焦蟲病對牛胚胎生產(chǎn)的影響報告

劉紹貴, 和嘉榮, 雷 衡, 蘇華偉, 歐陽曉芳, 王春蘭, 李 鴻 楊亮宇,上官步敏, 石曉兵, 卿勝奎, 賈志虎, 董 紅

(1.云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，昆明 650212；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院， 昆明 650201；3.加拿大太平洋遺傳育種公司，北京100107；4.新疆畜牧科學(xué)院， 烏魯木齊 830091)

隨著現(xiàn)代肉牛產(chǎn)業(yè)在我國的高速發(fā)展，引進國外優(yōu)秀種牛改良國內(nèi)地方品種產(chǎn)生明顯的效果，創(chuàng)造了較好的經(jīng)濟效益和社會效益。然而多年來我國年年需要花巨資從發(fā)達國家引進活體種牛和胚胎，引進的良種數(shù)量很小，改良的牛群非常有限。根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2019年畜禽品種振興戰(zhàn)略，由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司組織，組建了豬、雞、牛、羊等7個公關(guān)組，構(gòu)建了1(企業(yè)牽頭)+(首席科學(xué)家)+N (科研院所、龍頭企業(yè)等)的產(chǎn)學(xué)研緊密聯(lián)和創(chuàng)新體系。該振興戰(zhàn)略旨在推動企業(yè)，充分發(fā)揮引進良種優(yōu)勢，擴大引進種質(zhì)的改良效果。目前我國優(yōu)秀種牛存欄量已達到一定的規(guī)模，并且引進良種通過不斷選育馴化，能更好地適應(yīng)引種地區(qū)的環(huán)境。利用胚胎生物技術(shù)，可以幾倍甚至幾十倍地擴大良種后代的數(shù)量，加速我國肉牛良種群體的發(fā)展。

云南省種畜繁育推廣中心于1996—1997年分兩批共引進131頭加系肉用型西門塔爾種母牛，通過多年的本土馴化和選育，目前種牛存欄已達到400余頭，是國家畜禽品種振興戰(zhàn)略“華西?！惫P(guān)組單位成員之一。本項目“充分利用優(yōu)秀種質(zhì)資源，加快良種牛擴群進程”選擇10-16月齡優(yōu)秀西門塔爾種母牛，通過超數(shù)排卵技術(shù)生產(chǎn)胚胎，充分利用母牛適配月齡前后期機會，生產(chǎn)2～3次胚胎，通過胚胎移植可獲得更多的優(yōu)秀種牛后代，大大提高種母牛的利用率，加快種牛的擴群進程；對體內(nèi)胚胎生產(chǎn)后的小母牛成年后的生殖狀況做進一步研究表明其受胎率泌乳情況與正常牛無明顯差異[1]。成功的胚胎生產(chǎn)受到許多內(nèi)部和外部因素的影響。焦蟲病呈地區(qū)性和季節(jié)性流行，主要因微小牛蜱地理分存很廣泛，廣泛分布于我國華北、華中、華南、和西南地區(qū)的大部分省區(qū)[2]。在放牧環(huán)境下，牛只極易受到蚊蟲的叮咬。該項目實施中，部分放牧牛只因受到牛蜱叮咬，犯上了焦蟲病。本文總結(jié)了焦蟲病對供體牛胚胎生長和胚胎質(zhì)量的影響，為南方山區(qū)地區(qū)在春夏季實施胚胎生產(chǎn)提供有益經(jīng)驗。

1 材料與方法

1.1 供體牛選擇

選擇10～16月齡優(yōu)秀供體種母牛41頭，其中21頭舍飼，20頭人工草場放牧。項目實施前所選擇的供體母牛均在7～8層膘之間，采食正常，體溫37.8 ℃～38.3 ℃之間，精神狀態(tài)良好。

1.2 實驗器材及試劑藥品

體視顯微鏡 、溫度控制胚胎冷凍儀、液氮罐、牛體溫計、輸精槍、胚胎移植槍、沖卵管、埋栓器、FHK過濾杯、培養(yǎng)皿(90 mm、35 mm、4孔)、集卵皿、鋼芯、擴宮棒、卵回收器、100 ml注射器、20 mL注射器、胚胎細管、等一次性耗材。

