HOTAIR表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后關(guān)系的分析

王柏清,王玨磊,張寶芹,李甜甜,王 超,孫光斌

王柏清,王玨磊,張寶芹,李甜甜,王超,孫光斌,天津市第五中心醫(yī)院消化科 天津市 300450

0 引言

HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)由2158個(gè)核苷酸組成,可以與PRC2結(jié)合,導(dǎo)致組蛋白甲基化和轉(zhuǎn)錄沉默.研究發(fā)現(xiàn),HOTAIR在各種癌癥中表達(dá)升高,并與腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān)[1-5].Kogo等[6]通過定量PCR檢測了100例結(jié)直腸癌的患者,結(jié)果表明,HOTAIR在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)水平高于癌旁正常組織,HOTAIR高表達(dá)與大腸癌肝轉(zhuǎn)移的密切相關(guān),也為結(jié)直腸癌的靶向治療提供了新的思路.但由于各個(gè)研究樣本量較小,說服力不強(qiáng),因此本研究采用Meta分析的方法探討HOTAIR表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系,以期對臨床診治提供指導(dǎo).

1 材料和方法

1.1 材料 通過對PubMed、Medline、CNKI、CBM和Cochrane圖書館的搜索,檢索2013-01/2020-12,有關(guān)HOTAIR表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后關(guān)系的文獻(xiàn).兩位評價(jià)員獨(dú)立評估被收錄文章的質(zhì)量并提取數(shù)據(jù),計(jì)算總生存期(overall survival,OS)的危險(xiǎn)比以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(lymph node metastasis,LNM)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(distant metastasis,DM),以評估關(guān)聯(lián)強(qiáng)度.分別以“HOTAIR”,“HOX transcript antisense RNA”,“colorectal cancer”,“colorectal carcinoma”為主題詞和自由詞,檢索PubMed、Medline、Cochrane圖書館;以“HOTAIR”,“HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA”,“結(jié)直腸癌”為檢索詞,檢索知網(wǎng)、萬方、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫,參考文獻(xiàn)作為補(bǔ)充.

1.2 方法

1.2.1 納入排除標(biāo)準(zhǔn):納入標(biāo)準(zhǔn):收入文獻(xiàn)均滿足:(1)檢測HOTAIR在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平,描述相關(guān)的臨床特征參數(shù),根據(jù)HOTAIR的表達(dá)水平對患者進(jìn)行分組;(2)提供HOTAIR的表達(dá)水平與OS和/或LNM、DM關(guān)系的數(shù)據(jù).

排除標(biāo)準(zhǔn):(1)沒有可用數(shù)據(jù)的研究;(2)重復(fù)出版物.

1.2.2 數(shù)據(jù)提取和質(zhì)量控制:兩名研究者獨(dú)立地從符合條件的研究中提取數(shù)據(jù),通過與第三名研究者討論來解決分歧.對于每項(xiàng)研究,記錄檢測方法和病例數(shù)量、LNM和DM的數(shù)量、OS.我們用紐卡斯?fàn)?渥太華量表(NOS)進(jìn)行質(zhì)量評估,≥7分為高質(zhì)量研究,6分為中等質(zhì)量研究,≤5分為低質(zhì)量研究,如有分歧,通過與第三名研究者討論來解決.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用卡方Q檢驗(yàn)和I2統(tǒng)計(jì)量評價(jià)數(shù)據(jù)的異質(zhì)性.對于Q檢驗(yàn),小于0.05的P值表示存在異質(zhì)性;對于統(tǒng)計(jì),I2大于50%表示存在異質(zhì)性,統(tǒng)計(jì)學(xué)意義定義為P值小于0.05.若P>0.05時(shí),表明各研究間不存在明顯異質(zhì)性,采用固定效應(yīng)模型;P<0.05,表明存在異質(zhì)性,使用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,并盡可能行亞組分析判斷產(chǎn)生異質(zhì)性的原因.療效分析的統(tǒng)計(jì)量:OS采用風(fēng)險(xiǎn)比(hazard ratio,HR)和95%可信區(qū)間(95% confidence interval,95%CI),LMN和DM采用比值比(odds ratio,OR)和95%CI作為效應(yīng)指標(biāo).由于我們所收錄的文獻(xiàn)都是公開發(fā)表的,可能有發(fā)表偏倚,我們采用失效安全數(shù)和漏斗圖來分析偏倚.失效安全數(shù)Nfs0.05=(∑z/1.645)2-k,(∑z為各研究z值之和,k為研究個(gè)數(shù)),值越大說明發(fā)表偏倚影響越小.

