UPLC-MS/MS法測(cè)定涼皮湯料中的罌粟殼成分

◎ 陳小雪，喬 彬，王 斌

（喀什地區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000）

近年來(lái)，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注食品中非法添加劑的問(wèn)題，黨的十九大報(bào)告明確指出“實(shí)施食品安全戰(zhàn)略，讓人民吃得放心”。中央已經(jīng)把食品安全提高到戰(zhàn)略高度，但在食品中非法添加罌粟殼來(lái)吸引顧客的行為仍屢禁不止，長(zhǎng)期食用含罌粟殼的食品會(huì)對(duì)人的神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)造成危害[1-4]。受一些媒體宣傳的影響，大部分人們認(rèn)為罌粟殼主要存在于火鍋類底料中，但從案件的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可知[5]，被非法添加的食品種類除了火鍋類底料，熟食湯料、菜品調(diào)料和涼皮湯也是重災(zāi)區(qū)。特別是在新疆，涼皮作為大眾喜歡的快餐美食，不法商販常會(huì)利用罌粟殼的成癮特性，在涼皮湯汁中非法添加罌粟殼，使消費(fèi)者成癮，以此來(lái)增加客源。因此，建立快速篩查涼皮中非法添加罌粟殼的方法就顯得格外重要。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

涼皮樣品（100份），隨機(jī)購(gòu)自喀什市的不同飯店。

嗎啡、罌粟堿、那可丁，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；可待因、蒂巴因，購(gòu)自Stanford Analytical Chemicals inc；嗎啡-D3、可待因-D3，購(gòu)自Sigma公司；乙腈、甲醇，均為色譜純，購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司）；甲酸銨、無(wú)水硫酸鎂，購(gòu)自麥克林生化科技公司）；甲酸，色譜純，購(gòu)自天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；水為Milli-Q純水系統(tǒng)制得的高純水。

1.2 儀器

TSQ Quantival and Endura液相質(zhì)譜聯(lián)用儀、MS205DU十萬(wàn)分之一電子天平、Elmasonic S 100 H超聲波清洗器、Universal 320R高速冷凍離心機(jī)。

1.3 溶液制備

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液

分別精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品適量，用0.5%甲酸甲醇溶液溶解，配制成100 μg·mL-1的單一成分標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，于-18 ℃下冷凍保存。取上述單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈稀釋成1 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)混合工作液。取適量嗎啡-D3和可待因-D3標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水稀釋成10 μg·mL-1同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液。

1.3.2 供試品溶液精密稱取涼皮湯汁2 g于50 mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入100 μL同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液（10 μg·mL-1）， 渦旋振蕩30 s，準(zhǔn)確加入15 mL乙腈，密封，渦旋振蕩1 min，超聲處理30 min，取出，加入6 g無(wú)水硫酸鎂和1.5 g無(wú)水醋酸鈉的混合粉末，立即渦旋振蕩 2 min，使吸附樣品中的全部水分，以8 000 r·min-1離心5 min，取上清液，作為供試品溶液。

1.4 色譜-質(zhì)譜條件

1.4.1 色譜條件

BEH HILIC柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；柱溫35 ℃；流速0.3 mL·min-1；進(jìn)樣體積5 μL；流動(dòng)相：含0.1%甲酸的乙腈（A）-含0.1%甲酸的 0.01 mol·L-1甲酸銨溶液（B）；梯度洗脫：0～1 min， 95%A；1～6 min，85%A；6～8 min，85%A； 8～8.1 min，95%A；8.1～10 min，95%A。

1.4.2 質(zhì)譜條件

電離方式：電噴霧離子源；電離模式：正離子掃 描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）；霧化溫度： 350 ℃；離子傳輸管溫度：350 ℃；毛細(xì)管電壓3 500 V；鞘氣：35（Arb）；輔助氣：10（Arb）。7種化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見(jiàn)表1。

