茶樹種質(zhì)資源研究“十三五”進展及 “十四五”發(fā)展方向

金基強 張晨禹 馬建強 陳亮

摘要：簡要總結(jié)了“十三五”期間茶樹資源收集保存、茶樹起源馴化、優(yōu)異資源的鑒定評價、優(yōu)異基因發(fā)掘和種質(zhì)創(chuàng)新利用等方面取得的主要進展，分析了存在的主要問題，并提出了“十四五”期間我國茶樹種質(zhì)資源領(lǐng)域的發(fā)展方向，為茶樹種質(zhì)資源學(xué)科研究提供參考。

關(guān)鍵詞：茶樹;種質(zhì)資源;“十三五”;進展;“十四五”;發(fā)展方向

Research Progress on Tea Germplasms during the

13th Five-Year Plan Period and Development

Direction in the 14th Five-Year Plan Period

JIN Jiqiang， ZHANG Chenyu， MA Jianqiang， CHEN Liang*

Tea Research Institute， Chinese Academy of Agricultural Sciences / National Center for Tea Improvement / Key Laboratory of

Tea Biology and Resources Utilization， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Hangzhou 310008， China

Abstract： Research progress on collection and preservation of tea germplasms， origin and domestication of tea plant，

identification and evaluation of elite resources， exploration of excellent genes， innovation and utilization of tea

germplasms in the "13th Five-Year Plan" were reviewed in this paper， and some existing problems were analyzed. Then

some research issues that should be concerned in the next five years were put forward， which provided a reference for

the research on tea germplasms.

Keywords： tea plant， germplasm， the 13th Five-Year Plan， progress， the 14th Five-Year Plan， development direction

茶產(chǎn)業(yè)在我國茶區(qū)是鄉(xiāng)村振興的重要支柱產(chǎn)業(yè)之一。茶樹種質(zhì)資源是保障茶產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的戰(zhàn)略性資源，是茶科技原始創(chuàng)新、茶樹育種和新產(chǎn)品開發(fā)的物質(zhì)基礎(chǔ)。我國是茶樹的起源地，是世界上資源最豐富的國家。近年來，隨著白葉1號、中黃系列黃葉茶和黃金茶等一批優(yōu)異茶樹資源的開發(fā)利用，有力地推動了我國茶產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。本文簡要總結(jié)了茶樹種質(zhì)資源研究“十三五”期間取得的主要進展，分析了存在的問題，提出了該領(lǐng)域“十四五”期間的發(fā)展方向，為茶樹種質(zhì)資源研究提供參考。

一、茶樹種質(zhì)資源研究“十三五”進展

1. 茶樹資源調(diào)查收集和保存

在茶樹資源調(diào)查方面，2015—2020年開展了第三次全國農(nóng)作物種質(zhì)資源普查與收集行動，對湖南、浙江、福建、廣東、廣西、安徽等多?。▍^(qū)）的茶樹種質(zhì)資源進行了普查、調(diào)查、征集和收集。2010—2017年，蔣會兵等[1]對云南省12個地區(qū)58個縣（市）的古茶樹資源進行了全面普查，利用地理信息系統(tǒng)和統(tǒng)計學(xué)方法分析了云南古茶樹資源種類組成、地理分布特征、生境類型及形態(tài)多樣性，共調(diào)查古茶樹資源分布點474個，記錄樣本2 570株。張麗娟等[2]對貴州省黔南州的茶樹種質(zhì)資源開展了調(diào)查工作，總結(jié)了黔南州茶樹資源分布區(qū)域、類型、農(nóng)藝性狀和適制性等，建立了茶樹資源數(shù)據(jù)庫。劉躍清等[3]在江西省系統(tǒng)開展野生茶樹資源調(diào)查，明確了江西茶樹資源的分布和特點。班秋艷等[4]對陜西安康市、漢中市12個地點的88份茶樹種質(zhì)資源主要表型性狀的遺傳多樣性進行了研究。黃飛毅等[5]調(diào)查和收集了33份湖南莽山茶樹資源，對其中的24份資源進行了生物學(xué)性狀考察，對27份資源進行了品質(zhì)成分分析。李苑菱等[6]在對海南島自然分布的野生茶樹資源全面開展調(diào)查工作的基礎(chǔ)上，從種群徑級結(jié)構(gòu)、靜態(tài)生命表、存活曲線等種群特征方面，以及野生茶種群空間分布格局與分布特征方面進行了分析研究。此外，茶樹種質(zhì)資源豐富或具有代表性茶組植物的區(qū)域，如云南云縣白鶯山、麻栗坡，廣西金秀、德保、柳州元寶山，貴州納雍、普安，廣東潮州鳳凰山等逐漸被茶葉科研機構(gòu)關(guān)注，并開展了深入的茶樹資源調(diào)查收集工作。通過資源考察，基本摸清了上述地區(qū)茶樹種質(zhì)資源的情況和分布特點。

