CK2β、P16、HPV L-1 殼蛋白聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸癌的價(jià)值

楊淑萍，姜凌

（1.洛陽市婦女兒童醫(yī)療保健中心婦產(chǎn)科，河南 洛陽 471000；2.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 洛陽 471000）

部分地區(qū)的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌的發(fā)病率可超過485/10 萬人左右[1]。在合并有相關(guān)高危因素的人群中，宮頸癌的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升。臨床上的觀察分析研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者的5年生存率不足55%，其遠(yuǎn)期病死率也明顯的上升[2]。對(duì)于宮頸癌的早期診斷具有重要的意義，其能夠在疾病的診療及早期手術(shù)干預(yù)方面發(fā)揮作用。生物學(xué)指標(biāo)的研究，可以為宮頸癌的診斷提供參考。蛋白激酶CK2β的表達(dá)，能夠通過提高其蛋白激酶的激活程度,增加宮頸上皮細(xì)胞的異常增殖能力[3]；P16蛋白的表達(dá)上升，能夠提高癌細(xì)胞內(nèi)腫瘤信號(hào)通路的激活，促進(jìn)下游多種病理性效應(yīng)因子的上調(diào)，進(jìn)而提高宮頸上皮細(xì)胞的異常裂變的風(fēng)險(xiǎn)[4]；人乳頭瘤病毒殼蛋白（HPVL-1）的表達(dá)，能夠通過誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，提高T 淋巴細(xì)胞的激活，增強(qiáng)其對(duì)于腫瘤細(xì)胞的免疫殺傷性作用，從而降低癌細(xì)胞的早期發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[5]。為了揭示CK2β、P16、HPV L-1的表達(dá)與宮頸癌的關(guān)系，從而為臨床上宮頸癌的診療提供理論方面的參考，本次研究選取2015年1 月至2017年12 月我院確診的80例宮頸癌患者作為研究對(duì)象，探討了CK2β、P16、HPV L-1的表達(dá)及其診斷學(xué)價(jià)值，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1 月至2017年12 月我院確診的80例宮頸癌患者作為研究對(duì)象（病例組）、選取80例宮頸瘤變患者作為對(duì)照組。

病例組，年齡38～65 歲，平均47.0±8.3 歲，病理學(xué)TNM 分期：Ⅰ期49例、Ⅱ期26例、Ⅲ期5例,分化程度：高分化17例、中分化44例、低分化19例；病灶直徑≥4cm 38例、<4cm 42例。對(duì)照組，年齡33～58 歲，平均45.7±9.0 歲，CINⅠ期25例、CINⅡ期24例、CINⅢ期31例。兩組患者的年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn):⑴宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[6]；⑵經(jīng)病理學(xué)檢查確診；⑶獲取標(biāo)本前患者未接受放化療、免疫學(xué)治療；⑷患者各項(xiàng)資料保存完整；⑸本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴伴有其他部位惡性腫瘤；⑵轉(zhuǎn)移性宮頸癌患者；⑶既往具有宮頸手術(shù)史；⑷資料缺失，無法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析

1.2 免疫組化檢測(cè)方法 石蠟包埋，連續(xù)性切片厚度3um，60℃烤片60min，常規(guī)脫水后，采用EDTA進(jìn)行抗原修復(fù)，加入10μl 蒸餾水，加入10%過氧化氫5il，室溫下孵育30min,磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3 次*3min,加入CK2β、P16、HPV L-1蛋白的單克隆抗體（1：1000 購自羅氏檢測(cè)公司），37℃孵育60min，PBS洗滌3 次*3min，加 入HRP 標(biāo)記的CK2β、P16、HPV L-1蛋白二抗（1：2000 購自羅氏公司），37℃孵育20min，PBS 洗滌3 次*3min，加入DAB 后，PBS 沖洗和復(fù)染，脫水后在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3 結(jié)果分析 免疫組化結(jié)果判定：CK2β 主要定位于細(xì)胞質(zhì)、P16 主要定位于細(xì)胞漿及細(xì)胞核、HPV L-1蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，⑴根據(jù)著色強(qiáng)度：0 分為無色、1分為淡黃色、2 分為棕黃色、3 分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1 分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2 分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3 分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4 分，兩種積分相乘總分<3 分為陰性、≧3分為陽性?？偡?3 分：“-”表達(dá)；為3～5 分，“+”表達(dá)；為6～9 分，“++”表達(dá)；>9 分，“+++”表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究的數(shù)據(jù)收集后，采用SPSS16.0 進(jìn)行整理、分析；采用對(duì)計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，兩組間均數(shù)比較應(yīng)用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)；P 值<0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的宮頸組織標(biāo)本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白陽性率比較 病例組宮頸組織中的CK2β蛋白陽性表達(dá)率67.50%、P16 陽性表達(dá)率85.00%顯著的高于對(duì)照組宮頸組織中的16.25%、42.50%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；病例組宮頸組織中的HPV L-1蛋白陽性表達(dá)率15.00%低于對(duì)照組宮頸組織中的36.25%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；見表1。

表1 宮頸組織標(biāo)本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白陽性率比[n（%）]

2.2 宮頸組織標(biāo)本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白陽性表達(dá)鑒別診斷宮頸癌的價(jià)值 以病理學(xué)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，CK2β、P16、HPV L-1 鑒別診斷宮頸癌的靈敏度為、特異度為、漏診率為、誤診率為結(jié)果見表4；CK2β、P16、HPV L-1聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷宮頸癌的靈敏度為96.25%、特異度為63.75%、漏診率為3.75%、誤診率為36.25%；見表2、表3、表4。

