慢性自發(fā)性蕁麻疹患者的血清抗幽門螺桿菌抗體研究

吳登艷，杜茂濤，譚燃景

重慶醫(yī)科大學(xué) 附屬第二醫(yī)院，重慶 400010

慢性蕁麻疹(Chronic urticaria，CU)是以反復(fù)發(fā)生的風(fēng)團(tuán)、瘙癢為主要表現(xiàn)的常見疾病，病程常遷延達(dá)6周以上．CU的病因復(fù)雜且隱匿，因此將大多數(shù)(>80%)無(wú)明顯誘因的CU歸為慢性自發(fā)性蕁麻疹(Chronic spontaneous urticaria，CSU)[1]．大量研究表明，CSU患者常同時(shí)伴隨幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染，經(jīng)規(guī)范抗Hp治療后，大部分患者的蕁麻疹癥狀可得到緩解或完全消退，這些研究均提示Hp感染和CSU發(fā)病有著非常密切的相關(guān)性[2-5]．

肥大細(xì)胞的激活是蕁麻疹發(fā)病的關(guān)鍵，它常由其胞膜外的FcεRI受體和IgE交聯(lián)觸發(fā)[1]．關(guān)于Hp相關(guān)體液免疫與CU發(fā)病機(jī)制的研究一直熱度不斷，Hizal等[6]發(fā)現(xiàn)血清抗Hp IgG陽(yáng)性的蕁麻疹患者自體血清皮膚試驗(yàn)陽(yáng)性率(40%)顯著高于血清抗Hp IgG陰性的蕁麻疹患者(14.3%)，而自體皮膚血清試驗(yàn)已被廣泛用于檢測(cè)與CSU發(fā)病密切相關(guān)的抗肥大細(xì)胞FcεRI抗體，Sun等[7]也發(fā)現(xiàn)抗Hp抗體陽(yáng)性和抗TGAb陽(yáng)性的CU患者血清抗FcεRI抗體陽(yáng)性率較對(duì)照組顯著增高．但也有一些研究表示Hp感染與致CSU發(fā)病的自身抗體的產(chǎn)生無(wú)關(guān)[8]．Hp是一種能長(zhǎng)期定植于胃腸道粘膜上皮細(xì)胞的微需氧革蘭氏陰性桿菌，宿主持續(xù)的帶菌狀態(tài)可產(chǎn)生特異性體液免疫，導(dǎo)致感染局部粘膜和全身抗Hp特異性抗體高表達(dá)，包括IgA，IgE和IgG類抗體．鑒于肥大細(xì)胞的胞膜外尚有多種正性效應(yīng)的受體，除了對(duì)IgE表現(xiàn)高親和力的FcεRI受體外，循環(huán)免疫復(fù)合物受體、低親和力的IgG受體、補(bǔ)體受體等的特異性結(jié)合也可促使肥大細(xì)胞活化．Acua等[9]對(duì)30例CU進(jìn)行檢測(cè)，其中血抗Hp IgG抗體陽(yáng)性率為60.0%，IgM陽(yáng)性率為33.3%；Galadari等[10]也發(fā)現(xiàn)血清抗Hp IgG，IgM抗體陽(yáng)性率在CU患者中顯著增高；Rostamy等[11]對(duì)43例CU患者血清特異性抗Hp-IgG，IgA，IgG聯(lián)合IgA進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率分別為72.1%，46.5%和44.18%，與40例正常對(duì)照(37.5%，40%，27.5%)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Liutu等[12]甚至用免疫印跡的方法在Hp中發(fā)現(xiàn)了IgE結(jié)合表位，提示Hp誘導(dǎo)的循環(huán)細(xì)菌特異性抗體可能在CU發(fā)病中起了重要作用．更早期的研究對(duì)比均伴Hp感染的CU及非CU患者，前組可檢出高滴度血清抗Hp-Lpp20蛋白的IgG，IgA抗體，這也是目前為止僅有的一項(xiàng)提出Hp具體蛋白成分特異性抗體參與CU發(fā)病的研究[13]．但到目前為止，Hp介導(dǎo)的體液免疫和CU/CSU發(fā)病的相關(guān)研究樣本數(shù)量較少，針對(duì)大樣本的CSU血清抗Hp和其Lpp20蛋白抗體水平的研究鮮有報(bào)道，迫切需要在CSU大樣本中調(diào)研Hp特異性抗體水平，并探討其可能的致病機(jī)制．本研究擬納入較大樣本的CSU患者及對(duì)照組，檢測(cè)各組血清抗Hp和抗Hp-Lpp20的IgE、IgG 和IgA水平，明確抗體分布情況，并探討Hp感染促發(fā)的體液免疫在CSU發(fā)病中的角色及可能的機(jī)制．