在茶樹資源收集、保存方面，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所“國家種質(zhì)杭州茶樹圃”和云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所“國家種質(zhì)勐海茶樹分圃”分別保存中小葉茶和大葉茶資源。經(jīng)過多年系統(tǒng)考察收集和國外引進，截至目前，兩圃已收集保存了9個國家的野生茶樹、農(nóng)家品種、育成品種、引進品種、育種材料、珍稀資源與近緣植物等3 700多份，包含了山茶屬茶組植物所有的種與變種，是全球茶組植物遺傳多樣性涵蓋量最大、種質(zhì)資源最豐富的基因庫。隨著多個地方政府、茶葉科研單位和企業(yè)對茶樹種質(zhì)資源的逐漸重視，一批地方茶樹種質(zhì)資源圃已建成或正在建設(shè)。如由麗水市農(nóng)業(yè)科學(xué)院承擔(dān)的浙江省茶樹種質(zhì)資源圃于2016年開始籌劃建設(shè)，資源圃位于松陽縣赤壽鄉(xiāng)樓塘村，占地14.53 hm2，現(xiàn)已收集保存近2 000份茶樹資源。除了種質(zhì)圃保存，我國也非常重視原生境保存。近年來，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部先后在廣西融水縣、貴州普安縣、云南寧洱縣、海南五指山市、云南勐?？h等地批準(zhǔn)建立了10余處國家級茶樹種質(zhì)資源原生境保護點。此外，各級地方政府也非常關(guān)注和重視茶樹種質(zhì)資源的原生境保護。2016年、2017年和2018年，云南省臨滄市、貴州省和云南省普洱市分別制定了《臨滄市古茶樹保護條例》《貴州省古茶樹保護條例》和《普洱市古茶樹資源保護條例》。云南省云縣白鶯山地區(qū)是大理茶（Camellia taliensis）、阿薩姆茶（C. sinensis var. assamica）及中間過渡形態(tài)茶樹廣泛分布的區(qū)域，保存了二嘎子茶、本山茶、黑條子茶、白條子茶、勐庫茶、藤子茶等12種野生型、栽培型和過渡型古茶樹200多萬株。2021年5月13日，中國首家茶樹演化自然博物館在白鶯山茶區(qū)掛牌。

2. 茶樹起源馴化與遺傳多樣性

茶樹是典型的自交不親和植物，世代的異花授粉使我國茶樹資源形成了豐富的遺傳多樣性。盡管茶樹起源于中國西南地區(qū)的假說通過從云南發(fā)現(xiàn)的豐富茶樹種質(zhì)資源得到了一定的支持，但之前該假說尚缺乏足夠的科學(xué)論證。Meegahakumbura等[7]利用23對核基因組微衛(wèi)星（SSR）標(biāo)記對采自中國和印度的392份茶樹種質(zhì)資源開展了栽培馴化起源研究，研究結(jié)果表明茶樹表現(xiàn)出明顯的地理分布格局，推測中國東部和南部地區(qū)很有可能是小葉茶的栽培馴化中心，而云南西部或南部與印度阿薩姆地區(qū)分別是中國大葉茶和印度大葉茶可能的栽培馴化中心。貴州位于中國的西南地區(qū)，境內(nèi)分布著大量的茶組植物資源。Niu等[8]以分布于貴州全境的415份茶樹資源為材料，利用GBS簡化基因組測序策略進行遺傳多樣性評估，顯示栽培型茶樹的多態(tài)性要明顯高于野生型，最適宜茶樹生長區(qū)域的資源遺傳多樣性要高于次適宜區(qū)和不適宜區(qū)。遺傳結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示野生型茶樹和栽培型茶樹出現(xiàn)明顯的遺傳差異，遺傳變異分析顯示野生型茶樹與栽培型茶樹有著較高的遺傳分化，而栽培型古茶樹和現(xiàn)代地方品種間遺傳分化較小。

“十三五”期間，我國在茶樹基因組研究領(lǐng)域取得了重要進展，推動了茶樹起源馴化和遺傳多樣性等重大基礎(chǔ)科學(xué)問題的研究。在高通量測序技術(shù)支持下，Wei等[9]通過比較基因組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，栽培茶樹與獼猴桃的物種分化發(fā)生在8 000萬年前，而茶樹原變種與阿薩姆變種的物種分化發(fā)生在38萬～154萬年前。Xia等[10]通過重測序國內(nèi)外81份代表性茶樹資源，研究發(fā)現(xiàn)81份資源被清晰地分為阿薩姆變種、茶原變種和野生種，該結(jié)果支持了我國茶樹的西南起源假說。Wang等[11]對來自世界不同國家和地區(qū)的共計139份代表性茶樹材料進行的重測序結(jié)果表明，茶樹栽培區(qū)域的擴張和引種馴化顯著增加了茶樹種群間的雜合性和基因流，并且茶樹原變種和阿薩姆變種在馴化過程中的選擇方向存在差異，相比阿薩姆變種，茶樹原變種中與風(fēng)味相關(guān)的萜烯類代謝基因和抗病基因在馴化過程中更傾向于受到強烈的選擇。Zhang等[12]利用來源于中國16個省份共計217份茶樹種質(zhì)資源的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，研究揭示了中國主要茶樹種質(zhì)資源以福鼎大白茶、鐵觀音等為骨干親本，并且茶樹種質(zhì)資源間基因交流頻繁，遺傳多樣性豐富。Zhang等[13]通過對176份（15份大理茶和161份茶樹）種質(zhì)資源重測序數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)這些個體可以分為大理茶、阿薩姆茶和茶3個大組，其中阿薩姆茶可以分為古阿薩姆茶和栽培阿薩姆茶;而茶分為陜西、四川和江西，浙江和福建北部，福建南部，湖北、湖南和安徽等4個類群。同時發(fā)現(xiàn)阿薩姆茶遺傳多態(tài)性高于茶，對20個茶組植物（12個近緣種和8個茶樹品種）的系統(tǒng)發(fā)育分析顯示頻繁的基因流在茶樹及野生近緣種之間廣泛存在。

