B7-H4與CR-1水平對非小細(xì)胞肺癌的預(yù)測價(jià)值

葉瑞萍，儲焰南

肺癌是較為常見的惡性腫瘤，我國人口基數(shù)大，每年肺癌新發(fā)病例及死亡病例均遠(yuǎn)超其他國家。我國腫瘤登記中心數(shù)據(jù)顯示，2014年新發(fā)肺癌78.15萬例，肺癌發(fā)病率位居男性惡性腫瘤第1位，女性惡性腫瘤第2位[1]。根據(jù)肺癌的生物形態(tài)特征，可將其分為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）和小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）。NSCLC約占肺癌總數(shù)的85%，大多數(shù)NSCLC患者在確診時(shí)已處于Ⅲ～Ⅳ期，同時(shí)可存在轉(zhuǎn)移病變，患者預(yù)后較差，5年生存率較低[2]。對NSCLC患者實(shí)現(xiàn)早期診斷，有助于提高患者5年生存率，改善患者預(yù)后。尋找特異性的腫瘤標(biāo)志物輔助診斷NSCLC已成為臨床研究熱點(diǎn)。負(fù)性共刺激分子B7同源體4（negative costimulatory molecule B7 homolog 4，B7-H4）屬于B7家族成員為一種免疫協(xié)同共刺激分子，在乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤組織中存在表達(dá)，在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃逸發(fā)揮重要作用[3]。NSCLC患者血清中B7-H4水平可以反映腫瘤TNM分期、組織分化及淋巴轉(zhuǎn)移情況，B7-H4可能參與了NSCLC的發(fā)生與發(fā)展，有望成為NSCLC診療的新靶點(diǎn)[4]?；グ┭苌L因子-1(carcinoembryonic gene Cripto-1，CR-1)屬于表皮生長因子家族成員，在胃癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中表達(dá)水平較高[5]。盡管糖類抗原125(CA125) 和細(xì)胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 segments，CYFRA21-1）為中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范（2015年版）推薦的肺癌常用診斷標(biāo)志物[6]，但其對NSCLC的早期診斷價(jià)值，有待進(jìn)一步研究。NSCLC具有高度特異性，同時(shí)在宿主的壓力下，腫瘤細(xì)胞也不斷發(fā)生基因突變，單一腫瘤標(biāo)志物對NSCLC的敏感性及特異性較差，對其早期診斷價(jià)值較為有限。本研究擬定量檢測NSCLC患者外周血中B7-H4、CR-1的水平，探討其對NSCLC的預(yù)測價(jià)值。

1 對象與方法

1.1 對象 收集2017年1月—2019年12月中國科學(xué)院合肥腫瘤醫(yī)院收治的75例NSCLC患者作為NSCLC組，其中男59例，女16例；平均年齡（55.26±14.12）歲；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期29例，Ⅲ～Ⅳ期46例；病理類型：鱗癌39例、腺癌35例、大細(xì)胞癌1例。同時(shí)收集綜合醫(yī)學(xué)部同期就診的113例肺部良性疾病(benign lung diseases，BLD)患者作為BLD組，其中男81例，女32例；平均年齡（54.27±16.15）歲；肺部感染62例，慢性阻塞性肺病43例，支氣管擴(kuò)張8例。2組患者的性別、年齡進(jìn)行比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) NSCLC組納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲者；②經(jīng)過病理及細(xì)胞學(xué)確診為NSCLC者；③為新診斷病例，未接受化療、靶向治療、免疫治療及手術(shù)治療者；④NSCLC分期參照國際抗癌聯(lián)盟的第七版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[7]。BLD組納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲者；②無其他原發(fā)性惡性腫瘤者；③未合并嚴(yán)重肝腎功能不全、自身免疫性疾病、精神系統(tǒng)疾病等對本項(xiàng)研究可能造成影響的疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者，嚴(yán)重心、肝、腎功能不全者。本研究經(jīng)中國科學(xué)院合肥腫瘤醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，入組患者或其直系親屬對本項(xiàng)研究知情，并簽署知情同意書。

1.3 方法 患者入院后，采集清晨空腹血標(biāo)本5～8 ml，室溫靜置30 min，2 000 r/min，5 ℃離心10 min后，分離吸取上清，置入－86 ℃超低溫冰箱待測。采用B7-H4 DuoSet定量檢測試劑盒（R&D Systems公司，美國）檢測患者血清B7-H4水平；采用CR-1 DuoSet定量檢測試劑盒（R&D Systems公司，美國）檢測CR-1水平；采用CA125定量檢測試劑盒（北京熱景生物技術(shù)有限公司，中國）檢測CA125水平；采用CYFRA21-1定量檢測試劑盒（北京熱景生物技術(shù)有限公司，中國）檢測CYFRA21-1水平。以上指標(biāo)檢測均采用酶聯(lián)免疫吸附法，利用酶標(biāo)儀（賽默飛公司，美國）測定OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各指標(biāo)水平。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察并比較2組患者血清B7-H4、CR-1、CA125及CYFRA21-1水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 22.0及Gaphpad Prism軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，2組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本間的均數(shù)比較，采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示。采用Pearson相關(guān)分析血清B7-H4、CR-1與CA125、CYFRA21-1含量的相關(guān)性。Logistic回歸分析評價(jià)發(fā)生NSCLC的危險(xiǎn)因素。繪制ROC評價(jià)B7-H4、CR-1及B7-H4聯(lián)合CR-1對NSCLC的預(yù)測價(jià)值，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清B7-H4、CR-1、CA125及CYFRA21-1水平比較 NSCLC組血清B7-H4、CR-1、CA125、CYFRA21-1水平均高于BLD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（表1）。