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 血清樣本、菌株、質(zhì)粒

CSU病例的血清樣本： 2014年7月-2015年1月在重慶大坪醫(yī)院就診并確診為CSU的211例患者，其中112例女性(排除妊娠)，99例男性，年齡為14-69周歲(38.79±4.22歲)．本研究納入的CSU： ① 均符合2018年歐洲變態(tài)反應(yīng)和臨床免疫學(xué)(EAACI)會(huì)議的CSU診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]；② 病程6周至7年不等，平均1.8年；③ 無(wú)用藥史，近一周否認(rèn)抗組胺治療，近一月否認(rèn)使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑；④ 否認(rèn)重大基礎(chǔ)疾病及遺傳、傳染病病史；⑤ 從未接受過規(guī)范的抗Hp治療．健康對(duì)照組的血清樣本： 同期大坪醫(yī)院體檢中心常規(guī)體檢結(jié)果正常的志愿者，對(duì)照組在年齡、性別等一般條件上與CSU組匹配．納入志愿者137例，其中73例女性(排除妊娠)，64例男性，年齡為18-66周歲(38.29±3.37歲)．納入的對(duì)照組： ① 無(wú)過敏性疾病病史；② 一般檢查無(wú)異常(二便、血常規(guī)，肝腎功)；③ 無(wú)重大基礎(chǔ)疾病及遺傳、傳染病病史；④ 從未接受過規(guī)范的抗Hp治療．EDTA抗凝管收集各受試者外周靜脈血，2 h內(nèi)靜置離心、收集血清．菌株和質(zhì)粒 Hp 26695標(biāo)準(zhǔn)株購(gòu)自美國(guó)菌種保藏中心 (ATCC)；BL21(DE3) 感受態(tài)大腸桿菌購(gòu)自北京天根公司；由本實(shí)驗(yàn)室制備的pET22b-Lpp20 重組質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入DH5α感受態(tài)大腸桿菌，氨芐西林(Amp)抗性[14]．

1.1.2 主要試劑

標(biāo)準(zhǔn)Hp-ELISA血清檢測(cè)試劑盒購(gòu)于北京貝爾生物公司；質(zhì)粒抽提試劑盒購(gòu)于Omega公司；細(xì)菌基因組DNA抽提試劑盒購(gòu)于北京達(dá)科為公司；Chelating Sepharose Fast Flow純化柱購(gòu)于Pharmacia 公司；生物素-山羊抗人IgE，IgA購(gòu)自英國(guó)AbD serotec公司；HRP-羊抗人IgG購(gòu)自北京中杉公司；HRP-鏈霉親和素購(gòu)自美國(guó)Abbkine公司；TMB顯色液購(gòu)于北京天根公司；BCA蛋白濃度試劑盒購(gòu)于Sigma公司；ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒購(gòu)于上海碧云天公司；N-端測(cè)序送中國(guó)科學(xué)院測(cè)定．

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 Hp感染陽(yáng)性率測(cè)定

用標(biāo)準(zhǔn)的Hp-ELISA試劑盒就CSU組和對(duì)照組Hp感染陽(yáng)性率(抗CagA及HSP聯(lián)合抗原的IgG抗體)進(jìn)行檢測(cè)．具體操作嚴(yán)格遵守說明書，酶標(biāo)儀450 nm讀取OD值．

