丙酸倍氯米松吸入氣霧劑體外一致性評(píng)價(jià)的研究

劉 飛，王海燕，馬春麗，趙 瑩

（1.山東省食品藥品審評(píng)認(rèn)證中心，山東 濟(jì)南 250014；2.泰安市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，山東 泰安271000；3.山東京衛(wèi)制藥有限公司，山東 泰安 271000；4.山東第一醫(yī)科大學(xué)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院），山東 泰安 271016）

隨著全球范圍內(nèi)的空氣污染和環(huán)境惡化，哮喘的發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)逐年上升態(tài)勢(shì)。對(duì)哮喘治療藥物的研發(fā)和推廣，不僅會(huì)使哮喘患者重獲新生，取得巨大的社會(huì)效益，且會(huì)帶來(lái)極大的利潤(rùn)空間，有專(zhuān)家預(yù)測(cè)，哮喘藥物市場(chǎng)是未來(lái)二十年內(nèi)最具有發(fā)展前途的十大藥品市場(chǎng)之一。而吸入療法被國(guó)際哮喘聯(lián)盟推薦為哮喘治療的首選，定量吸入氣霧劑（metered dose inhalation aerosol）因具有起效快、劑量小、副作用少、使用安全方便等優(yōu)點(diǎn)在吸入療法中占有舉足輕重的地位，其適用于 5 歲及以上哮喘患者的維持治療以及預(yù)防性治療[1-5]。

丙酸倍氯米松為人工合成的強(qiáng)效外用腎上腺皮質(zhì)激素類(lèi)藥物。丙酸倍氯米松氣霧劑具有：抗炎、抗過(guò)敏、止癢及減少滲出作用，能抑制支氣管滲出物，消除支氣管粘膜腫脹，解除支氣管痙攣；可以減輕和防止組織對(duì)炎癥的反應(yīng)，能消除局部非感染性炎癥引起的發(fā)熱、發(fā)紅及腫脹，從而減輕炎癥的表現(xiàn)；本品局部應(yīng)用，對(duì)鈉潴留及肝糖原異生作用很弱，也無(wú)雄性、雌性及蛋白同化激素樣的作用，對(duì)體溫和尿量也無(wú)明顯影響，吸入給藥對(duì)支氣管喘息的療效比口服更有效。

根據(jù) FDA《丙酸倍氯米松吸入氣霧劑指導(dǎo)草案》針對(duì)丙酸倍氯米松吸入氣霧劑（50 μg/撳 ×200 撳）體外研究進(jìn)行解析討論，包括參比制劑的遴選、單噴含量、空氣動(dòng)力學(xué)粒徑分布、噴霧形態(tài)、啟動(dòng)及再啟動(dòng)研究，并采用群體生物等效性統(tǒng)計(jì)學(xué)方式對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 儀器與材料

U3000 高效液相色譜儀（美國(guó) Thermo 公司），IMG0330D 激光成像儀（英國(guó) Oxford 公司）。

丙酸倍氯米松吸入氣霧劑（以色列 Teva UK limited 公司，規(guī)格：50 μg/撳 × 200 撳，批號(hào)：GQI048A、GRI075A、URB003A），丙酸倍氯米松吸入氣霧劑樣品（山東京衛(wèi)制藥有限公司，規(guī)格：50 μg/撳 × 200撳，批號(hào)：170203、170401、170402），乙腈（色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 參比制劑的遴選

《關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)參比制劑選擇等相關(guān)事宜的指導(dǎo)意見(jiàn)》的征求意見(jiàn)稿中的原則，因本品原研廠家未在國(guó)內(nèi)進(jìn)口注冊(cè)，選擇英國(guó) Teva UK Limited 的丙酸倍氯米松吸入氣霧劑作為參比制劑，該制劑為 2000 年 FDA 批準(zhǔn)上市，商品名為 QVAR，隨后 2009年 11 月在英國(guó)批準(zhǔn)上市。

2.2 單噴含量（single actuation content，SAC）

SAC 的試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)參比制劑和測(cè)試產(chǎn)品的數(shù)據(jù)結(jié)果，對(duì)其進(jìn)行群體生物等效性分析（即：人群使用 T 藥物與使用 R 藥物所得效應(yīng)，不僅其平均值相同，而且效應(yīng)的變異度相同，即兩總體的邊緣分布相同），判斷結(jié)果是否達(dá)到 95% 的置信上限，結(jié)果見(jiàn)表1。

Table 1 Comparison of SAC data of reference preparation and product (unit:g)表1 參比制劑與產(chǎn)品SAC數(shù)據(jù)對(duì)比(單位：μg)