2 結(jié)果

初步檢索發(fā)現(xiàn)162篇文獻(xiàn),消除重復(fù)文獻(xiàn)和通過閱讀標(biāo)題、摘要排除不符合要求的文獻(xiàn)128篇,通過精讀全文排除所需數(shù)據(jù)不全的文獻(xiàn)27篇,最后7篇文獻(xiàn)[6-12]研究納入本Meta分析,如圖1.文獻(xiàn)質(zhì)量用紐卡斯?fàn)?渥太華量表進(jìn)行評估,均≥6分,為中高質(zhì)量研究,納入文獻(xiàn)的特征,如表1.

表1 納入研究的對象的基本特征

圖1 文獻(xiàn)檢索流程圖及結(jié)果.

2.1 HOTAIR表達(dá)水平與OS的關(guān)系 6篇比較了HOTAIR表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者OS的關(guān)系,I2=6%,P>0.05,納入研究無明顯異質(zhì)性,統(tǒng)計(jì)分析采用固定效應(yīng)模型.結(jié)果顯示兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=2.36,95%CI:1.74-3.19,P<0.05).考慮HR是帶有時(shí)間效應(yīng)的指標(biāo),我們分別對5年OS和3年OS進(jìn)行亞組分析.結(jié)果顯示3年OS,I2=0%,P>0.05,統(tǒng)計(jì)分析采用固定效應(yīng)模型,結(jié)果顯示兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=2.93,95%CI:1.62-5.37,P<0.05);5年OS,I2=30%,P>0.05,采用固定效應(yīng)模型,結(jié)果顯示兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (OR=2.18,95%CI:1.54-3.10,P<0.05),見圖2.

圖2 HOTAIR表達(dá)水平與OS關(guān)系的森林圖. OS:總生存期;HOTAIR:HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA.

2.2 HOTAIR表達(dá)水平與LNM的關(guān)系 5篇比較了HOTAIR表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者LNM的關(guān)系,I2=84%,P<0.05,納入研究存在異質(zhì)性,統(tǒng)計(jì)分析采用隨機(jī)效應(yīng)模型.結(jié)果顯示兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=4.07,95%CI:1.38-12.0,P<0.05),見圖3.

圖3 HOTAIR表達(dá)水平與LNM關(guān)系的森林圖.LNM:淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;HOTAIR:HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA.

2.3 HOTAIR表達(dá)水平與DM的關(guān)系 4篇比較了HOTAIR表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者DM的關(guān)系,I2=63%,P<0.05,納入研究存在異質(zhì)性,統(tǒng)計(jì)分析采用隨機(jī)效應(yīng)模型.結(jié)果顯示兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=4.32,95%CI:1.60-11.62,P<0.05),見圖4.

圖4 HOTAIR表達(dá)水平與DM關(guān)系的森林圖.DM:遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;HOTAIR:HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA.

2.4 偏倚分析 由于我們所收錄的文獻(xiàn)都是公開發(fā)表的,可能存在發(fā)表偏倚,所以我們采用失效安全和漏斗圖來分析偏倚,見圖5.HOTAIR表達(dá)水平與OS關(guān)系的Meta分析,失安全系數(shù)為203;HOTAIR表達(dá)水平與LNM關(guān)系的Meta分析,失安全系數(shù)為75;HOTAIR表達(dá)水平與DM關(guān)系的Meta分析,失安全系數(shù)為100,均遠(yuǎn)高于納入的文獻(xiàn)數(shù).將納入的文獻(xiàn)逐一剔除,再對其余研究進(jìn)行分析,不影響最終結(jié)果,說明Meta分析對單個(gè)數(shù)據(jù)不敏感,結(jié)果較穩(wěn)定.但漏斗圖顯示均顯示左右不對稱,提示納入文獻(xiàn)存在一定的發(fā)表偏倚.

圖5 HOTAIR表達(dá)水平與預(yù)后關(guān)系的漏斗圖.A:HOTAIR表達(dá)水平與OS的關(guān)系;B:HOTAIR表達(dá)水平與LNM的關(guān)系;C:HOTAIR表達(dá)水平與DM的關(guān)系.OS:總生存期;LNM:淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;DM:遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;HOTAIR:HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA.