此外，還基于遺傳多樣性參數(shù)分析，建立了茶樹資源收集保護的取樣策略和方法。如毛娟等[14]在云南云縣白鶯山野生茶樹群體研究中，通過模擬不同樣本數(shù)量，計算遺傳多樣性參數(shù)與樣本量變化的回歸曲線，發(fā)現(xiàn)當(dāng)樣本量達到40時，各種遺傳參數(shù)才趨于穩(wěn)定。黃丹娟 [15]通過從254個中國茶樹品種中隨機抽取樣本量分別為50、100、200和250個品種，發(fā)現(xiàn)至少分別需要20、25、30和30對SSR引物才能比較客觀地反映出品種的遺傳多樣性。

3. 茶樹優(yōu)異資源的鑒定評價

優(yōu)異茶樹資源的發(fā)掘是資源研究的目的，是開展品種改良的基礎(chǔ)，對茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。Wei等[16]對17個茶樹品種的9種代謝物進行測定，發(fā)現(xiàn)1，2，6-三沒食子酰基葡萄糖的含量為0.20%～4.32%，其中有2份資源的含量高于3.00%，表明在部分資源中這類代謝物含量非常豐富。方開星等[17]從218份茶樹資源中篩選獲得了一批氨基酸特異的茶樹資源，其中高茶氨酸茶樹資源13份，不含茶氨酸的茶樹資源4份。以136個代表性茶樹資源為材料，Yu等[18]深入解析了栽培種茶樹群體與特殊代謝物之間的關(guān)系，基于9萬多個高質(zhì)量SNP和100多個差異代謝物將這些資源分為了5類，其中黃烷醇、黃酮醇單/雙糖苷、原花青素二聚體等酚類代謝物為阿薩姆變種的特征代謝成分，該研究為闡明茶樹中特殊代謝物的多樣性形成機理奠定了基礎(chǔ)。

我國茶樹資源非常豐富，特別是野生茶樹資源中常富含特異功能成分，亟待收集保存、鑒定評價和開發(fā)利用。Jin等[19]在福建南部新發(fā)現(xiàn)一類低咖啡堿資源紅芽茶，與南昆山毛葉茶相比，紅芽茶在形態(tài)學(xué)上具有明顯差異;代謝譜分析發(fā)現(xiàn)紅芽茶資源基本不含咖啡堿，富含可可堿，順式兒茶素EGCG等含量低、GCG等反式兒茶素含量高，并且含有常規(guī)栽培茶樹缺乏的原花青素GC-GCG、四沒食子?；咸烟堑忍禺惓煞?。Jin等[20]在福建還發(fā)現(xiàn)了同時富含苦茶堿、甲基化EGCG的禿房茶資源——白芽茶，同類型高功能成分還未有報道，這也是首次在福建發(fā)現(xiàn)禿房茶（C. gymnogyna）資源。陳濤林[21]綜合采用形態(tài)分類學(xué)、解剖學(xué)、分子生物學(xué)和化學(xué)分類學(xué)等分析技術(shù)，對廣西柳州元寶山茶飲植物進行了準(zhǔn)確鑒定，并對其形態(tài)和化學(xué)組成作了較全面的解析，發(fā)現(xiàn)了數(shù)種特異的多酚類化合物。Meng等[22]通過對防城茶的化學(xué)成分的研究，從中分離得到11個化合物，經(jīng)鑒定結(jié)構(gòu)其中3個為新的兒茶素二聚體，具有胰脂肪酶抑制活性。在廣西白毛茶（C. sinensis var. pubilimba）[23]和云南昔歸古樹茶（C. sinensis var. assamica）[24]等茶樹資源中，還鑒定出了C-8 N-乙基-2-吡咯烷酮取代的黃烷-3-醇類代謝物，該類化合物之前只發(fā)現(xiàn)于加工后儲存一定時間的白茶等茶葉中。

4. 茶樹種質(zhì)資源的優(yōu)異基因發(fā)掘

咖啡堿是成茶的主要苦味物質(zhì)，具有興奮神經(jīng)、祛除疲勞及增加心血管系統(tǒng)活動等健康功效，但攝入過量咖啡堿會引起一定的副作用。因此，研究茶樹咖啡堿代謝途徑及其分子機理，培育低咖啡堿茶樹新品種具有重要意義。Jin等[25]克隆了茶樹咖啡堿合成酶1（TCS1）的6個等位基因，通過序列分析和定點突變，發(fā)現(xiàn)TCS1蛋白的第269位氨基酸對底物的選擇性和咖啡堿合成酶活性起著重要作用。同時，Jin等[26]利用關(guān)聯(lián)分析發(fā)掘了1個與咖啡堿含量相關(guān)的功能SNP位點，并成功開發(fā)了1個CAPS標(biāo)記。此外，Jin等[19]從2種以含可可堿而非咖啡堿為主的野生茶樹種質(zhì)資源——紅芽茶和可可茶中還克隆出相應(yīng)的咖啡堿合成酶基因，發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的重組蛋白只有可可堿合成酶活性而無咖啡堿合成酶活性。Ogino等[27]發(fā)現(xiàn)無咖啡堿的純合個體的TCS1都有1個TTC三堿基的插入，可以作為低咖啡堿性狀的篩選標(biāo)記。