1.2.2 血清特異性抗Hp全菌抗原IgG，IgE和IgA抗體檢測(cè)

(1) Hp的培養(yǎng)和菌體尿素裂解液的制備

① 細(xì)菌培養(yǎng)[14]： 將保種的Hp菌液接種于固體Hp培養(yǎng)基上37 ℃培養(yǎng)長(zhǎng)出的菌落，再次接種入布氏肉湯培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)擴(kuò)增到對(duì)數(shù)分裂期．② Hp尿素裂解液的制備： 菌液用磷酸鹽緩沖鹽溶液(PBS)重懸洗滌3次，離心后將菌體沉淀加入尿素溶液(8 M)中，充分吹打后即成，BCA法測(cè)蛋白質(zhì)量濃度．

(2) 抗Hp-IgG，IgE和IgA抗體水平測(cè)定

① 間接ELISA法測(cè)定抗Hp-IgG： 20 μg/mL的Hp尿素裂解液包被酶標(biāo)板，加入1∶40稀釋血清100 μL/孔，37 ℃孵育1 h，洗板后加入1∶3 000稀釋的HRP-羊抗人IgG 100 μL/孔，孵育1 h，洗板后拍干板中液體，加入顯色液避光顯色15 min，終止反應(yīng)，450 nm讀取OD值．每樣本設(shè)3復(fù)孔，同時(shí)設(shè)無(wú)血清對(duì)照孔．② 生物素-親和素ELISA法測(cè)定抗Hp-IgE/IgA： 將各血清1∶20稀釋后加樣入Hp尿素裂解液包被的酶標(biāo)板，37 ℃，1 h孵育后洗板，加入1∶10 000的生物素-山羊抗人IgE或 1∶2 000的生物素-山羊抗人IgA孵育1 h，洗板，加入1∶6 000 HRP-鏈霉親和素孵育35 min，加入TMB顯色液顯色20 min，終止反應(yīng)，450 nm讀取光密度(OD)值．同時(shí)設(shè)置復(fù)孔及無(wú)血清對(duì)照．

1.2.3 血清特異抗Hp-Lpp20-IgG、IgE和IgA抗體檢測(cè)

(1) Lpp20的表達(dá)和純化[14]

將pET22b-Lpp20-DH5α菌液培養(yǎng)擴(kuò)增后提取重組質(zhì)粒DNA并經(jīng)NdeI+XhoI雙酶切鑒定正確，再將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)BL21(DE3)中，構(gòu)建工程菌pET22b-Lpp20-BL21(DE3)并誘導(dǎo)質(zhì)粒表達(dá)．SDS-PAGE凝膠電泳法鑒定重組Lpp20蛋白的表達(dá)，鎳離子親和層析法純化蛋白，蛋白濃度測(cè)定(BCA)法測(cè)定濃度，并送中國(guó)科學(xué)院進(jìn)行N-端測(cè)序，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法鑒定Lpp20重組蛋白的抗原反應(yīng)性．

(2) 抗Lpp20-IgG，IgE，IgA抗體水平測(cè)定

取Lpp20以5 μg/mL的質(zhì)量濃度，將各血清1∶20稀釋加入包被好的酶標(biāo)版中，檢測(cè)各樣本中抗Lpp20-IgG，IgE，IgA抗體水平．同時(shí)設(shè)置復(fù)孔及無(wú)血清對(duì)照．

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用GraphPad Prism 5.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并作圖，Hp感染的陽(yáng)性率(%)行卡方檢驗(yàn)比較，p小于0.05判定為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；正態(tài)計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間進(jìn)行非配對(duì)t檢驗(yàn)比較，p小于0.05判定為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

