新型吲哚類SIRT2 抑制劑的設(shè)計(jì)、合成及生物活性研究

王麗姣，宋 陳

（西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川 成都 610039）

組蛋白修飾是蛋白翻譯后修飾的重要修飾方式之一，包括乙?；?、甲基化、磷酸化修飾等。組蛋白乙酰化修飾受組蛋白乙?；福℉AT）和組蛋白去乙?；福℉DAC）共同調(diào)控，維持正常的生理功能。Surtuin（SIRT）蛋白，共包含7 種亞型，即SIRT1-SIRT7，是一種非典型去乙?；?，其催化底物去?；瘷C(jī)制與典型HDAC 不同，依賴NAD+的直接參與[1?3]。其中SIRT2 是一種存在于細(xì)胞質(zhì)，但在有絲分裂期間可以穿梭于細(xì)胞核的重要亞型。有研究[4?6]表明，SIRT2 的異常與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，因此，該靶點(diǎn)可作為相關(guān)疾病的潛在治療靶點(diǎn)，SIRT2 抑制劑有望用于相應(yīng)疾病的治療。

1 已報(bào)道的SIRT2 抑制劑

許多科研小組報(bào)道了一系列的SIRT2 小分子抑制劑[7?8]。如圖1 所示，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特征可將SIRT2 抑制劑分為多肽類底物類似物及非肽類小分子抑制劑兩大類。多肽類抑制劑可能存在理化性質(zhì)不好，易被代謝等成藥性相對(duì)較差等缺點(diǎn)。非肽類小分子抑制劑又可分為以下9 類：煙酰胺類、羥基萘醛類、3-苯磺酰胺基苯基類、吲哚衍生物類、3,5-二取代-1,2,4-噁二唑、苯并吡喃酮、磺酰胺及磺酸類、氨基酸類、酰胺類等[9?10]。

圖1 已報(bào)道的部分SIRT2 抑制劑結(jié)構(gòu)及IC50 值

目前，對(duì)SIRT2 小分子抑制劑的研究報(bào)道雖然較多，但大部分分子都面臨著各種各樣的問題，真正具有高活性、高選擇性及理化性質(zhì)好的SIRT2小分子抑制劑分子卻較少。

本文前期研究獲得了一個(gè)具有潛在的SIRT2抑活性的化合物N-（1-芐基-1H-吲唑-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（14a），在100 和10 μmol·L?1濃度下，抑制率分別為70%和36%。本文從化合物14a 出發(fā)進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，采用生物電子等排體原理，設(shè)計(jì)并合成了一系列新型吲哚類新骨架的目標(biāo)化合物。

2 吲哚類目標(biāo)化合物的設(shè)計(jì)

前期研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)Linker 為2-氧基-乙酰胺，且芳香環(huán)為萘環(huán)時(shí)，化合物（14a）對(duì)SIRT2 的抑制活性有顯著提高，在100 和10 μmol·L?1與陽(yáng)性對(duì)照4 活性相當(dāng)（73%，31%），抑制率分別為70%和36%。因此，本文在化合物14a 基礎(chǔ)上進(jìn)行改構(gòu)，萘環(huán)和Linker2-氧基乙酰胺繼續(xù)保留，根據(jù)生物電子等排體原理將吲唑環(huán)的2 位N 原子用C 原子代替而成吲哚環(huán)，然后再在吲哚環(huán)1-N 上引入疏水基團(tuán)，從而設(shè)計(jì)合成了一系列新型吲哚類目標(biāo)化合物（見圖2）。

圖2 目標(biāo)化合物的設(shè)計(jì)