由表1 數(shù)據(jù)判定，Hη = -4.54，結(jié)果一致，R 和 T 能達(dá)到 95% 的置信上限，數(shù)據(jù)一致性良好。

2.3 空氣動(dòng)力學(xué)粒徑分布（aerodynamic particle size distribution，APSD）

APSD 測(cè)定應(yīng)收集經(jīng)驗(yàn)證的含量靈敏度相當(dāng)?shù)淖钚∥霌鍞?shù)，在進(jìn)行測(cè)定之前應(yīng)做最小撳次的確認(rèn)試驗(yàn)。根據(jù)稀釋體積和含量方法靈敏度進(jìn)行試驗(yàn)確定收集撳次。丙酸倍氯米松吸入氣霧劑最終選擇收集 10 撳，并稀釋到 50 mL 體積。

選擇 ISM 進(jìn)行體外群體生物等效性分析。將多級(jí)撞擊器每一部分的藥物沉積和空氣動(dòng)力學(xué)直徑（mass median aerodynamic diameter，MMAD），幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差（geometric standard deviation，GSD）和細(xì)顆粒質(zhì)量（fine particulate matter，F(xiàn)PM）[6-7]一并提交作為支持 APSD 一致性的證據(jù)。丙酸倍氯米松吸入氣霧劑試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

Table 2 Comparison of APSD data of reference preparation and product表2 參比制劑與產(chǎn)品APSD數(shù)據(jù)對(duì)比

綜上所述，丙酸倍氯米松吸入氣霧劑 APSD 中 ISM 的 PBE 分析 Hη = -7.32，顯示測(cè)試產(chǎn)品的 ISM 與參比制劑具有一致性，圖表顯示 ISM 均值、FPM、MMAD、GSD 結(jié)果基本一致。

2.4 噴霧模式（spray pattern）

使用牛津激光成像儀，按照要求校準(zhǔn)按壓裝置，調(diào)節(jié)激光及相機(jī)的位置，使激光束與噴霧垂直。取本品 1 支，充分振搖，放置于按壓裝置內(nèi)，打開(kāi)激光，進(jìn)行試驗(yàn)，進(jìn)行橢圓度和面積的分析。噴出后的形狀試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2、3，表3。

噴霧模式 3 cm 特征圖片：

Fig.2 Comparison of spray patterns (reference preparation, self-made products)圖2 噴霧模式的比較（參比制劑、自制產(chǎn)品）

噴霧模式 6 cm 特征圖片：

Fig.3 Comparison of spray patterns (reference preparation, self-made products)圖3 噴霧模式的比較（參比制劑、自制產(chǎn)品）

Table 3 Data of reference formulations and product spray patterns表3 參比制劑與產(chǎn)品噴霧模式相關(guān)數(shù)據(jù)

Continued Table 3

綜上所述，參比制劑與測(cè)試產(chǎn)品噴霧模式的群體生物等效性分析分析結(jié)果，顯示一致性良好。

2.5 噴霧幾何學(xué)（plume geometry）

使用牛津激光成像儀，按照要求校準(zhǔn)按壓裝置，調(diào)節(jié)激光及相機(jī)的位置，調(diào)節(jié)激光及相機(jī)的位置，使激光束與噴霧垂直，取本品 1 支，充分振搖，放置于按壓裝置內(nèi)，打開(kāi)激光，進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)藥物和參比制劑的噴霧角度和寬度（基于對(duì)數(shù)變換）幾何平均數(shù)的比值，應(yīng)該在 90.0%～111.0%之間。噴霧幾何學(xué)特征圖片見(jiàn)圖4。

Fig.4 Comparison of spray form (reference preparation, self-made product)圖4 噴霧形態(tài)比較（參比制劑、自制產(chǎn)品）

丙酸倍氯米松吸入氣霧劑數(shù)據(jù)分析見(jiàn)表4。

Table 4 Comparison of angle and width data between reference preparation and self-made product表4 參比制劑與自制產(chǎn)品角度、寬度數(shù)據(jù)對(duì)比

由上述數(shù)據(jù)可知，參比制劑與自制產(chǎn)品噴霧角度和寬度幾何平均數(shù)的比值分別為 102.7% 和107.5%，在 90.0～111.0% 之間，表明兩者噴霧幾何學(xué)一致性良好。

2.6 啟動(dòng)與再啟動(dòng)（priming and repriming）

丙酸倍氯米松吸入氣霧劑為多劑量產(chǎn)品，可使用多日，為考察產(chǎn)品在開(kāi)封使用過(guò)程中噴出劑量穩(wěn)定性，進(jìn)行產(chǎn)品使用過(guò)程中啟動(dòng)/再啟動(dòng)試驗(yàn)。通過(guò)測(cè)定放置不同時(shí)間單劑量含量的變化進(jìn)行評(píng)判。