苦茶堿是天然存在的嘌呤類生物堿，具有抗抑郁、鎮(zhèn)靜催眠和抗炎鎮(zhèn)痛等藥理功效。此前研究表明，咖啡堿可在少數(shù)稀有茶樹資源中發(fā)生C8氧化和N9位置的甲基化修飾轉(zhuǎn)化為苦茶堿[28]，但催化N9的甲基化酶和C8的氧化酶目前尚未報道。2020年，暨南大學(xué)何蓉蓉團隊從云南苦茶中鑒定出3個N9-甲基轉(zhuǎn)移酶基因[29]。該研究通過原核表達、酶動力學(xué)、晶體結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄表達分析明確了苦茶堿合成酶（CkTcS）具有特異催化1，3，7-三甲基尿酸生成苦茶堿活性，并且其第三十一位的蘇氨酸是CkTcS特異結(jié)合1，3，7-三甲基尿酸的重要氨基酸。此外，比較CkTcS在苦茶和普洱茶資源葉片中的轉(zhuǎn)錄表達結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該基因在苦茶中的表達量顯著高于普洱茶，推測這可能是造成苦茶堿含量在兩種植物中差異顯著的重要原因。

兒茶素是茶葉中的主要特征次生代謝產(chǎn)物之一，它們是茶風(fēng)味和健康功效的主要決定因素。類黃酮3'，5'-羥化酶（F3'5'H）是茶樹黃烷-3-醇合成中的重要酶類，分別催化黃酮、黃烷酮、二氫黃酮醇和黃酮醇轉(zhuǎn)化為3'，4'，5'-三羥基化產(chǎn)物，是目前已知的細(xì)胞色素P450家族中催化B-環(huán)5'羥基化反應(yīng)的唯一酶系。2017年，Jin等[30]通過研究2種不同遺傳背景的群體（自然群體和F1分離群體）的基因型及兒茶素含量，發(fā)現(xiàn)茶樹F3'5'H的基因型能解釋高達53.0%～74.3%的兒茶素指數(shù)〔CI，即二羥基兒茶素（ECG、EC）/三羥基兒茶素（EGCG、EGC）〕的表型變異，表明F3'5'H是1個調(diào)控兒茶素合成的關(guān)鍵基因。Jin等[31]進一步發(fā)現(xiàn)興義6號等資源中F3'5'H的啟動子區(qū)域存在著1個14 bp的缺失突變和多個SNP，該序列變異造成其F3'5'H轉(zhuǎn)錄表達水平降低，并使其三羥基兒茶素積累較少。利用該14 bp的缺失突變，還開發(fā)了1個可以鑒定高CI茶樹資源的InDel標(biāo)記。Liu等[32]也得到了類似的研究結(jié)果。

茶氨酸是茶樹特征性非蛋白質(zhì)氨基酸，在茶氨酸合成酶催化下，利用其前體物質(zhì)乙胺和谷氨酸合成。2018年，Wei等[9]在構(gòu)建舒茶早基因組時，鑒定出1個新的調(diào)控茶氨酸生物合成關(guān)鍵酶基因CsTSI（Theanine synthetase）。該基因為谷氨酰胺合成酶II型，編碼848個氨基酸。通過表達模式分析、乙銨誘導(dǎo)處理、轉(zhuǎn)基因等實驗均證明了CsTSI具有體外合成茶氨酸的酶活性。乙胺作為茶氨酸的合成前體物質(zhì)，在茶樹根部由丙氨酸脫羧酶將丙氨酸脫去羧基生成。2019年，Bai等[33]從茶樹中克隆出1個新的絲氨酸脫羧酶（SDC）基因，并被命名為丙氨酸脫羧酶基因（CsAlaDC）。該基因能夠催化丙氨酸脫羧，在茶樹根部的表達水平顯著高于葉片。盡管已有大量研究發(fā)現(xiàn)茶氨酸主要從根部合成并隨后轉(zhuǎn)移至地上部，但其轉(zhuǎn)移的分子機理始終未得到揭示。2019年，Dong等[34]同源克隆得到9個茶樹氨基酸跨膜家族基因（CsAAPs），其中CsAAP1在茶氨酸從茶樹根部向地上部運輸中起到重要作用，該研究結(jié)果首次證實了CsAAP家族參與茶氨酸從根部向新梢的運輸。

5. 茶樹種質(zhì)資源的創(chuàng)新利用

利用優(yōu)異種質(zhì)資源培育新品種是我國茶樹育種研究的重要內(nèi)容。截至目前，通過系統(tǒng)選育、人工雜交、輻射誘變等手段，共育成無性系新品種近300個，其中系統(tǒng)選育品種超過70%。特異資源的開發(fā)和利用已成為近年來推動茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要手段，展現(xiàn)出巨大的市場潛力。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所分別與浙江天臺、縉云、龍游等地合作，利用當(dāng)?shù)氐狞S葉茶特異資源育成了中黃1號、中黃2號、中黃3號等黃葉茶新品種，已取得了顯著的社會和經(jīng)濟效益。湖南地方品種資源保靖黃金茶的育種利用和生產(chǎn)開發(fā)同樣產(chǎn)生了較好的社會效益和經(jīng)濟效益，有力推動了湖南茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展。