表1 2組血清B7-H4、CR-1、CA125及CYFRA21-1水平比較

2.2 NSCLC組血清B7-H4、CR-1與CA125及CYFRA 21-1水平的相關(guān)性分析 NSCLC組血清B7-H4水平與CA125、CYFRA21-1水平均呈正相關(guān)（P＜0.05）；血清CR-1水平與CA125、CYFRA21-1水平均呈正相關(guān)（P＜0.05）（表2）。

表2 非小細(xì)胞肺癌患者B7-H4、CR-1與CA125、CYFRA21-1水平的相關(guān)性分析[r值（P值）]

2.3 多因素Logistic回歸分析 以患者是否發(fā)生NSCLC（未發(fā)生=0，發(fā)生=1）作為因變量，將年齡（A＜60歲=0，≥60歲=1）、性別（男性=0，女性=1）、B7-H4（＜25.67μg/ml=0，≥25.67 0μg/ml=1）、CR-1（＜2.41 ng/ml=0，≥2.41 ng/ml=1）與CA125（＜21.85 U/ml=0，≥21.85 U/ml=1）及CYFRA21-1（＜2.56 ng/ml=0，≥2.56 ng/ml=1）納入多因素Logistic回歸模型，采用逐步進(jìn)入法進(jìn)行單變量多因素Logistic回歸分析（α入=0.10，α出=0.15）。結(jié)果顯示，B7-H4、CR-1、CA125和CYFRA21-1是發(fā)生NSCLC的危險(xiǎn)因素(P＜0.05)（表3）。

表3 發(fā)生NSCLC影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4 B7-H4、CR-1單獨(dú)及聯(lián)合檢測在NSCLC中的診斷價(jià)值 以患者發(fā)生NSCLC為標(biāo)準(zhǔn)，以患者B7-H4、CR-1水平為檢驗(yàn)變量，繪制ROC曲線（圖1）。B7-H4和CR-1聯(lián)合預(yù)測患者發(fā)生NSCLC的AUC值（0.984）大于B7-H4的AUC值（0.912）和CR-1的AUC值（0.933），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。B7-H4的最佳臨界值為25.65μg/ml，敏感性為93.81%，特異性為90.72%，CR-1的最佳臨界值為1.97 ng/ml，敏感性為94.71%，特異性為92.01%；其中B7-H4和CR-1聯(lián)合預(yù)測NSCLC的敏感性為95.64%，特異性為98.73%。

圖1 B7-H4、CR-1單獨(dú)及聯(lián)合檢測NSCLC發(fā)生的ROC曲線

3 討論

研究表明，在乳腺癌、肺癌、胃癌等腫瘤組織中均可發(fā)現(xiàn)B7-H4的異常表達(dá)，B7-H4的異常表達(dá)促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸[8-9]。此外，在受到腫瘤浸潤的血管內(nèi)皮細(xì)胞以及腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中均可發(fā)現(xiàn)B7-H4的異常表達(dá)[10]。CR-1為表皮生長因子家族成員，在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、腫瘤新生血管形成中發(fā)揮著重要作用，在結(jié)腸癌、乳腺癌、宮頸癌等腫瘤組織中高表達(dá)[11]。此外，CR-1與肺腺癌的分期、組織分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12]。本研究結(jié)果顯示，NSCLC組血清B7-H4、CR-1水平高于BLD組，表明血清B7-H4、CR-1水平升高，患者發(fā)生NSCLC的風(fēng)險(xiǎn)增加，與相關(guān)研究結(jié)果相符[13-14]；與BLD組比較，NSCLC組患者血清CA125、CYFRA21-1水平也較高，這與國內(nèi)其他研究[15-17]結(jié)果一致。

本研究NSCLC組血清B7-H4、CR-1水平與CA125、CYFRA21-1水平呈正相關(guān)（P＜0.05），而CA125、CYFRA21-1水平早期診斷NSCLC的敏感性、特異性并不強(qiáng)。B7-H4作為負(fù)性調(diào)節(jié)因子，促使T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫降低，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，在NSCLC患者腫瘤組織中B7-H4分布彌散[18]，而CR-1作為胚胎干細(xì)胞的標(biāo)志，在正常成人組織中并不出現(xiàn)，在肺癌腫瘤組織中存在高表達(dá)[19]。Park等[12]研究證實(shí)CR-1是預(yù)測早期NSCLC的腫瘤標(biāo)志物之一；李春仙等[20]也研究證實(shí)NSCLC患者血清B7-H4水平顯著增高，且與臨床分期相關(guān)，是一種較好的預(yù)測NSCLC的腫瘤標(biāo)志物，有助于NSCLC的診斷。在本研究中，NSCLC組均為確診病例，B7-H4在NSCLC患者腫瘤組織中廣泛分布，具有較高的敏感性；CR-1在正常組織中并不常見，但具有較高的特異性，二者聯(lián)合檢測能夠提高預(yù)測NSCLC的效能。研究結(jié)果還顯示，患者發(fā)生NSCLC時(shí)，血清B7-H4、CR-1水平可作為預(yù)測指標(biāo)，患者血清B7-H4和CR-1水平聯(lián)合預(yù)測NSCLC發(fā)生的敏感性、特異性及AUC較單一檢測高。

綜上所述，血清B7-H4、CR-1水平在預(yù)測NSCLC中具有重要意義，二者聯(lián)合檢測較單一腫瘤標(biāo)志物檢測更為敏感和高效，可為臨床診斷NSCLC提供參考依據(jù)。然而本研究為單中心研究，樣本數(shù)量較少，在進(jìn)一步研究中，應(yīng)當(dāng)擴(kuò)大樣本量，探討B(tài)7-H4、CR-1水平與NSCLC患者腫瘤分期、療效評價(jià)及預(yù)后的臨床價(jià)值，以期進(jìn)一步提高該類患者的早期診斷及治療成功率。