3 目標(biāo)化合物的合成

吲哚類目標(biāo)化合物的合成路線如圖3 所示。由逆合成分析可知，合成目標(biāo)化合物的其中一個(gè)原料為4-硝基吲哚，其與不同取代基的芐溴發(fā)生取代反應(yīng)，與萘氧基乙酸縮合成酰胺，再將硝基還原成氨基得到不同取代胺的中間體。各種取代胺的中間體與另一個(gè)原料萘氧基乙酸縮合成不同的酰胺，最終得到不同的目標(biāo)化合物。該設(shè)計(jì)路線不僅顯著降低了實(shí)驗(yàn)成本，還提高了實(shí)驗(yàn)效率。因此，本文的合成路線即為先合成兩個(gè)片段（即羧酸片段和氨基片段），再將其拼合成目標(biāo)化合物。合成羧酸片段是用1-萘酚（19）和2-溴乙酸乙酯（20）在碳酸鉀作敷酸劑，乙腈作溶劑下發(fā)生親核反應(yīng)得到化合物21，再將化合物21 在乙醇和水，堿性環(huán)境下水解生成中間體片段1-萘氧基乙酸(22)。4-硝基吲哚（23）與不同結(jié)構(gòu)的疏水基團(tuán)(苯環(huán)，帶有取代基苯環(huán)，噻吩)24 同樣在K2CO3作敷酸劑，N,N-二甲基甲酰胺（DMF）作溶劑下發(fā)生親核反應(yīng)得到化合物25，再經(jīng)鐵粉將硝基還原成氨基分別得到化合物26。

圖3 吲哚類目標(biāo)化合物27f-27o 的合成路線

羧酸化合物22 和游離的氨基化合物26 在2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU），N,N-二異丙基乙胺(DIEA)，二氯甲烷（DCM）中縮合成最終目標(biāo)化合物27f-27o。結(jié)構(gòu)式如表1 所示。

最終合成了10 個(gè)目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)如表1 所示，所有的化合物均通過了柱純化或重結(jié)晶并用HPLC 鑒定了其純度，純度在95%以上，達(dá)到了測(cè)試生物活性的純度要求，所有的目標(biāo)化合物都進(jìn)行1H-NMR、13C-NMR 和MS 的結(jié)構(gòu)表征。

表1 化合物27f-27o 的結(jié)構(gòu)

4 抑制活性測(cè)試與構(gòu)效關(guān)系討論

化合物27f-27o 的結(jié)構(gòu)式如圖4 所示。吲哚類化合物27f-27o 對(duì)SIRT2 的抑制活性數(shù)據(jù)分析見表2。

表2 吲哚類化合物27f-27o 對(duì)SIRT2 的抑制活性

圖4 化合物27f-27o

合成的10 個(gè)新分子對(duì)SIRT2 蛋白在高濃度下有一定的抑制效果，但總體的抑制率較低，均沒有超過對(duì)照化合物14a。其中，所有化合物中抑制效果較好的是化合物27m 苯環(huán)間位溴雙取代的結(jié)構(gòu)，其在10 μmol·L?1下其抑制率只有42%，在100 μmol·L?1下為56%，可能是溴原子的電負(fù)性降低了苯環(huán)電子云密度，與SIRT2 的靜電效應(yīng)增強(qiáng)使得結(jié)合更牢固。其次是無取代的苯環(huán)的結(jié)構(gòu)，其在10 μmol·L?1下其抑制率只有32%，在100 μmol·L?1下能達(dá)到55%，其余苯環(huán)上的單取代抑制率均在50%以下，噻吩取代的結(jié)構(gòu)抑制率更低，可能仍然是共軛結(jié)構(gòu)電子云效應(yīng)以及取代基的誘導(dǎo)效應(yīng)致使無法與SIRT2 蛋白結(jié)合或者結(jié)合不穩(wěn)定。

5 合成實(shí)驗(yàn)操作及化合物表征數(shù)據(jù)

