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    濰縣蘿卜中花青素的提取工藝及提取液的 抗氧化活性研究

    2021-09-14 11:58:48黃鈺茹魏銘蕓孫明宏武文濤楊延存
    現(xiàn)代食品 2021年13期
    關(guān)鍵詞:濰縣果膠酶花青素

    ◎ 黃鈺茹,魏銘蕓,張 妍,孫明宏,武文濤,楊延存

    (青島工學(xué)院,山東 青島 266300)

    濰縣蘿卜是產(chǎn)于山東省濰縣的一種優(yōu)良蘿卜,也被稱做濰坊蘿卜,它含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和微量元素,也被叫做“水果蘿卜”和“維他命蘿卜”,直接食用時(shí)會(huì)給人一種芳香脆甜、多汁微辣的感覺[1-2]。據(jù)《醫(yī)療本草》的記載,濰縣蘿卜具有“益五臟、祛痰止咳、治肺吐血、溫中順氣”的作用[3]。自由基清除以及抗氧化能力是類黃酮物質(zhì)的主要生理功能,花青素是黃酮類的一種,其抗氧化活性分別是維生素E的50倍和維生素C的20倍[4]。此外,花青素有抗衰老等多種生理功能[5-7],也可以作為著色劑以及食物色素[8-9]。

    本研究以濰縣蘿卜為原料,采用酶解法提取花青素,探討酶解法提取條件,為濰縣蘿卜中花青素的提取和利用提供理論依據(jù);同時(shí)測(cè)定濰縣蘿卜可食用部分的抗氧化能力,進(jìn)而為濰縣蘿卜資源的綜合開發(fā)利用奠定基礎(chǔ),提高經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    新鮮濰縣蘿卜(網(wǎng)購),選用成熟、無損傷、果色均勻的果實(shí)。

    1.2 試劑與儀器

    1.2.1 試劑

    纖維素酶(和氏璧生物科技有限公司)、果膠酶(南寧龐博生物工程有限公司)、乙醇溶液(天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)、鹽酸(煙臺(tái)三和化學(xué)試劑有限公司)、三吡啶三嗪(TPTZ)(南京都萊生物技術(shù)有限公司)和硫酸亞鐵(天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)。

    1.2.2 主要儀器與設(shè)備

    101-3A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)、LDZ4-08電動(dòng)離心機(jī)(上海梅香儀器有限公司)、電子天平(上海菁海儀器有限公司)、 722型可見分光光度計(jì)、數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4(常州市華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 濰縣蘿卜中花青素的提取方法

    將新鮮的濰縣蘿卜清洗干凈,均勻切成約2 mm的薄片,65 ℃烘干至質(zhì)量達(dá)到恒重,粉碎并過篩,在常溫避光條件下保存。稱取干燥濰縣蘿卜粉1.0 g,用100 mL的純凈水溶解并加入復(fù)合酶(纖維素酶-果膠酶)進(jìn)行酶解,調(diào)節(jié)酶解條件,過濾除去濾渣,用離心機(jī)在3 000 r · min-1條件下離心10 min后,吸取上清液,利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除液體,用純凈水溶解花青素并定容至100 mL,測(cè)定花青素含量[10]。

    1.3.2 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    取濰縣蘿卜粉,分別對(duì)提取過程中的復(fù)合酶(纖維素酶∶果膠酶)比例(3∶1、2∶1、1∶1、1∶2和1∶3)、復(fù)合酶濃度(0.01 mg·g-1、0.02 mg·g-1、 0.03 mg·g-1、0.04 mg·g-1和0.05 mg·g-1)、酶 解 溫 度 (35 ℃、40 ℃、45 ℃、50 ℃和55 ℃)、酶解時(shí)間 (30 min、60 min、90 min、120 min和150 min)等因素進(jìn)行調(diào)整,測(cè)定濰縣蘿卜中花青素提取率,確定各提取條件對(duì)結(jié)果的影響。

    1.3.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,選取復(fù)合酶比例、酶用量、酶解時(shí)間3因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。以花青素提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo),設(shè)計(jì)L9(33)正交試驗(yàn),優(yōu)化濰縣蘿卜花青素的提取工藝條件。

    1.3.4 濰縣蘿卜花青素提取液的抗氧化活性的測(cè)定

    參考文獻(xiàn)中鐵離子抗氧化法(FRAP)測(cè)定濰縣蘿卜花青素提取液的抗氧化活性[11]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 復(fù)合酶質(zhì)量比對(duì)濰縣蘿卜花青素提取量的影響

    由圖1可以看出,濰縣蘿卜中花青素的提取量最高是在復(fù)合酶中的纖維素酶與果膠酶質(zhì)量比為2∶1時(shí),為3.19 mg·g-1;提取量最低時(shí)復(fù)合酶質(zhì)量比為 1∶3,為2.48 mg·g-1。由試驗(yàn)結(jié)果可以得出,在花青素的提取中纖維素酶起到的作用較大,最佳復(fù)合酶質(zhì)量比為纖維素酶∶果膠酶為2∶1。

