究指出，PFEG 能夠反映DNA 序列的不同變化，對細菌性傳染病的防治、追蹤有重要價值[14]。既往研究表明，鼠傷寒沙門菌PFGE 帶型表現(xiàn)出多態(tài)性分布[15-16]。本研究結(jié)果也顯示，按照100%相似度，鼠傷寒沙門菌的PFGE 型別較多，無明顯優(yōu)勢帶型。另外其余沙門氏菌細菌的PFGE型別也較多，呈散在分布。

抗生素是沙門菌屬細菌感染者的常用藥物，其中三代頭孢菌素和喹諾酮類藥物為其首選用藥[17]。但有文獻指出，部分鼠傷寒沙門氏菌感染者對三代頭孢類藥物出現(xiàn)耐藥[18]。近年來隨著抗生素藥物的濫用和廣泛應(yīng)用，沙門菌屬細菌的耐藥問題較突出。王月等[19]研究表示，隨著沙門菌屬細菌耐藥性的不斷增加，可相應(yīng)增加抗生素的種類、用藥量和療程。本研究結(jié)果顯示，183 株沙門菌屬細菌對四環(huán)素、頭孢哌酮、鏈霉素、萘啶酸、氨芐西林表現(xiàn)出耐藥，此類藥物均為臨床常見抗生素，證實沙門菌屬細菌的耐藥性問題較嚴重。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，沙門菌屬細菌對萘啶酸耐藥性高可能相應(yīng)增加菌株對環(huán)丙沙星的耐藥性，從而影響臨床用藥的選擇[20]。但本研究中，全部菌株對環(huán)丙沙星均敏感，但未排出潛在的環(huán)丙沙星耐藥情況。另外本研究中沙門菌屬細菌對卡那霉素、頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢曲松、阿莫西林/克拉維素的耐藥率較低，且全部菌株對頭孢西丁、亞胺培南均敏感。提示三代頭孢菌素和喹諾酮類藥物仍可作為沙門菌屬細菌感染經(jīng)驗用藥，但建議臨床加強抗生素應(yīng)用的監(jiān)控，以減少耐藥菌株的發(fā)生，并有效預(yù)防沙門菌屬細菌感染，控制疾病流行。

綜上所述，沙門菌屬細菌的血清型分布和分子分型較復(fù)雜，耐藥現(xiàn)象較嚴峻，臨床需進一步加強對抗生素用藥的監(jiān)測。