5.1 N-（1-（4-氟芐基）-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27f）的合成及表征

首先將1-萘酚19(10 g,69 mmol)用乙腈(30 mL 溶解在圓底燒瓶中，依次加入碳酸鉀（28.6 g,207 mmol）、2-溴乙酸乙酯20（15 mL,138.7 mmol），加畢后升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，過濾出不溶性雜質(zhì)，濃縮濾液，經(jīng)快速柱層析（PE）得白色雪花狀固體化合物21。將中間體21（6.3 g,27.3 mmol）用乙醇（15 mL）和水（5 mL）溶解后，加入氫氧化鈉（3.3 g,81.9 mmol），加完后繼續(xù)室溫下攪拌3 h 左右。經(jīng)檢測(cè)反應(yīng)完全后，旋干乙醇溶劑，剩余水溶劑用稀鹽酸調(diào)至弱酸性(PH=5 左右)，此時(shí)析出固體，將其過濾，濾餅經(jīng)真空干燥箱干燥后得到白色固體化合物22。兩步收率40%。然后將4-硝基吲哚23（215 mg,1.32 mmol）、對(duì)氟溴芐24f（500 mg,2.65 mmol）、碳酸鉀（546 mg,3.96 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后加入水(100 mL)，然后用乙酸乙酯萃?。?0 mL×3），合并有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（PE 與EA 體積比為50∶1），得黃色固體中間體25f。將中間體25f（445 mg,1.34 mmol）用乙醇（8 mL）和水(4 mL)溶解在反應(yīng)瓶中，一次性加入還原鐵 粉（376 mg,6.72 mmol）、氯 化 銨（36 mg,0.67 mmol），加畢后升溫至80 ℃下回流1 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后，趁熱過濾出不溶性雜質(zhì)，旋干濾液中的乙醇，加入少量水后用飽和碳酸氫鈉溶液將PH 調(diào)至8，然后用乙酸乙酯萃?。?0 mL×3）,合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮旋干后得紅棕色固體化合物26f。將中間體22（151 mg，0.75 mmol）和中間體26f(150 mg,0.62 mmol)稱入反應(yīng)瓶中，用乙腈溶解后依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU）（283 mg,0.75 mmol）,N,N-二異丙基乙胺（DIEA）(205 μL,1.24 mmol)，加畢后繼續(xù)常溫下攪拌反應(yīng)3 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后，旋干溶劑，加水和乙酸乙酯萃取（30 mL×3）,合并有機(jī)相并用無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（PE∶EA 體積比為2∶1），得目標(biāo)化合物27f，紅色固體，總收率為40%，純度為98.1%。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ 9.93 (s,1H),8.41-8.39 (m,1H),7.96 —7.94 (m,1H),7.66 —7.56 (m,4H),7.53—7.46 (m,2H),7.32—7.27 (m,3H),7.20—7.10(m,3H),7.05 (d,J=7.6 Hz,1H),6.73 (d,J=2.8 Hz,1H),5.45 (s,2H),5.09 (s,2H) ppm.13C NMR (101 MHz,DMSO-d6) δ 166.86,163.11,160.69,153.96,136.99,134.87,134.61,130.53,129.52,128.69,127.93 1,27.04 1,26.52 1,25.87 1,25.41 1,22.31 1,21.96 1,21.72,121.07,115.88,115.66,112.00,107.31,105.99,99.48,67.99,48.95 ppm.HRMS:m/z calcd for C27H21FN2O2[M+H]+425.1660,found 425.1656。

5.2 N-（1-（4-氯芐基）-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27g）的合成及表征

將4-硝基吲哚23（197 mg,1.20 mmol）、對(duì)氯溴芐24g（500 mg,2.40 mmol）、碳酸鉀（497 mg,3.60 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后加入水(100 mL)，經(jīng)乙酸乙酯萃?。?0 mL×3），有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（PE 與EA 體積比為5∶1）得黃色固體中間體25g。將中間體25g（400 mg,1.40 mmol）用乙醇（8 mL）和水(4 mL)溶解在反應(yīng)瓶中,一次性加入還原鐵粉（391 mg,6.98 mmol）、氯化銨（37 mg,0.70 mmol）,加畢后升溫至80 ℃下回流1 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后，趁熱過濾出不溶性雜質(zhì)，旋干濾液中的乙醇，加入少量水后用飽和碳酸氫鈉溶液將PH 調(diào)至8，然后用乙酸乙酯萃取（30 mL×3），合并有機(jī)相并用無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮旋干后得紅棕色固體化合物26g。將中間體22（142 mg，0.70 mmol）和中間體26g(150 mg,0.58 mmol)稱入反應(yīng)瓶中，用乙腈溶解后依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU）（266 mg,0.70 mmol），N,N-二異丙基乙胺（DIEA）(192 μL,1.16 mmol)，加畢后繼續(xù)常溫下攪拌反應(yīng)3 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后，類似合成27f 后處理及硅膠柱色譜分離后得目標(biāo)化合物27g，紅色固體，總收率為45%，純度為98.2%。1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 9.91 (s,1H),8.38—8.36 (m,1H),7.92—7.89 (m,1H),7.62 (d,J=8.0 Hz,1H),7.58—7.52 (m,3H),7.48 (d,J=3.2 Hz,1H),7.45 (t,J=8.0 Hz,1H),7.39—7.35 (m,2H),7.25—7.18 (m,3H),7.08 (d,J=8.0 Hz,1H),7.01 (d,J=7.6 Hz,1H),6.71(d,J=2.8 Hz,1H),5.43 (s,2H),5.06 (s,2H) ppm.13C NMR (101 MHz,DMSO-d6) δ 166.87,153.97,137.71,137.01,134.61,132.43,130.56,129.27,128.98,128.76,127.93,127.04,126.52,125.87,125.42,122.32,122.01,121.72,121.07,112.04,107.28,105.99,99.57,68.00,48.98 ppm.HRMS:m/z calcd for C27H21ClN2O2[M+H]+441.1364,found 441.1363。