表1 7種化合物質(zhì)譜參數(shù)表

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱選擇

考察了4種不同高效液相色譜柱對(duì)各組分的分離效果，結(jié)果表明，BEH HILIC色譜柱（2.1 mm×100 mm， 1.7 μm）流動(dòng)相選0.1%甲酸的乙腈-0.1%甲酸的 0.01 mol·L-1甲酸銨溶液分離效果最好，且峰形更佳；Thermo C18柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）流動(dòng)相選0.1%甲酸的甲醇-0.1%甲酸的0.01 mol·L-1甲酸銨溶液分離效果較好；CAPCELL PAK ST色譜柱（2.0 mm× 100 mm，5 μm）、CAPCELL PAK CR色譜柱（2.0 mm× 100 mm，5 μm）分離效果一般。

2.2 混合標(biāo)品線性關(guān)系考察

取標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，以罌粟堿、那可丁和蒂巴因的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，罌粟堿、那可和蒂巴因的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，外標(biāo)法定量；以嗎啡和可待因的峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)，嗎啡和可待因的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，內(nèi)標(biāo)法定量[5]。5種化合物的回歸方程及線性范圍見(jiàn)表2。

表2 5種化合物線性方程表

2.3 單一標(biāo)品檢出限與線性范圍

試驗(yàn)還考察了單一標(biāo)準(zhǔn)品的檢出限和線性范圍，單一標(biāo)準(zhǔn)品罌粟堿、那可丁、蒂巴因0.1 ng·mL-1檢出，嗎啡、可待因1 ng·mL-1檢出，1～1 000 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 0，5種標(biāo)準(zhǔn)品混合濃度100 ng·mL-1以上定量結(jié)果較好。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)工作溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算嗎啡、罌粟堿、那可丁、可待因、蒂巴因、嗎啡-D3和可待因-D3峰面積的RSD（n=6），分別為3.4%、3.2%、2.0%、5.7%、4.6%、7.9%和4.1%。

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取陰性樣品6份，加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量（1 μg·mL-1），按照“1.3”項(xiàng)下方法制備，作為回收率供試品溶液，按“1.4”項(xiàng)下色譜-質(zhì)譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果嗎啡、罌粟堿、那可丁、可待因、蒂巴因的平均加樣回收率（n=6），分別為71.2%、85.3%、80.7%、73.2%和73.0%，RSD分別為7.2%、4.6%、7.6%、6.0%和7.9%。

2.6 樣品測(cè)定

100批涼皮樣品，分別按照“1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，“1.4”項(xiàng)下色譜-質(zhì)譜條件進(jìn)行測(cè)定，如果供試品中色譜峰的保留時(shí)間與混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中某一組分保留時(shí)間一致（變化范圍在±2.5%），試樣中定性離子對(duì)的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)?shù)幕旌蠈?duì)照品溶液的相對(duì)豐度一致（相對(duì)豐度偏差不超過(guò)規(guī)定的范圍），則可判定為試樣中存在該組分[6]。100批涼皮中2批檢出罌粟堿，陽(yáng)性率2%。

3 結(jié)論與討論

針對(duì)在食品中添加罌粟殼犯罪的原因進(jìn)行分析可知，線索收集難，添加罌粟殼的食品沒(méi)有特殊的顏色和味道，不但消費(fèi)者很難辨別，有時(shí)甚至可以瞞過(guò)監(jiān)管部門(mén)的檢查。調(diào)查取證難。罌粟殼的添加方式愈發(fā)隱蔽，一些案件也由于證據(jù)不全、證據(jù)受損或程序違法而難以進(jìn)入刑事程序。為有效打擊這種非法添加行為，保障飲食安全，本試驗(yàn)采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，通過(guò)檢測(cè)設(shè)定好的特征離子對(duì)的方式來(lái)進(jìn)行定性及定量檢測(cè)，與常規(guī)方法相比，該法特異性高，受樣品中其他物質(zhì)的干擾小，能快速準(zhǔn)確的篩查特定物質(zhì)，充分發(fā)揮食品快檢分析在監(jiān)管執(zhí)法中的重要作用，提高監(jiān)管工作的針對(duì)性，為更好打擊不法行為提供可靠的技術(shù)保障。