超高效液相色譜法在食品四環(huán)素類藥物殘留檢測中的應(yīng)用

李翠萍

摘 要：四環(huán)素類藥物殘留會危害人體健康，因此需要一種高效靈敏、快速準(zhǔn)確的檢測技術(shù)對其含量進(jìn)行嚴(yán)控。超高效液相色譜技術(shù)擁有靈敏度較高、溶劑使用量較少、分析速度較快、分離效率高等優(yōu)點(diǎn)，在四環(huán)素類藥物殘留檢測中的應(yīng)用越來越廣泛。本文簡單介紹了四環(huán)素類藥物殘留和超高效液相色譜技術(shù)，簡析了超高效液相色譜法在四環(huán)素類藥物殘留檢測中的應(yīng)用，以期為檢測四環(huán)素類藥物殘留提供一些參考。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜法;四環(huán)素類藥物;殘留;應(yīng)用

隨著社會的快速發(fā)展，人們生活水平逐漸提高，食品安全問題越來越受到重視。一些養(yǎng)殖戶受利益驅(qū)使，非法使用四環(huán)素類獸藥，導(dǎo)致四環(huán)素類獸藥殘留問題日益嚴(yán)重，四環(huán)素類獸藥殘留會嚴(yán)重傷害人們的健康。

1 四環(huán)素類藥物及四環(huán)素類藥物殘留概述

四環(huán)素類抗生素作為一種抑菌性廣譜抗生素，被廣泛用于防治革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、立克次氏體、支原體和衣原體等所致的疾病，其不良反應(yīng)主要有消化道反應(yīng)、肝損害、腎損害、影響骨骼及牙齒的發(fā)育、局部刺激、過敏反應(yīng)、腸道菌群失調(diào)及與金屬離子形成絡(luò)合物等。

隨著人們生活水平逐漸提高，對動物源食品的質(zhì)量要求也隨之提高。近年來，動物源食品四環(huán)素類抗生素殘留問題逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。有研究表明四環(huán)素類抗生素可防治動物疾病，提高生產(chǎn)效率，改善畜產(chǎn)品的質(zhì)量。然而，由于一些養(yǎng)殖人員缺乏科學(xué)知識，一味追求經(jīng)濟(jì)利益，導(dǎo)致畜牧業(yè)中四環(huán)素類抗生素濫用現(xiàn)象普遍存在。濫用四環(huán)素類抗生素造成有害物質(zhì)在動物源食品中產(chǎn)生殘留，對人體健康造成危害，損害生態(tài)環(huán)境，影響畜牧業(yè)的發(fā)展。目前，檢測四環(huán)素類抗生素殘留的方法有理化檢測法、免疫檢測法和微生物法等[1]。理化檢測法主要有超高效液相色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和高效毛細(xì)管電泳法等[2-5]。由于超高效液相色譜法具有高分離度、高分析速度、高靈敏度、易與質(zhì)譜串聯(lián)和方法轉(zhuǎn)換簡便等優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于四環(huán)素類藥物殘留的分析檢測。

2 超高效液相色譜法概述

超高效液相色譜是一種基于小顆粒填料的液相色譜技術(shù)，其原理與高效液相色譜法大致相同，具有以下特點(diǎn)。①高性能、小顆粒微粒固定相。常見高效液相色譜的色譜柱如十八烷基硅膠鍵合柱的粒徑為5 μm，而超高效液相色譜的色譜柱粒徑可達(dá)3.5 μm，甚至1.7 μm，更加有利于物質(zhì)的分離。②超高壓輸液泵。由于超高效液相色譜的色譜柱粒徑減小，使壓力成倍增大。因此，超高效液相色譜的輸液泵也相應(yīng)改成超高壓輸液泵。③檢測器靈敏度高，并且采樣速度很快。④使用低交叉污染、低擴(kuò)散自動進(jìn)樣器，并且配備了壓力輔助進(jìn)樣技術(shù)和針內(nèi)進(jìn)樣探頭。⑤優(yōu)化設(shè)計(jì)儀器整體系統(tǒng)。色譜工作站安裝有多種平臺軟件，使超高效液相色譜與高效液相色譜分析方法可自動轉(zhuǎn)換。

與傳統(tǒng)的高效液相色譜法相比，超高效液相色譜法的速度是高效液相色譜法的9倍，靈敏度是高效液相色譜法的3倍，分離度是高效液相色譜法的1.7倍，減少了溶劑使用量，縮短了分析時間，降低了分析成本。目前，超高效液相色譜技術(shù)主要應(yīng)用于藥物分析、食品分析、生化分析、環(huán)境分析等領(lǐng)域，尤其是中藥研究領(lǐng)域，超高效液相色譜技術(shù)可以解決中藥組分復(fù)雜、分離困難等問題。

3 超高效液相色譜法在食品四環(huán)素類藥物殘留中的應(yīng)用

陳艷等[6]利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對鹵肉制品中的四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素、土霉素等四環(huán)素類藥物殘留進(jìn)行檢測并建立了相關(guān)方法。結(jié)果表明，在濃度0.1～