5.3 N-（1-（4-溴芐基）-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27h）的合成及表征

將4-硝基吲哚23（162 mg,1.00 mmol）、對(duì)溴溴芐24h（500 mg,2.00 mmol）、碳酸鉀（414 mg,3.00 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后經(jīng)類似后處理及硅膠柱色譜分離得黃色固體中間體25h。后續(xù)步驟同合成27f 類似，得目標(biāo)化合物27h，黃色固體，總收率為40%，純度為98.1%。1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 9.91 (s,1H),8.38—8.36 (m,1H),7.92—7.89 (m,1H),7.62 (d,J=7.2 Hz,1H),7.58—7.42 (m,7H),7.23 (d,J=8.0 Hz,1H),7.13 (d,J=8.4 Hz,2H),7.08 (t,J=8.0 Hz,1H),7.01 (t,J=8.0 Hz,1H),6.71 (d,J=2.8 Hz,1H),5.41 (s,2H),5.06(s,2H) ppm.13C NMR (101 MHz,DMSO-d6) δ 166.87,153.97,138.13,137.01,134.61,131.90,130.57,129.61,128.76,127.93,127.04,126.52,125.87,125.42,122.32,122.02,121.72,121.07,120.92,112.04,107.27,105.99,99.58,68.00,49.04ppm.HRMS:m/z calcd for C27H21BrN2O2[M+H]+485.0859,found 485.085 2。

5.4 N-（1-（4-乙?；S基）-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27i）的合成及表征

將4-硝基吲哚23（190 mg,1.17 mmol）、1-（4-（溴甲基）苯基）乙-1-酮24i（500 mg,2.35 mmol）、碳酸鉀（484 mg,3.51 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后經(jīng)類似萃取及硅膠柱色譜分離得黃色固體中間體25i。后續(xù)步驟同合成27f 類似，得目標(biāo)化合物27i，總收率為42%，純度為98.2%。1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 9.93 (s,1H),8.37—8.36 (m,1H),7.89(d,J=8.0 Hz,3H),7.63—7.43 (m,6H),7.28 (d,J=8.0 Hz,2H),7.22 (d,J=8.0 Hz,1H),7.07 (t,J=8.0 Hz,1H),7.02 (d,J=7.2 Hz,1H),6.73 (d,J=2.4 Hz,1H),5.53 (s,2H),5.06 (s,2H),2.53 (s,3H) ppm.13C NMR (101 MHz,DMSO-d6) δ 197.89,166.88,153.98,143.97,137.09,136.45,134.61,130.59,129.00,128.90,127.93,127.48,127.04,126.53,125.87,125.42,122.32,122.04,121.74,121.07,112.08,107.27,105.99,99.65,68.00,49.43,27.13 ppm.HRMS:m/z calcd for C29H24N2O3[M+H]+449.1860,found 449.1862。