CIDR、FSH、PG、律胎素、VA、VE、沖配液、雌二醇、利多卡因(人用)、土霉素粉、靜松靈、沖卵液、保存液、冷凍液。

冷凍精液：美加系進口常規(guī)冷凍精液來自先馬士商貿(mào)(上海)有限公司。

1.3 實驗設(shè)計

實驗?zāi)康闹饕炞C放牧條件和舍飼條件下10～16月齡供體母牛生產(chǎn)胚胎質(zhì)量與數(shù)量的差異，實驗全過程兩組牛只每天進行兩次體溫檢測，同期發(fā)情實驗方案均采用CIDR+FSH+PG 16 d方案。放牧牛只埋栓、超排和人工授精后繼續(xù)放牧。

1.4 實驗過程

將所選擇的供體母牛隨機分成兩組，A組20頭采用舍飼，飼料配方：全株玉米青貯頭均13 kg、全株燕麥干草頭均3 kg、綠豆殼粉頭均2 kg、營養(yǎng)舔磚自由采食。B組20頭放牧于牧草豐富的人工草場，牧草種類多年生黑麥草、鴨茅草、白三葉和狗尾草，營養(yǎng)舔磚自由采食。飼養(yǎng)第8天開始進行同期發(fā)情處理并每天進行兩次體溫檢測；實驗埋栓后第8天上午拆栓，第9天上午肌注生源100 μg/頭，全天觀察發(fā)情并做準(zhǔn)確記錄。下午第一次配種，在穩(wěn)定發(fā)情后10～12 h，一支精液/頭，第10天上午第二次配種，在第一次配種后12 h，一支精液/頭；直至第16天沖胚。實驗過程中發(fā)現(xiàn)放牧牛只相繼出現(xiàn)體溫升高情況，經(jīng)診斷為焦蟲病并及時注射貝尼爾進行治療，注射后牛只均在12 h內(nèi)體溫恢復(fù)至38～38.5 ℃之間。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同飼養(yǎng)條件超排對比

不同飼養(yǎng)環(huán)境條件下牛只受到外界干擾因素不同，放牧條件下牛只受到天氣變化、外界溫度、飼料營養(yǎng)、年齡差別、對寄生蟲抵抗力等因素影響較大，通常情況下，牛蜱對經(jīng)常放牧牛只或原已經(jīng)發(fā)過焦蟲病的牛只影響較小，對從未放牧過的牛只影響較大；舍飼環(huán)境性對穩(wěn)定，飼料營養(yǎng)條件穩(wěn)定，外界對牛只影響較?。粌山M牛只體溫測量及胚胎生產(chǎn)情況(見表1)。

表1 放牧條件胚胎生產(chǎn)結(jié)果匯總

由表1可以看出，放牧條件下導(dǎo)致焦蟲病牛只生產(chǎn)胚胎總數(shù)136枚，頭均10.5枚，放牧條件下體溫正常牛只胚胎生產(chǎn)總數(shù)82枚，頭均11.7枚；放牧條件下發(fā)病牛只生產(chǎn)可用胚總數(shù)16枚，頭均1.23枚；放牧條件下未發(fā)病牛只生產(chǎn)可用胚胎總數(shù)47枚，頭均6.71枚；

由表2可以看出，舍飼條件下生產(chǎn)胚胎總數(shù)267枚，頭均13.35枚；舍飼條件下生產(chǎn)可用胚胎總數(shù)157枚，頭均7.85枚；綜合分析表1和表2可得：放牧條件下發(fā)病牛只與未發(fā)病牛只及舍飼條件下牛只胚胎生產(chǎn)總數(shù)比較差異均不顯著(P>0.05)，經(jīng)檢驗放牧條件下發(fā)病牛只生產(chǎn)可用胚胎總數(shù)和頭均生產(chǎn)可用胚胎數(shù)均明顯低于放牧條件下未發(fā)病牛只和舍飼條件牛只，差異均極顯著(P<0.01)。放牧條件下未發(fā)病牛只頭均生產(chǎn)胚胎數(shù)低于舍飼條件下牛只，但差異不顯著(P>0.05)。