10 μg/mL，四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素、土霉均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)大于0.99。在50 μg/kg、100 μg/kg、200 μg/kg3個濃度的添加水平下，四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素、土霉素的平均回收率在76.7%～103.7%，相對平均偏差為3.2%～4.6%。采用此方法測定了樂山地區(qū)220份市售鹵肉制品中的四環(huán)素類藥物殘留量，并對測定結(jié)果進(jìn)行了質(zhì)量安全性分析，結(jié)果顯示四環(huán)素類藥物的含量均在國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)。說明該方法選擇性強(qiáng)、重現(xiàn)性好且靈敏度高，可用于測定市售鹵肉制品中的四環(huán)素類藥物殘留。皮璟漁等[7]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對鴨蛋中的四環(huán)素、二甲胺四環(huán)素、鹽酸金霉素、去甲基金霉素、土霉素、甲烯土霉素和多西環(huán)素等7種四環(huán)素類藥物殘留進(jìn)行檢測分析。結(jié)果表明，在10～100 ng/mL濃度范圍內(nèi)，7種四環(huán)素類藥物殘留具有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.2～1 μg/kg，平均加樣回收率為84.3%～94.1%，精密度為0.9%～2.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～7.7%。表明該方法可用于檢測分析鴨蛋中的四環(huán)素類藥物殘留。劉柏林等[8]借用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對禽類食品中的4種四環(huán)素與11種喹諾酮獸藥殘留進(jìn)行了測定分析。結(jié)果表明，在0.1～50.0 μg/L濃度范圍內(nèi)，15種獸藥殘留線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.992 7，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.51%～15.3%，平均回收率在60.6%～117.9%，檢出限達(dá)到0.05～0.20 μg/kg。表明該方法適合于檢測分析禽類食品中多種四環(huán)素與喹諾酮獸藥殘留。采用此方法對安徽省市售的2016—2018年雞蛋和雞肉樣品中四環(huán)素與喹諾酮?dú)埩暨M(jìn)行了檢測，并對其食品安全指數(shù)進(jìn)行了評估，發(fā)現(xiàn)雞蛋和雞肉中四環(huán)素類和喹諾酮類國際食品標(biāo)準(zhǔn)均值都小于1，說明其膳食風(fēng)險較低。方靈等[9]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定分析了牛奶中四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺類、氯霉素類和喹諾酮類5類38種抗生素藥物殘留。結(jié)果表明，在各自的線性濃度范圍內(nèi)，38種抗生素具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，在3個（1.0 μg/kg、5.0 μg/kg、10.0 μg/kg）加標(biāo)水平下，平均回收率在70.7%～94.9%，定量下限達(dá)到0.10～1.0 μg/kg，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.0%～9.4%。說明該方法重現(xiàn)性好、靈敏度高且操作簡單，能滿足牛奶中多種抗生素藥物殘留的檢測需求。石春紅[10]等采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對動物源性食品中四環(huán)素、土霉素等4種四環(huán)素類藥物殘留量進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，在5～200 μg/L濃度范圍內(nèi)，4種四環(huán)素類藥物均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.995，平均回收率在92.7%～107.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8%，檢出限達(dá)2.5 μg/kg。說明本方法靈敏度高、重現(xiàn)性好、簡單快速，適合于快速測定動物源性食品中四環(huán)素類藥物殘留。

4 結(jié)語

超高效液相色譜法具有分離度高、分析速度快、方法轉(zhuǎn)換簡便、靈敏度高和易與質(zhì)譜串聯(lián)等優(yōu)勢，促進(jìn)了食品獸藥殘留研究領(lǐng)域的發(fā)展。由于食品種類繁多，成分復(fù)雜，所以分離比較困難，而這些問題可以通過超高效液相色譜法得到解決。在同樣的檢測條件下，超高效液相色譜儀的分辨率更高，能檢測到更多色譜峰，并且超高效液相色譜儀能分離的色譜峰比高效液相色譜儀多出一倍，但是檢測過程中由于儀器內(nèi)部的壓力過大，也導(dǎo)致其產(chǎn)生一些問題，如儀器老化速度加快，泵的使用壽命相對降低等。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，這些問題會逐漸得到解決，未來超高效液相色譜技術(shù)會越來越普及，得到質(zhì)的飛躍和提升。

參考文獻(xiàn)

[1]林嫚婷，蘇亞霞，胡漢昆.食品中抗生素殘留的預(yù)處理及檢測方法研究進(jìn)展[J].食品與藥品，2020（4）：304-309.

[2]田紅靜，劉通，王秀娟，等.動物源性食品中抗生素殘留的快速檢測方法[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2020（11）：3391-3397.

[3]吳長青，馮俊，沈浥，等.動物源性食品中抗生素殘留的分類及檢測方法的研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2019（21）：7126-7132.

[4]張婧，貢松松，吳劍平，等.超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速篩查與確證豬尿中74種抗生素及其他化合物[J].分析測試學(xué)報(bào)，2019（8）：905-912.

[5]王志昱，張桂芳，張曉瑜，等.QuEChERS-高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法同時檢測雞胗和雞肝中15種喹諾酮類和四環(huán)素類抗生素[J].肉類研究，2020（3）：51-57.

[6]陳艷，黃代文.超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定鹵肉制品中四環(huán)素類藥物殘留及分析[J].肉類工業(yè)，2020（8）：37-42.

[7]皮璟漁，吳迪，周臨超，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定鴨蛋中7種四環(huán)素類藥物殘留[J].分析試驗(yàn)室，2020（9）：1062-1065.

[8]劉柏林，謝繼安，趙紫微，等.同位素內(nèi)標(biāo)-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定禽類食品中喹諾酮與四環(huán)素殘留量[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2020（20）：7329-7339.

[9]方靈，韋航，黃彪，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定牛奶中38種抗生素殘留[J].分析測試學(xué)報(bào)，2019（6）：681-686.

[10]石春紅，曹向英，曹美萍.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析動物源性食品中4種四環(huán)素類藥物殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2019（10）：3126-3131.