2 結(jié) 果

2.1 CSU組和對(duì)照組Hp感染陽(yáng)性率

CSU組和對(duì)照組均進(jìn)行血清抗Hp-ELISA標(biāo)準(zhǔn)試劑盒檢測(cè)，結(jié)果表明，在CSU組中，抗Hp抗體陽(yáng)性率為73.46%(155/211)，對(duì)照組中陽(yáng)性率為51.82%(71/137)，兩組行卡方檢驗(yàn)(χ2=17.08，p=0.000)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)，可認(rèn)為CSU發(fā)病與Hp感染有密切的相關(guān)性．

1. Marker；2-6. 不同條件下的收集管；7. 目的蛋白．圖2 SDS-PAGE凝膠電泳檢測(cè)重組Lpp20蛋白的純化

表1 CSU組和對(duì)照組的血清抗Hp抗體ELISA標(biāo)準(zhǔn)試劑盒陽(yáng)性率

1. 誘導(dǎo)前的pET22b-Lpp20-BL21；2. IPTG誘導(dǎo)4 h；3. 空載體pET22b /BL21由IPTG誘導(dǎo)4 h．圖1 SDS-PAGE凝膠電泳檢測(cè)重組蛋白Lpp20的表達(dá)

2.2 Lpp20重組蛋白的表達(dá)、純化和鑒定

將誘導(dǎo)表達(dá)的pET22b-Lpp20-BL21用SDS-PAGE凝膠蛋白電泳進(jìn)行檢測(cè)，誘導(dǎo)4 h的工程菌在20 kDa附近有新的蛋白表達(dá)條帶，目的蛋白表達(dá)成功(圖1)．目的蛋白的純化使用鎳離子親和層析法，將不同設(shè)置參數(shù)下的收集液分別用SDS-PAGE電泳進(jìn)行檢測(cè)，其中目的蛋白純度可達(dá)90%，經(jīng)分子篩濃縮后BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)量濃度為2.2 mg/mL(圖2)．重組蛋白的N端測(cè)序?yàn)镹H2-Met-Lys-Asn-Gln-Val，F(xiàn)asta將此序列與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比較，與預(yù)期的Lpp20的N-端蛋白序列一致；重組Lpp20蛋白經(jīng)增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法鑒定具有良好的抗原反應(yīng)性(圖略)．

2.3 CSU組及對(duì)照組的血清抗Hp全菌抗原和抗Lpp20的 IgE，IgG及IgA水平

通過2.1的結(jié)果，將CSU組分為： ①CSU(+)Hp(+)組，計(jì)155例，②CSU(+)Hp(-)組，計(jì)56例；將對(duì)照組分為： ③CSU(-)Hp(+)組，計(jì)71例，④CSU(-)Hp(-)組，計(jì)66例．經(jīng)生物素-親和素ELISA法測(cè)定顯示，抗Hp-及抗Lpp20-IgE分別在①，②組間(0.082±0.002 vs 0.074±0.003，p1=0.076；0.085±0.003 vs 0.083±0.003，p2=0.622)；①，③組間(0.082±0.002 vs 0.078±0.003，p1=0.382；0.085±0.003 vs 0.082±0.005，p2=0.597)比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3a、圖3d)．

a. ①CSU(+)Hp(+)組抗Hp全菌-IgE(0.082±0.002)，vs②CSU(+)Hp(-)組(0.074±0.003)、vs③CSU(-)Hp(+)組(0.078±0.003)，t1=1.785，P1=0.076，t2=0.877，P2=0.382．b. ①組抗Hp全菌-IgG(1.053±0.022)，vs②組(0.890±0.028)、vs③組(1.222±0.034)，t1=4.256，P1=0.000，t2=4.312，P2=0.000，③組vs④CSU(-)Hp(-)組(0.816±0.020)，t3=10.20，P3=0.000．c. ①組抗Hp全菌-IgA(0.660±0.022)，vs②組(0.559±0.030)、vs③組(0.849±0.037)，t1=2.600，P1=0.01，t2=2.381，P2=0.019；③組vs④組(0.730±0.032)，t3=4.63，P3=0.000．d. ①組抗Lpp20-IgE(0.085±0.003)，vs②組(0.083±0.003)、vs③組(0.082±0.005)，t1=0.494，P1=0.622，t2=0.530，P2=0.597．e. ①組抗Lpp20-IgG(1.459±0.012)，vs②組(1.422±0.019)、vs③組(1.494±0.016)，t1=1.631，P1=0.105，t2=1.720，P2=0.087；③組vs④組(1.449±0.016)，t3=2.017，P3=0.046．f. ①組抗Lpp20-IgA(1.229±0.020)，vs②組(1.124 ±0.033)、vs③組(1.251±0.033)，t1=2.813，P1=0.005，t2=0.602，P2=0.548；③組vs④組(1.098±0.035)，t3=3.171，P3=0.002．H. pylori： 幽門螺桿菌．抗體水平用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示．圖3 CSU組及對(duì)照組血清抗Hp全菌-和抗Lpp20-IgE，IgG，IgA水平