表2 CK2β、P16、HPV L-1蛋白陽性表達(dá)鑒別診斷宮頸癌與病理學(xué)結(jié)果比較

表3 CK2β、P16、HPV L-1蛋白聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷宮頸癌與病理學(xué)結(jié)果比較

表4 CK2β、P16、HPV L-1蛋白單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷宮頸癌的價(jià)值

3 討論

宮頸高危型HPV 病毒感染、多次人工流產(chǎn)或者過早性生活，均能夠促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生，在合并有HPV16、HPV18 亞型病毒感染的患者中，宮頸癌的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升[7]。長期的臨床觀察發(fā)現(xiàn),宮頸癌患者遠(yuǎn)期致殘率可超過35%以上,同時(shí)宮頸癌患者的無瘤生存時(shí)間不足36 個(gè)月[8,9]?，F(xiàn)階段缺乏對(duì)于宮頸癌診斷的生物學(xué)標(biāo)志物指標(biāo),雖然陰道鏡下活檢或者宮頸診斷性錐形切除術(shù),能夠在宮頸癌的診斷過程中發(fā)揮作用。但相關(guān)檢查均屬于有創(chuàng)檢查，耗時(shí)較長，檢查費(fèi)用相對(duì)較高，患者的接受程度差異較大。而本次研究通過對(duì)于宮頸癌患者病灶組織中CK2β、P16、HPV L-1的表達(dá)分析研究，一方面能夠深入揭示宮頸癌的病情進(jìn)展機(jī)理，另一方面能夠?yàn)榕R床上宮頸癌的診療提供新的參考性指標(biāo)。

CK2β 是蛋白激酶相關(guān)因子，其能夠通過提高細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶的釋放速度,增加癌細(xì)胞早期發(fā)生過程中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控異常風(fēng)險(xiǎn)?；A(chǔ)方面的研究顯示，CK2β 能夠通過結(jié)合癌細(xì)胞膜表面糖蛋白，提高癌細(xì)胞的浸潤和粘附能力，增加癌細(xì)胞突破基底膜組織的風(fēng)險(xiǎn)；P16 作為腫瘤相關(guān)蛋白，其對(duì)于癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子的激活，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞核DNA 增殖速度的提示[10]。同時(shí)P16蛋白上調(diào)能夠誘導(dǎo)下NF-KB的激活，增加多種腫瘤信號(hào)同的激活風(fēng)險(xiǎn)[11]；HPV L-1 是HPV 病毒殼表面蛋白，其能夠特異性誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞的激活，增加抗原提呈細(xì)胞的激活程度，從而誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)[12]。部分研究者探討了P16蛋白在宮頸癌患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為在宮頸癌患者中，P16蛋白的表達(dá)陽性率明顯上升[13]，但缺乏對(duì)于CK2β、HPV L-1的表達(dá)分析研究。

本次研究通過免疫組化探討了CK2β、P16、HPV L-1在宮頸癌病灶組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在病例組患者中，CK2β、P16的表達(dá)陽性率明顯的上升，高于對(duì)照組宮頸病變患者，HPV L-1的表達(dá)陽性率明顯下降，低于對(duì)照組宮頸病變患者，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異較為顯著，提示了CK2β、P16、HPV L-1的異常表達(dá)均能夠影響到宮頸癌的發(fā)生過程。分析其具體的原因，考慮由于CK2β、P16、HPV L-1的下列幾個(gè)方面的改變有關(guān)[14]：⑴CK2β的表達(dá)上升，能夠提高宮頸柱狀上皮細(xì)胞鱗狀上皮化的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致上皮細(xì)胞異常分裂的調(diào)控異常；⑵P16蛋白的表達(dá)上升，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)MAPK 或者NF-KB通路的激活，增加了柱狀上皮細(xì)胞周期調(diào)控異常的風(fēng)險(xiǎn)；⑶HPV L-1的表達(dá)下降,失去了其對(duì)于CD4+T 淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)作用，促進(jìn)了免疫逃逸的發(fā)生。陳曉露等[15]研究者也發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌患者中，CK2β蛋白的表達(dá)陽性率上升30%以上，在具有宮旁組織浸潤或者盆腔內(nèi)臟器轉(zhuǎn)移的患者中，CK2β蛋白的表達(dá)陽性率可進(jìn)一步的上升。診斷學(xué)方面的分析可見，以最終的病理學(xué)診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)，可以發(fā)現(xiàn)CK2β、P16、HPV L-1在單獨(dú)診斷宮頸癌的過程中均具有一定的參考價(jià)值，但其中HPV L-1的診斷靈敏度相對(duì)較低，這主要由于HPV L-1蛋白的檢出敏感性較低有關(guān)，而CK2β、P16 雖然能夠在宮頸癌的診斷過程中發(fā)揮作用，但其仍然存在明顯漏診或者誤診的風(fēng)險(xiǎn)。通過聯(lián)合CK2β、P16、HPV L-1 進(jìn)行診斷，可以顯著提高宮頸癌的診斷效能，臨床上對(duì)于拒絕行陰道鏡或者宮頸錐切活檢的患者，必要時(shí)可以通過聯(lián)合CK2β、P16、HPV L-1，進(jìn)而輔助診斷宮頸癌。

綜上所述，在宮頸癌患者中，CK2β、P16的表達(dá)明顯上升，而HPV L-1的表達(dá)明顯下降，同時(shí)CK2β、P16、HPV L-1在聯(lián)合診斷宮頸癌的過程中具有一定的參考價(jià)值。