啟動(dòng)數(shù)據(jù)參照 SAC 的前期階段（B）的數(shù)據(jù)，再啟動(dòng)取已完成 SAC 后期（E）試驗(yàn)且放置14 d 的供試品，進(jìn)行 SAC 的檢測(cè)。丙酸倍氯米松吸入氣霧劑啟動(dòng)數(shù)據(jù)參照 SAC 前期（B）的數(shù)據(jù)，表5 和表6 為再啟動(dòng)測(cè)試數(shù)據(jù)。

Table 5 Sac data comparison of reference preparation and product (unit:μg) ～startup表5 參比制劑與產(chǎn)品SAC數(shù)據(jù)對(duì)比(單位:μg)～啟動(dòng)

Table 6 Comparison of restart data of reference preparation and test product表6 參比制劑和測(cè)試產(chǎn)品再啟動(dòng)數(shù)據(jù)對(duì)比

綜上所述，參比制劑與測(cè)試產(chǎn)品啟動(dòng)再啟動(dòng)數(shù)據(jù)群體生物等效性分析，顯示一致性良好。

3 討論

本文作者參照美國(guó) FDA 氣霧劑一致性評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則的要求，建立了丙酸倍氯米松氣霧劑體外研究的質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)體系和方法，具有以下指導(dǎo)意義。

a.首次參照 FDA 氣霧劑一致性評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則的要求，建立丙酸倍氯米松氣霧劑質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)的體外研究體系和方法。

首次建立完善、準(zhǔn)確、客觀的氣霧劑類(lèi)吸入制劑產(chǎn)品的仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)關(guān)鍵技術(shù)體系和評(píng)價(jià)模式，填補(bǔ)國(guó)內(nèi)空白。

b.氣霧劑噴射后藥物在一個(gè)極短的時(shí)間內(nèi)完成了釋放到霧形消散過(guò)程，藥物噴霧形態(tài)較難進(jìn)行表征。本次研究采用激光成像技術(shù)，通過(guò)高速拍照原理將整個(gè)過(guò)程均拍攝成高頻清晰的圖片，通過(guò)圖片重疊還原噴霧的整體形態(tài)，通過(guò)噴霧面積、噴霧橫截面橢圓度、噴霧的角度、噴霧的寬度指標(biāo)，將吸入氣霧劑噴射后的形態(tài)、分布面積等形態(tài)可進(jìn)行客觀、準(zhǔn)確的表征方法。

c.吸入氣霧劑具有使用藥物量少、通過(guò)定量閥門(mén)精準(zhǔn)定量，并通過(guò)拋射劑配合呼吸將藥物準(zhǔn)確遞送至肺部起效。藥物存在不同批次、不同閥門(mén)批次之間的批間變異性，以及批內(nèi)也存在不同閥門(mén)的批內(nèi)變異性，本次研究首次采用統(tǒng)計(jì)學(xué)原理及方法（群體生物等效性）對(duì)參比制劑及自研制劑的體外數(shù)據(jù)進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)。

體外群體生物等效性統(tǒng)計(jì)分析的研究方法是基于比較準(zhǔn)則，主要包括非剖面法和剖面法。非剖面法適用于通過(guò)含量、霧化狀態(tài)、啟動(dòng)及再啟動(dòng)等評(píng)價(jià)藥物劑量和噴霧含量的均勻度。而剖面法的應(yīng)用相對(duì)狹隘，僅僅適用于空氣動(dòng)力學(xué)粒徑分布。因此采用群體生物等效性分析方法可充分比較批間、批內(nèi)的變異性。

4 結(jié)論

FDA 要求自研產(chǎn)品與參比制劑 Q1 和 Q2 一致。

Q1（定性相同）：是指自制產(chǎn)品處方使用與參比制劑處方相同的輔料。

Q2（定量相同）：是指自制產(chǎn)品處方中使用的輔料濃度在參比制劑處方中使用濃度的 5% 以內(nèi)。

本品為溶液型吸入氣霧劑，輔料為無(wú)水乙醇、四氟乙烷。采用 GC 方法對(duì)無(wú)水乙醇的含量進(jìn)行測(cè)定；采用重量法對(duì)四氟乙烷的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明無(wú)水乙醇、四氟乙烷的濃度在參比制劑的 5% 以內(nèi)，自研產(chǎn)品與參比制劑 Q1 和 Q2 一致。