隨著更多功能基因的發(fā)掘、新型分子標(biāo)記的開發(fā)以及對主要性狀遺傳規(guī)律的深入解析，分子設(shè)計育種將成為園藝作物遺傳改良的主要方向。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所等單位開發(fā)出了鑒定高花青素、低咖啡堿、高苦茶堿和高二羥基兒茶素等性狀的功能標(biāo)記，并應(yīng)用于種質(zhì)創(chuàng)制和分子標(biāo)記輔助選擇育種。在茶樹遺傳轉(zhuǎn)化及基因編輯等技術(shù)上，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)等單位進行了持續(xù)探索和攻關(guān)，基因編輯技術(shù)已應(yīng)用于茶樹基因的功能驗證[35]。

二、茶樹種質(zhì)資源研究領(lǐng)域存在的問題

“十三五”是茶樹種質(zhì)資源領(lǐng)域發(fā)展較快的5年，取得了一定的突破。但也應(yīng)該看到，茶樹資源收集保存不夠系統(tǒng)、缺乏精準(zhǔn)深入的鑒定評價、資源發(fā)掘利用不夠深入、缺乏茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展亟需的優(yōu)異新種質(zhì)等關(guān)鍵問題仍未得到很好解決。

1. 茶樹資源收集保存不夠系統(tǒng)

野生資源是研究茶樹的起源演化、系統(tǒng)分類及遺傳變異的重要材料，也是茶樹種質(zhì)創(chuàng)新和遺傳育種的豐富基因源。由于受到市場追捧，野生茶樹被直接采挖或過度采摘死亡，以及毀林種茶現(xiàn)象時有發(fā)生，同時野生茶資源因自身遺傳特性限制，有性繁殖和無性繁殖都比較困難，其自然居群更新程度低，導(dǎo)致自然種群數(shù)量不斷減少，我國一些珍稀野生茶樹資源正逐漸變得稀少。此外，近年來優(yōu)良無性系品種的大面積推廣，一些特色地方群體品種已面臨丟失的危險。茶作為世界上最重要的飲品之一，茶樹起源演化和馴化一直是人們關(guān)注的熱點，但當(dāng)前我國保存的國外茶樹資源數(shù)量較少，特別是缺乏老撾、緬甸、越南、印度東北部等南亞和東南亞的野生茶組植物，因此需要加強國際合作，收集引進國外的茶樹種質(zhì)資源。

2. 對茶樹種質(zhì)資源缺乏精準(zhǔn)深入的鑒定評價，對重要農(nóng)藝性狀形成的規(guī)律認(rèn)識不清

茶樹重要農(nóng)藝性狀精準(zhǔn)鑒定尚處起步階段，對抗逆性和生化成分等的鑒定能力需要提升，缺乏高精度的變異組圖譜，特別是對珍稀、野生茶樹資源的鑒定評價較少、深度不夠，這限制了茶樹種質(zhì)資源的廣泛利用，造成在育種上進度緩慢、優(yōu)良新種質(zhì)少的現(xiàn)象。例如：由于不同遺傳背景資源的茶樹鮮葉中富含多樣性的功能成分，目前非常缺乏對茶葉組分的全面準(zhǔn)確鑒定與絕對定量。

同時，探明茶葉功能性成分及其醫(yī)學(xué)保健功效，需在綜合性交叉領(lǐng)域開展具有戰(zhàn)略導(dǎo)向性的基礎(chǔ)研究，涉及化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等眾多學(xué)科領(lǐng)域的交叉與綜合。長期以來，受困于茶樹生長周期長、一些性狀受到環(huán)境的影響較大等因素，控制品質(zhì)、抗性、發(fā)育等重要性狀的遺傳規(guī)律和調(diào)控機制多不明確，導(dǎo)致當(dāng)前茶樹種質(zhì)創(chuàng)新利用有很大的盲目性和隨意性。

此外，茶樹雖已有6個不同資源染色體級別的參考基因組，但茶組植物內(nèi)遺傳變異大，很多決定特異功能組分和性狀的基因在栽培茶樹中不存在，如苦茶堿合成酶基因，因此需要更多高質(zhì)量的參考基因組圖譜和茶樹泛基因組。茶樹種質(zhì)資源整體變異豐富，但研究中發(fā)現(xiàn)資源圃中收集的栽培種茶樹遺傳變異較小，需進一步構(gòu)建更加科學(xué)合理的茶樹核心種質(zhì)，最大程度地代表整個資源的遺傳多樣性，提高資源的鑒定和發(fā)掘效率。我們同時也注意到，由于茶樹遺傳背景復(fù)雜，不同研究對茶樹是否經(jīng)歷馴化的結(jié)論明顯不一致，因此今后相關(guān)研究在選擇實驗材料上要更加注重準(zhǔn)確性和代表性。

3. 對茶樹種質(zhì)資源的發(fā)掘利用不夠充分

茶樹資源中具有重要應(yīng)用價值的基因挖掘和利用不夠深入，對育種研究的支撐作用還有待提升，如同時具有低咖啡堿、高縮合單寧等優(yōu)異性狀的特異資源南昆山毛葉茶等長期以來未能應(yīng)用于茶樹品種的遺傳改良。尚未建立起創(chuàng)新種質(zhì)中優(yōu)異基因快速檢測、轉(zhuǎn)移、聚合和追蹤的技術(shù)體系，對重要經(jīng)濟性狀進行遺傳改良存在著親本選配盲目、鑒定周期長、成本高等問題。此外，由于缺乏高效的茶樹轉(zhuǎn)基因技術(shù)體系和成熟的基因編輯技術(shù)體系，導(dǎo)致茶樹的研發(fā)能力明顯滯后于柑橘、蘋果等其他木本園藝植物。