經(jīng)間接ELISA法測(cè)定顯示，抗Hp-IgG在①，②組間(1.053±0.022 vs 0.890±0.028，p=0.000)，③，④組間(1.222±0.034 vs 0.816±0.020，p=0.000)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明Hp感染后，人群中血清抗Hp全菌-IgG水平顯著升高；①，③組間(1.053±0.022 vs 1.222±0.034，p=0.000)比較，①組抗體水平明顯低于③組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3b)．抗Lpp20-IgG在①，②組間(1.459±0.012 vs 1.422±0.019，p=0.10)，①，③組間(1.459±0.012 vs 1.494±0.016，p=0.087)比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但③，④組間(1.494±0.016 vs 1.449±0.016，p=0.046)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3e)．經(jīng)生物素-親和素ELISA法測(cè)定顯示，抗Hp-IgA在①，②組間(0.660±0.02 vs 0.559±0.030，p=0.01)，③，④組間(0.849±0.037 vs 0.730±0.032，p=0.000)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明Hp感染后，人群中血清抗Hp全菌-IgA水平顯著升高；①，③組間(0.660±0.02 vs 0.849±0.037，p=0.019)比較，①組水平低于③組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3c)．抗Lpp20-IgA在①，②組間(1.229±0.020 vs 1.124 ±0.033，p=0.005)，③，④組間(1.251±0.033 vs 1.098±0.035，p=0.002)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明Hp感染后人群中血清抗Hp-Lpp20-IgA水平顯著升高；但是①，③組間(1.229±0.020 vs 1.251±0.033，p=0548)比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3f)．