3 討論

結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一,盡管外科手術(shù)、放化療等在治療方面取得了很大進(jìn)展,但結(jié)直腸癌的死亡率仍較高,表明標(biāo)準(zhǔn)化治療、預(yù)測預(yù)后和長期隨訪的重要性.因此,找到適合結(jié)直腸癌的預(yù)后生物標(biāo)志物至關(guān)重要,這有助于制定臨床策略和提高大腸癌患者的生存率[13,14].LncRNA是癌癥相關(guān)研究的熱點(diǎn),有證據(jù)表明LncRNA在癌癥患者的診治和預(yù)后方面發(fā)揮重要作用,但目前的發(fā)現(xiàn)只是冰山一角,還有許多未知有待進(jìn)一步探索.HOTAIR作為HOX反義基因間RNA,以反轉(zhuǎn)錄方式調(diào)節(jié)基因表達(dá),可以與PRC2結(jié)合,導(dǎo)致組蛋白甲基化和HOXD位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄沉默[15].Svoboda[11]等研究提示HOTAIR表達(dá)診斷結(jié)腸癌的敏感度67%,特異度92.5%.黎武等[16]發(fā)現(xiàn),血清HOTAIR表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),血清HOTAIR表達(dá)診斷結(jié)腸癌的敏感度81.8%,特異度79.4%;判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感度75.0%,特異度88.9%.Kim等[17]發(fā)現(xiàn),HOTAIR可通過其5'端與EZH2結(jié)合,EZH2在胰腺癌中的表達(dá)增加,如果EZH2表達(dá)下調(diào),則具有抗腫瘤作用的miRNA,包括miR-34a的表達(dá)增加.而敲除HOTAIR后,EZH2對miR-34a的抑制作用減弱,這也為靶向治療提供了新的途徑[18].也有Meta分析也發(fā)現(xiàn)HOTAIR基因高表達(dá)與胃癌和食管癌患者的不良預(yù)后有關(guān)[19,20].

本研究結(jié)果顯示:HOTAIR表達(dá)水平與總生存期降低以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性,提示HOTAIR高表達(dá)與患者不良預(yù)后相關(guān).HOTAIR可能作為預(yù)測結(jié)直腸癌患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物,對結(jié)直腸癌的預(yù)后監(jiān)測具有一定的臨床意義.

本Meta分析也有一定的局限性,納入研究的文獻(xiàn)存在一定的異質(zhì)性.考慮HR是帶有時(shí)間效應(yīng)的指標(biāo),我們分別對5年OS和3年OS進(jìn)行了亞組分析,結(jié)果顯示HOTAIR高表達(dá)與3年OS和5年OS降低存在相關(guān)性.雖然我們盡最大努力增加納入研究的樣本量,但樣本量不足仍然是一個(gè)問題.Meta分析提示個(gè)別文獻(xiàn)研究結(jié)果提示兩研究組無差異,考慮患者的年齡、性別,腫瘤的大小,惡性程度,分期及治療方式等均可能影響預(yù)后,也是異質(zhì)性來源之一.但由于文獻(xiàn)提供信息有限,我們均沒有進(jìn)行亞組分析.由于大多數(shù)作者和期刊傾向于報(bào)道陽性結(jié)果,因此我們采用漏斗圖和失效安全數(shù)來分析偏倚,但漏斗圖均顯示不對稱性,提示存在發(fā)表偏倚的可能,計(jì)算的綜合效應(yīng)值可能高估了HOTAIR高表達(dá)對結(jié)腸癌患者預(yù)后的影響.而失效安全數(shù)均遠(yuǎn)高于納入的文獻(xiàn)數(shù),將納入的文獻(xiàn)逐一剔除,再對其余研究進(jìn)行分析,也不影響最終結(jié)果,說明Meta分析結(jié)果有一定的可靠性.

4 結(jié)論

綜上所述,HOTAIR高表達(dá)與結(jié)直腸癌患者總生存期降低以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性,提示HOTAIR高表達(dá)與患者不良預(yù)后相關(guān),可能作為預(yù)測結(jié)直腸癌患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物,尚需更大規(guī)模的前瞻性研究進(jìn)一步驗(yàn)證.

文章亮點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)背景

結(jié)直腸癌的死亡率仍較高,相關(guān)的標(biāo)志物包括癌胚抗原、糖類抗原199、糖類抗原242和某些microRNAs等,其特異性和敏感性仍相對較低.

實(shí)驗(yàn)動(dòng)機(jī)

尋找更有助于結(jié)直腸癌早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)后評估的生物學(xué)標(biāo)志物.

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

探討HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系,以期對臨床診治提供指導(dǎo).

實(shí)驗(yàn)方法

采用Meta分析的方法對納入文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,研究HOTAIR表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

HOTAIR高表達(dá)與結(jié)直腸癌患者總生存期降低以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性.

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

HOTAIR高表達(dá)與患者不良預(yù)后相關(guān),可能作為預(yù)測結(jié)直腸癌患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物.

展望前景

HOTAIR有可能作為一種判斷腫瘤預(yù)后的新型生物標(biāo)志物,對結(jié)直腸癌患者的預(yù)后監(jiān)測具有一定的意義,但尚需更大規(guī)模的前瞻性研究進(jìn)一步驗(yàn)證.