4. 缺乏茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展亟需的優(yōu)異新種質(zhì)

茶樹種質(zhì)創(chuàng)新現(xiàn)以常規(guī)雜交等傳統(tǒng)方法為主，存在效率低、盲目性大等技術(shù)瓶頸，加上缺乏早期鑒定技術(shù)，導(dǎo)致研發(fā)周期長，茶樹種質(zhì)創(chuàng)新和新品種選育進展相對緩慢，尚不能滿足茶產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展對新品種的需求。近年茶產(chǎn)業(yè)同質(zhì)化競爭逐漸加劇，對機采、多元化和專用特異茶樹品種需求迫切。當(dāng)前，除葉色變異（白化、黃化和紫化）和高茶氨酸等新品種外，其他類型的專用、特異品種較少。

三、茶樹種質(zhì)資源研究“十四五”

重點發(fā)展方向

隨著茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，現(xiàn)有的茶樹品種已難以滿足消費者日益多樣化的需求，因此需要進一步加強茶樹種質(zhì)資源研究，提高資源利用效率，進而加速茶樹育種進程，“十四五”在以下幾個重點方向應(yīng)予以關(guān)注。

1. 加大珍稀、瀕危、特有、地方特色與國外茶樹資源的收集保存

在擴建高水平茶樹資源圃，增加資源保存數(shù)量和提高管理利用水平的同時，要繼續(xù)加強茶樹種質(zhì)資源的收集和保存，加快查清茶樹種質(zhì)資源具體情況，加大珍稀、瀕危、特有資源與地方特色品種收集力度，特別要重視茶樹野生近緣種的調(diào)查、收集，確保茶樹資源不喪失。系統(tǒng)開展瀕危資源的調(diào)查和收集，解析其生存狀況和瀕危機制，建立異位和原生境保護相結(jié)合的保護體系。要加快完善國外資源的引進和保存體系，有針對性地引進各種具有育種和科學(xué)研究價值的茶樹資源。

2. 加快茶樹資源的精準(zhǔn)、高通量鑒定評價

要根據(jù)保存資源的特性和研究需要進一步構(gòu)建更加科學(xué)的茶樹核心種質(zhì)，濃縮茶樹資源的遺傳多樣性。構(gòu)建含更多代表性茶組植物（特別是尚未開展深入研究和新發(fā)現(xiàn)的野生近緣種）的泛基因組圖譜，開展茶樹起源與種質(zhì)資源多樣性研究，闡明野生種、地方品種和育成品種的演化關(guān)系。通過表型組學(xué)、代謝組學(xué)、基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白組等多組學(xué)的研究，高通量和規(guī)?；b定茶樹核心種質(zhì)的表型、代謝物、基因型和基因表達，建立茶樹生物多組學(xué)數(shù)據(jù)庫，構(gòu)建茶樹的遺傳變異圖譜，揭示茶樹遺傳變異的主要形式，為解析多基因控制性狀的遺傳構(gòu)成提供基礎(chǔ)工具。選擇遺傳背景和性狀差異明顯的茶組植物建立遺傳分離群體，在對農(nóng)藝和品質(zhì)性狀開展精準(zhǔn)評價的基礎(chǔ)上，利用全基因組水平的高通量基因分型技術(shù)，深入剖析重要性狀的遺傳結(jié)構(gòu)，分離關(guān)鍵基因并開展深入的功能分析，探索重要性狀決定或調(diào)控的遺傳學(xué)基礎(chǔ)及網(wǎng)絡(luò)，并開發(fā)基于功能基因的分子標(biāo)記，建立優(yōu)異茶樹種質(zhì)資源的早期篩選與鑒定技術(shù)體系。

3. 針對產(chǎn)業(yè)發(fā)展趨勢和消費者需求加快茶樹種質(zhì)的創(chuàng)新利用

由于茶樹種質(zhì)創(chuàng)新利用的長期性，要瞄準(zhǔn)未來10～20年茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展趨勢，同時以滿足消費者的需求為目標(biāo)開展新種質(zhì)創(chuàng)制。以“多元化利用”“輕簡省力”“節(jié)本增效”“提升質(zhì)量安全”“具有地方特色”等為目標(biāo)，高效創(chuàng)制功能成分特異、適合開發(fā)新興茶飲料和超微茶粉、適合機采、營養(yǎng)高效、優(yōu)質(zhì)多抗、滿足地方茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展需求且綜合性狀優(yōu)良、育種利用價值高的突破性新種質(zhì)。規(guī)?；l(fā)掘優(yōu)異基因和攜帶優(yōu)異等位基因的種質(zhì)，研究優(yōu)異新種質(zhì)多基因聚合技術(shù)，利用遠緣雜交發(fā)掘利用野生近緣種中的優(yōu)異基因。借鑒蘋果、柿子、柑橘、桃等果樹上的成功經(jīng)驗，使用胚培養(yǎng)、培養(yǎng)箱促使種子提早出苗、高效肥培管理技術(shù)加快幼年茶樹生長、嫩枝嫁接、分子標(biāo)記篩選等技術(shù)手段，將傳統(tǒng)雜交與現(xiàn)代生物技術(shù)和分子標(biāo)記輔助選擇等有機整合，有效縮短育種周期和提高茶樹種質(zhì)創(chuàng)制效率。同時，通過嫁接擴大早期穗條數(shù)量、扦插時使用激素等技術(shù)措施加快新種質(zhì)的繁育與利用。通過協(xié)作攻關(guān)建立起高效的茶樹遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)體系，研發(fā)適用茶樹的基因編輯載體，通過基因編輯技術(shù)定向創(chuàng)制新種質(zhì)，進而快速改良茶樹重要農(nóng)藝性狀，加速育種進程。探索野生茶樹的快速從頭馴化，為未來創(chuàng)制品質(zhì)優(yōu)、功能成分特異和抗性強的突破性茶樹新種質(zhì)開辟新的研究方向。