3 討 論

越來(lái)越多的研究揭示了CSU發(fā)病與Hp感染相關(guān)[2-5]，在EAACI最新發(fā)布的蕁麻疹診療指南中，已將檢測(cè)Hp感染情況納入CSU常規(guī)診療計(jì)劃中[1]．本研究首先用標(biāo)準(zhǔn)化Hp-ELISA試劑盒檢測(cè)了CSU人群和健康對(duì)照中Hp感染陽(yáng)性率(包括既往感染和現(xiàn)癥感染)，數(shù)據(jù)顯示CSU人群中Hp感染陽(yáng)性率明顯高于健康對(duì)照，證明Hp感染和CSU發(fā)病存在密切的相關(guān)性(表1)．蕁麻疹發(fā)生的關(guān)鍵病理機(jī)制是肥大細(xì)胞活化、脫顆粒，繼而合成和釋放炎性介質(zhì)，而其中最經(jīng)典的肥大細(xì)胞激活途徑是IgE與其胞膜外的FcεRI受體病理性結(jié)合，Hizal等[6]發(fā)現(xiàn)血清抗Hp IgG陽(yáng)性的蕁麻疹患者自體血清皮膚試驗(yàn)陽(yáng)性率(40%)顯著高于血清抗Hp IgG陰性的蕁麻疹患者(14.3%)，而自體皮膚血清試驗(yàn)已被廣泛用于檢測(cè)與CSU發(fā)病密切相關(guān)的抗肥大細(xì)胞FcεRI抗體，Sun等[7]也發(fā)現(xiàn)抗Hp抗體陽(yáng)性和抗TGAb陽(yáng)性的CU患者血清抗FcεRI抗體陽(yáng)性率較對(duì)照組顯著增高，提示Hp感染可能通過誘導(dǎo)產(chǎn)生外周血抗FcεRI抗體升高的途徑促進(jìn)蕁麻疹發(fā)生；但也有一些研究表示Hp感染和致CSU發(fā)病的自身抗體的產(chǎn)生無(wú)關(guān)．同時(shí)，肥大細(xì)胞表面仍分布有其它正性調(diào)節(jié)受體，如循環(huán)免疫復(fù)合物受體、IgG受體等，這些受體在特異性體液免疫亢進(jìn)時(shí)和相應(yīng)的配體結(jié)合，也能夠引起細(xì)胞活化，促進(jìn)后繼炎癥反應(yīng)[1]．感染Hp后的長(zhǎng)期帶菌狀態(tài)可使宿主產(chǎn)生持續(xù)性體液免疫，導(dǎo)致感染局部粘膜和循環(huán)抗Hp抗體水平增加，包括IgG，IgA 和IgE等，雖然這些抗體對(duì)于清除Hp定植作用甚微，卻可能在其他病理機(jī)制中發(fā)揮作用．如已有研究揭示，在伴隨Hp感染的CU病例中，血清抗Hp-IgG，IgA水平顯著高于伴隨Hp感染的非CU對(duì)照．Bakos等[13]的研究也發(fā)現(xiàn)，在伴隨Hp感染的CU受試組中，存在高滴度血清抗Hp-Lpp20-IgG及IgA，這些研究都提示Hp感染介導(dǎo)的體液免疫可能在某些CU發(fā)病中發(fā)揮了重要作用．但既往相關(guān)研究納入的樣本量極少，迄今未見關(guān)于大樣本CSU中Hp全菌及Lpp20血清特異性抗體的調(diào)研分析，因此本研究就CSU患者和健康對(duì)照中抗Hp全菌和其Lpp20血清特異性的IgE，IgG和IgA水平進(jìn)行調(diào)研，以期揭示Hp引起的體液免疫在CSU發(fā)病中所扮演的角色．