表2 舍飼條件胚胎生產(chǎn)結(jié)果匯總

2.2 重復(fù)超排牛只兩次超排對比

在良好的飼養(yǎng)管理前提下，高強度重復(fù)超排以1個月為超排間隔，超排3～4次為宜[3]。為了檢驗牛只個體因素與焦蟲病的相關(guān)性，我們挑選出發(fā)病牛只14頭采用舍飼的方式進行第二次重復(fù)超排，舍飼條件下進行超排過程中出現(xiàn)其中一頭體溫升至38.5 ℃外，其余牛只體溫均正常；另外因該批次牛只選擇重復(fù)超排的時間僅僅間隔兩個月，部分牛只體況恢復(fù)還未達到理想狀態(tài)，一定程度上影響了超排的效果；超排情況見附表2。

由表3數(shù)據(jù)可以看出，放牧條件下頭均生產(chǎn)的可用胚胎為3.25枚，僅占頭均生產(chǎn)總胚數(shù)的23.21%，而舍飼條件重復(fù)超排牛只頭均可用胚為5.42枚，可用率為40.37%，重復(fù)超排的胚胎可用率高于第一次的結(jié)果，差異極顯著(P<0.01)，但生產(chǎn)的總胚胎數(shù)差別不大,牛重復(fù)超排3次對可用胚數(shù)影響不大[4]。充分表明這與第一次超排出現(xiàn)嚴重的焦蟲病狀有關(guān)。

利用兩組牛只生產(chǎn)的胚胎在相同的環(huán)境下，采用同一方案，采用同期發(fā)情處理受體牛47頭，利用放牧條件下生產(chǎn)的胚胎進行檢查移植30頭；采用同期發(fā)情處理受體牛34頭，利用舍飼條件下生產(chǎn)的胚胎進行檢查移植26頭；受體母牛受胎情況如表3。

表3 重復(fù)超排牛只胚胎生產(chǎn)結(jié)果比較

由表4可以看出，放牧條件下生產(chǎn)的胚胎移植受胎率為27%，舍飼條件下生產(chǎn)的胚胎移植受胎率為46%，放牧條件下生產(chǎn)的胚胎移植受胎率明顯低于舍飼條件下生產(chǎn)的胚胎移植受胎率(P<0.05);說明放牧條件下生產(chǎn)的胚胎受胎率低的原因可能是胚胎生產(chǎn)時供體牛發(fā)焦蟲病，胚胎質(zhì)量受到影響。為查找原因采用舍飼條件下生產(chǎn)的胚胎進行移植，在受體牛及飼養(yǎng)管理條件沒變的情況下移植26頭，受胎率正常。

表4 兩組牛只生產(chǎn)的胚胎移植受胎情況

3 討論

針對南方焦蟲病高發(fā)的特點，放牧條件下牛只極易感染焦蟲病，主要通過硬蜱傳播，引起宿主發(fā)發(fā)熱、貧血、黃疸、血紅蛋白尿、血尿等癥狀，如不及時治療，癥狀出現(xiàn)3～5 d后因各臟器衰竭而死亡[5]。當(dāng)然，放牧條件因外界環(huán)境復(fù)雜，氣溫變化較快，飼草供給營養(yǎng)不全面，晝夜溫差較大極易造成牛只感冒，這些都是影響胚胎生產(chǎn)的重要因素；因此夏季生產(chǎn)胚胎應(yīng)提前一周以上由放牧轉(zhuǎn)為舍飼，并立即進行體表驅(qū)蟲或藥物預(yù)防；應(yīng)避免供體牛超排前20 d內(nèi)打疫苗和體內(nèi)驅(qū)蟲，體表驅(qū)蟲至少應(yīng)提前一周并加強營養(yǎng)供給；建議在春冬焦蟲病低發(fā)季節(jié)多開展胚胎生產(chǎn)。

4 結(jié)論

放牧條件下牛只極易感染焦蟲病，而焦蟲病最明顯的臨床癥狀就是短期內(nèi)體溫上升，發(fā)焦蟲病牛只體溫最高可到42 ℃，當(dāng)發(fā)病牛只體溫升至39 ℃以上時，因此體溫升高極易造成胚胎早期退化或死亡，配種后也會導(dǎo)致精子早衰造成卵子不受精等情況，將嚴重影響可用胚胎的產(chǎn)量和質(zhì)量，大大降低了受體牛的受胎率。