4. 建立起全國協(xié)作的茶樹種質(zhì)資源研究和利用體系

首先，需要穩(wěn)定一支多學(xué)科交叉的從事茶樹資源研究的人才隊伍，建立從資源收集保存、鑒定評價到創(chuàng)新利用等多方面的協(xié)作網(wǎng)絡(luò)，全面提升我國茶樹資源的研究水平。同時，需要加快茶樹種質(zhì)資源共享平臺的建設(shè)，建立茶樹種質(zhì)資源性狀信息、分子數(shù)據(jù)和載體品種等信息數(shù)據(jù)庫，促進資源整合、保護、共享和利用。加強茶樹繁育、生產(chǎn)企業(yè)與茶葉科研單位、高等院校等公益性單位的聯(lián)合協(xié)作，通過資源共享、人員共享和實驗平臺共享，加快茶樹新品種的培育和推廣力度。

參考文獻

[1] 蔣會兵， 唐一春， 陳林波， 等. 云南省古茶樹資源調(diào)查與分析[J]. 植物遺傳資源學(xué)報， 2020， 21（2）： 296-307.

[2] 張麗娟， 柳青， 楊清. 貴州省黔南州茶樹種質(zhì)資源優(yōu)勢及開發(fā)利用[J]. 中國茶葉加工， 2016（1）： 38-41.

[3] 劉躍清， 張斐斐， 朱恩華， 等. 江西省茶樹野生資源調(diào)查[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， 2020（20）： 129-131， 145.

[4] 班秋艷， 紀(jì)曉明， 余有本， 等. 陜西茶樹種質(zhì)資源表型性狀的遺傳多樣性研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報， 2018， 45（4）： 575-579.

[5] 黃飛毅， 陳宇宏， 劉偉， 等. 湖南莽山茶樹種質(zhì)資源調(diào)查與品質(zhì)性狀的遺傳多樣性分析[J]. 植物遺傳資源學(xué)報， 2021， 22（2）： 328-337.

[6] 李苑菱， 張麗， 楊小波， 等. 海南島野生茶樹空間分布及種群動態(tài)研究[J]. 林業(yè)資源管理， 2017（2）： 81-87， 138.

[7] MEEGAHAKUMBURA M K， WAMBYLWA M C， THAPA K K，

et al. Indications for three independent domestication events for the

tea plant （Camellia sinensis （L.） O. Kuntze） and new insights into the

origin of tea germplasm in China and India revealed by nuclear

microsatellites[J/OL]. PLoS One， 2016，11（5）： e0155369. https：//doi.org/10.1371/journal.pone.0155369.

[8] NIU S Z， SONG Q F， KOIWA H， et al. Genetic diversity， linkage

disequilibrium， and population structure analysis of the tea plant

（Camellia sinensis） from an origin center， Guizhou plateau， using

genome-wide SNPs developed by genotyping-by-sequencing[J/OL].

BMC Plant Biology， 2019， 19（1）： 328. https：//doi.org/10.1186/s

12870-019-1917-5.

[9] WEI C L， YANG H， WANG S B， et al. Draft genome sequence of

Camellia sinensis var. sinensis provides insights into the evolution of

the tea genome and tea quality[J]. Proceedings of the National

Academy of Sciences， 2018， 115（18）： 4151-4158.

[10] XIA E H， TONG W， HOU Y， et al. The reference genome of tea plant

and resequencing of 81 diverse accessions provide insights into its

genome evolution and adaptation[J]. Molecular Plant， 2020， 13（7）： 1013-1026.

[11] WANG X C， FENG H， CHANG Y X， et al. Population sequencing

enhances understanding of tea plant evolution[J/OL]. Nature Com-

munications， 2020， 11（1）： 4447. https：//doi.org/10.1038/s41467-

020-18228-8.

[12] ZHANG W Y， ZHANG Y J， QIU H J， et al. Genome assembly of

wild tea tree DASZ reveals pedigree and selection history of tea

varieties[J]. Nature Communications， 2020， 11（1）： 693-704.

[13] ZHANG X T， CHEN S， SHI LQ， et al. Haplotype-resolved genome

assembly provides insights into evolutionary history of the tea plant

Camellia sinensis[J]. Nature Genetics， 2021， 53： 1250-1259.

[14] 毛娟， 江鴻鍵， 李崇興， 等. 云南白鶯山地區(qū)茶樹遺傳多樣性研究[J]. 2018， 38（1）： 69-77.