    圖1 復(fù)合酶質(zhì)量比對(duì)濰縣蘿卜花青素提取量的影響圖

    2.2 復(fù)合酶用量對(duì)濰縣蘿卜花青素提取量的影響

    如圖2所示,當(dāng)復(fù)合酶用量為0.01~0.03 mg·g-1時(shí),濰縣蘿卜中花青素的提取量隨著復(fù)合酶用量增加而逐漸增加,當(dāng)復(fù)合酶的用量大于0.03 mg·g-1時(shí),濰縣蘿卜中花青素的提取量隨著酶用量的增加而逐漸減少,在0.03 mg·g-1時(shí)提取量達(dá)到最大值4.05 mg·g-1。造成這一現(xiàn)象的原因可能是果膠酶與纖維素酶共同作用,在合理的配比下,對(duì)細(xì)胞壁的破壞比較徹底,有效地促進(jìn)了細(xì)胞內(nèi)容物的析出,同時(shí)促進(jìn)了花青素的提取效率。因此,提取花青素最佳酶用量為0.03 mg·g-1。

    圖2 復(fù)合酶用量對(duì)濰縣蘿卜花青素提取量的影響圖

    2.3 酶解時(shí)間對(duì)濰縣蘿卜花青素提取量的影響

    如圖3所示,當(dāng)酶解時(shí)間為30~90 min時(shí),濰縣蘿卜花青素的提取量隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)而增加;當(dāng)時(shí)間大于90 min時(shí),花青素的提取量隨時(shí)間的延長(zhǎng)而減少。酶解時(shí)間的延長(zhǎng),多糖等大分子固形物溶出并與花青素形成的分子復(fù)合物以及花青素的氧化,可能會(huì)導(dǎo)致花青素含量出現(xiàn)下降現(xiàn)象。因此可以得出酶解時(shí)間在90 min時(shí)花青素的提取效果最好,提取量達(dá)到4.22 mg·g-1。

    圖3 酶解時(shí)間對(duì)濰縣蘿卜花青素提取量的影響圖

    2.4 酶解溫度對(duì)濰縣蘿卜花青素提取量的影響

    圖4 中可以看出,隨著酶解溫度的升高,濰縣蘿卜花青素的提取量逐漸增加,當(dāng)酶解溫度為50 ℃時(shí),花青素的提取量達(dá)到最高,為4.13 mg·g-1,溫度高于50 ℃時(shí),花青素的提取量開始減少。研究發(fā)現(xiàn),果膠酶和纖維素酶的最佳活性溫度均為50 ℃,因此當(dāng)酶解溫度高于50 ℃時(shí),酶活性下降,所以50 ℃是酶的最佳活性溫度。

    圖4 酶解溫度對(duì)濰縣蘿卜花青素提取量的影響圖

    2.5 正交試驗(yàn)優(yōu)化

    通過對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析,選擇了復(fù)合酶的質(zhì)量比(纖維素酶∶果膠酶)、復(fù)合酶用量和酶解時(shí)間3因素3水平的正交試驗(yàn),對(duì)濰縣蘿卜花青素提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。正交因素與水平如表1所示,結(jié)果如表2所示。通過分析正交試驗(yàn)結(jié)果,根據(jù)極差R的大小可以得出復(fù)合酶的用量對(duì)濰縣蘿卜花青素的提取的影響較大;按照k的大小可得出最佳提取條件為A2B2C2。此組合不在正交試驗(yàn)組合中,需進(jìn)行試驗(yàn),驗(yàn)證結(jié)果測(cè)得在該條件下花青素的提取量為4.23 mg·g-1, 高于正交試驗(yàn)各組中的最佳值,因此在A2B2C2提取條件下最佳,即纖維素酶與果膠酶的比例為2∶1,復(fù)合酶用量為0.03 mg·g-1,酶解時(shí)間在90 min。

    表1 正交試驗(yàn)因素水平表

    表2 正交結(jié)果分析表

    2.6 濰縣蘿卜花青素提取液抗氧化能力測(cè)定

    對(duì)濰縣蘿卜可食用部位(根皮、根肉)的花青素提取液進(jìn)行FRAP抗氧化能力檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果表明,在最優(yōu)提取條件下提取的根皮花青素提取液的抗氧化能力見圖5。

    圖5 FRAP測(cè)定結(jié)果圖

    3 結(jié)論

    本研究以濰縣蘿卜為原料,確定其中花青素提取的最優(yōu)提取條件并探究花青素提取液的抗氧化活性,研究結(jié)果顯示:當(dāng)酶解溫度為50 ℃、復(fù)合酶用量為 0.03 mg·g-1、纖維素酶和果膠酶質(zhì)量比為2∶1、酶解時(shí)間為90 min時(shí)濰縣蘿卜中花青素提取量最高。用鐵離子抗氧化法(FRAP)測(cè)定濰縣蘿卜根肉和根皮的花青素提取液的抗氧化性能,根皮提取液的抗氧化能力為10.00 μmol·g-1,根肉提取液的抗氧化能力 為2.50 μmol·g-1。

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