本研究通過對(duì)受試血清樣本細(xì)菌特異性IgE進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在各受試組中(CSU(+)Hp(+)組、CSU(-)Hp(+)組、CSU(+)Hp(-)組、CSU(-)Hp(-)組)，血清特異性抗Hp全菌-和Lpp20-IgE抗體均處于差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的低值水平(組間比較p均大于0.05)(圖3a、圖3d)，表明Hp感染不能有效激發(fā)機(jī)體的IgE型體液免疫，且所產(chǎn)生的低水平細(xì)菌特異性IgE與CSU發(fā)病無(wú)相關(guān)性．通過檢測(cè)受試血清中細(xì)菌特異性IgG發(fā)現(xiàn)，不論在CSU組還是對(duì)照組，感染Hp后均能引起外周循環(huán)中抗Hp全菌-IgG顯著升高(p<0.05)，但CSU(+)Hp(+)組中抗Hp全菌-IgG水平顯著低于CSU(-)Hp(+)組(p<0.001，圖3b)，揭示在CSU人群中，Hp感染后激發(fā)IgG型體液免疫的強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于無(wú)CSU人群，我們因此推測(cè)雖然感染Hp可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生高水平特異性的IgG抗體，但是這種體液免疫效應(yīng)并不是促進(jìn)CSU發(fā)病的重要病理機(jī)制．同樣的，不論在CSU組還是對(duì)照組中，感染Hp后血清中抗Lpp20-IgG水平均升高，但這種升高趨勢(shì)只在CSU(-)Hp(+)組中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且CSU(+)Hp(+)組血清抗Lpp20-IgG水平也低于CSU(-)Hp(+)組，但兩組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3e)，因此我們認(rèn)為Hp感染可以通過其Lpp20蛋白誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生較高水平的血清特異性IgG，雖然Lpp20是Hp中具備良好免疫原性的成分蛋白，但它卻不是Hp感染致CSU發(fā)病的重要病因．通過檢測(cè)受試血清細(xì)菌特異性IgA發(fā)現(xiàn)，不論在CSU組或?qū)φ战M，感染Hp后都會(huì)引起血清抗Hp全菌-和抗Lpp20-IgA顯著升高(p<0.05)，且CSU(+)Hp(+)組中血清特異性抗Hp全菌-IgA水平顯著低于CSU(-)Hp(+)組(p<0.05)，而這兩組間的抗Lpp20-IgA水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3c、圖3f)．我們推測(cè)，雖然感染Hp可激發(fā)宿主產(chǎn)生血清高水平特異性IgA，而Hp-Lpp20又是參與此反應(yīng)的具備良好免疫原性的成分，但是這種IgA型體液免疫反應(yīng)并非Hp感染相關(guān)性CSU的主要致病機(jī)制．至于CSU(+)Hp(+)組中抗Hp全菌-IgG，IgA水平較CSU(-)Hp(+)組更低(p<0.05)，我們推測(cè)是由于部分病例Hp感染后更向Th1型免疫反應(yīng)偏移[15]，表現(xiàn)為血清抗體水平低，而胃腸道粘膜細(xì)胞免疫增強(qiáng)使粘膜損傷更嚴(yán)重，細(xì)菌或其代謝產(chǎn)物可直接接觸胃腸道固有層肥大細(xì)胞，進(jìn)一步使其活化而誘發(fā)包括蕁麻疹在內(nèi)的炎癥反應(yīng)；或者也可能是CSU宿主在蕁麻疹炎癥狀態(tài)和Hp感染定植的相互作用下，能夠通過某些機(jī)制削弱Hp介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)．已有研究表明，CU患者血清sIL-2R水平與類胰蛋白酶水平顯著相關(guān)，提示CU患者T細(xì)胞活化與肥大細(xì)胞脫顆粒成正比，CU患者具有更亢進(jìn)的外周血T細(xì)胞活性[16]．

我們有理由推斷，雖然感染Hp可以導(dǎo)致宿主產(chǎn)生高水平的血清特異性IgG，IgA，并且Hp-Lpp20因具備良好的免疫原性；也在Hp感染觸發(fā)的體液免疫中占有重要權(quán)重，但在與Hp感染相關(guān)的CSU病程中，Hp細(xì)菌特異性抗體的產(chǎn)生并不是主要致病機(jī)制，也即Hp并不是通過誘發(fā)體液免疫促進(jìn)CSU發(fā)?。覀冋J(rèn)為，機(jī)體感染Hp后存在除體液免疫外的其他一些途徑促進(jìn)肥大細(xì)胞活化參與CSU發(fā)病．已經(jīng)有一些研究表明，某些Hp蛋白如VacA和NAP，可通過引起肥大細(xì)胞的胞內(nèi)鈣振蕩或G蛋白介導(dǎo)的MAPK，PI3K/Akt信號(hào)通路活化的方式直接激活人肥大細(xì)胞[17-18]，提示Hp感染后極有可能通過直接作用的方式活化粘膜固有層肥大細(xì)胞，促進(jìn)CSU發(fā)?。覀兊难芯砍晒哺尤娴貙?duì)Hp這種直接活化肥大細(xì)胞的方式做了補(bǔ)充[19]．

本研究揭示了Hp感染和CSU發(fā)病的相關(guān)性，首次在大樣本的CSU病例中調(diào)研了血清特異性抗Hp全菌-及Lpp20-IgE，IgG，IgA水平，論證了Hp血清特異性抗體并非Hp感染相關(guān)性CSU的病因．雖然我們的研究并未完全揭示Hp感染致CSU的發(fā)病機(jī)制，但卻給相關(guān)研究提供了新的思路，避免了某些研究資源的浪費(fèi)．