[15] 黃丹娟. 我國茶樹優(yōu)良品種遺傳多樣性分析及指紋圖譜構(gòu)建[D]. 北京： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院， 2016： 10-29.

[16] WEI K， HE F， LI H， et al. Gallotannin 1，2，6-tri-O-galloyl-β-D-gl-

ucopyranose： Its availability and changing patterns in tea? （Camellia

sinensis）[J]. Food Chemistry， 2019， 296： 40-46.

[17] 方開星， 姜曉輝， 秦丹丹， 等. 高氨基酸和高茶氨酸茶樹資源篩選[J]. 核農(nóng)學(xué)報， 2019， 33（9）： 1724-1733.

[18] YU X M， XIAO J J， CHEN S， et al. Metabolite signatures of diverse

Camellia sinensis tea populations [J/OL]. Nature Communications，

2020， 11（1）： 5586. https：//doi.org/10.1038/s41467-020-19441-1.

[19] JIN J Q， CHAI Y F， LIU Y F， et al. Hongyacha， a naturally caffeine-free tea plant from Fujian， China[J]. Journal of Agricultural

and Food Chemistry， 2018， 66（43）： 11311-11319.

[20] JIN J Q， JIANG C K， YAO M Z， et al. Baiyacha， a wild tea plant

naturally occurring high contents of theacrine and 3"-methyl-epigallocatechin gallate from Fujian， China[J]. Scientific Reports， 2020，

10（1）： 1-9.

[21] 陳濤林. 廣西元寶山一種特異茶飲植物的系統(tǒng)學(xué)鑒定與綜合評價研究[D]. 長沙： 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2020： 188-191.

[22] MENG X H， LIU C， FAN R， et al. Antioxidative flavan-3-ol dimers from the leaves of Camellia fangchengensis[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2018， 66： 247-254.

[23] MENG X H， ZHU H T， YAN H， et al. C-8 N-ethyl-2-pyrrolidinone

substituted flavan-3-ols from the leaves of Camellia sinensis var.

pubilimba[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2018，

66： 7150-7155.

[24] CHENG J， WU F H， WANG P， et al. Flavoalkaloids with a pyrrolidinone ring from Chinese ancient cultivated tea Xi-Gui[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2018， 66： 7948-7957.

[25] JIN J Q， YAO M Z， MA C L， et al. Natural allelic variations of TCS1

play a crucial role in caffeine biosynthesis of tea plant and its related

species[J]. Plant Physiology and Biochemistry， 2016， 100： 18-26.

[26] JIN J Q， YAO M Z， MA C L， et al. Association mapping of caffeine

content with TCS1 in tea plant and its related species[J]. Plant Physi-

ology and Biochemistry， 2016， 105： 251-259.

[27] OGINO A， TANIGUCHI F， YOSHIDA K， et al. A new DNA marker

cafless-TCS1 for selection of caffeine-less tea plants[J]. Breeding

Science， 2019， 69（3）： 393-400.

[28] ZHENG X Q， YE C X， KATO M， et al. Theacrine （1，3，7，9-tetramethyluric acid） synthesis in leaves of a Chinese tea， kucha （Camellia assamica var. kucha）[J]. Phytochemistry， 2002， 60（2）： 129-134.

[29] ZHANG Y H， LI Y F， WANG Y， et al. Identification and characterization of N9-methyltransferase involved in converting caffeine into non-stimulatory theacrine in tea[J]. Nature Communications， 2020， 11（1）： 251-253.

[30] JIN J Q， MA J Q， YAO M Z， et al. Functional natural allelic variants of flavonoid 3'，5'-hydroxylase gene governing catechin traits

in tea plant and its relatives[J]. Planta， 2017， 245： 523-538.

[31] JIN J Q， LIU Y F， MA C L， et al. A novel F3'5'H allele with 14 bp

deletion is associated with high catechin index trait of wild tea

plants and has potential use in enhancing tea quality[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2018， 66： 10470-10478.

[32] LIU Y J， ZHAO G F， LI X， et al. Comparative analysis of phenolic

compound metabolism among tea plants in the section Thea of the

genus Camellia[J/OL]. Food Research International， 2020， 135：109276. https：//doi.org/10.1016/J.FOODRES.2020.109276.

[33] BAI P X， WEI K， WANG L Y， et al. Identification of a novel gene encoding the specialized alanine decarboxylase in tea （Camellia sinensis） plants[J/OL]. Molecules， 2019， 24（3）： 540. http：//doi. org/10. 3390/molecules 24030540.

[34] DONG C X， LI F， YANG T， et al. Theanine transporters identified in tea plants （Camellia sinensis L.）[J]. The Plant Journal， 2020， 101（1）： 57-70.

[35] MA W H， KANG X， LIU P， et al. The analysis of transcription factor CsHB1 effects on caffeine accumulation in tea callus through CRISPR/Cas9 mediated gene editing[J]. Process Biochemistry， 2021， 101： 304-311.

基金項目：農(nóng)作物種質(zhì)資源保護與利用專項（2014NWB040），財政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程（CAASASTIP-2017-TRICAAS）資助。

作者簡介：金基強，男，副研究員，主要從事茶樹種質(zhì)資源與遺傳改良研究。*通訊作者，E-mail：liangchen@tricaas.com。