5.5 N-（1-（4-甲氧基芐基）-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27j）的合成及表征

將4-硝基吲哚23（202 mg,1.24 mmol）、1-（溴甲基）-4-甲氧基苯24j（500 mg,2.49 mmol）、碳酸鉀（513 mg,3.72 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后經(jīng)類似萃取和硅膠柱色譜分離得黃色固體中間體25j。后續(xù)步驟同合成27f 類似，得目標(biāo)化合物27j，總收率為34%，純度為98.1%。1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 9.88 (s,1H),8.37 —8.35 (m,1H),7.92—7.89 (m,1H),7.61—7.52 (m,4H),7.46—7.42(m,2H),7.27 (d,J=8.0 Hz,1H),7.17 (d,J=7.2 Hz,2H),7.07 (t,J=8.0 Hz,1H),7.01 (d,J=7.6 Hz,1H),6.87 (d,J=8.8 Hz,2H),6.66 (d,J=2.8 Hz,1H),5.33 (s,2H),5.05 (s,2H),3.70 (s,3H) ppm.13C NMR(101 MHz,DMSO-d6) δ166.83,159.05,153.97,136.99,134.61,130.52,130.48,128.95,128.63,127.93,127.04,126.53,125.87,125.41,122.31,121.80,121.06,114.39,111.85,107.39,105.99,99.20,68.00,55.53,49.24ppm.HRMS:m/z calcd for C28H24N2O3[M+H]+437.1860,found 437.1868。

5.6 N-（1-（4-氰基芐基）-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27k）的合成及表征

將4-硝基吲哚23（207 mg,1.28 mmol）、4-（溴甲基）芐腈24k（500 mg,2.55 mmol）、碳酸鉀（528 mg,3.83 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后經(jīng)類似萃取，硅膠柱色譜分離得黃色固體中間體25k。后續(xù)步驟同合成27f 類似，得目標(biāo)化合物27k，總收率為43%，純度為98.4%。1H NMR (400 MHz,DMSOd6) δ 9.94 (s,1H),8.37—8.35 (m,1H),7.91—7.89(m,1H),7.79—7.76 (m,2H),7.62 (d,J=7.6 Hz,1H),7.58—7.51 (m,4H),7.44 (t,J=8.0 Hz,1H),7.29 (d,J=8.4 Hz,2H),7.21 (d,J=8.0 Hz,1H),7.07 (t,J=8.0 Hz,1H),6.99 (d,J=8.0 Hz,1H),6.73 (d,J=2.8 Hz,1H),5.55 (s,2H),5.06 (s,2H) ppm.HRMS:m/z calcd for C28H21N3O2[M+H]+432.1707,found 432.1703。

5.7 N-（1-（4-甲基芐基）-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27l）的合成及表征

將4-硝基吲哚23（102 mg,1.24 mmol）、1-（溴甲基）-4-甲基苯24l（500 mg,2.49 mmol）、碳酸鉀（513 mg,3.72 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后經(jīng)類似萃取，硅膠柱色譜分離得黃色固體中間體25l。后續(xù)步驟同合成27f 類似，得目標(biāo)化合物27l，總收率為41%，純度為98.3%。1H NMR (400 MHz,DMSOd6) δ 9.90 (s,1H),8.38—8.36 (m,1H),7.93—7.90(m,1H),7.62 (d,J=8.0 Hz,1H),7.59—7.52 (m,3H),7.46—7.43 (m,2H),7.24 (d,J=8.0 Hz,1H),7.14—7.05 (m,5H),7.01 (d,J=8.0 Hz,1H),6.69 (d,J=2.4 Hz,1H),5.37 (s,2H),5.06 (s,2H),2.25 (s,3H)ppm.13C NMR (101 MHz,DMSO-d6) δ 166.84,153.98,137.06,136.99,135.59,134.61,130.49,129.52,128.75,127.93,127.48,127.04,126.53,125.87,125.42,122.32,121.83,121.07,111.87,107.36,106.00,99.25,68.01,49.54,21.10 ppm.HRMS:m/z calcd for C28H24N2O2[M+H]+421.1911,found 421.1905。

5.8 N-（1-（3,5-二溴芐基）-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27m）的合成及表征

將4-硝基吲哚23（74 mg,0.46 mmol）、1,3-二溴-5-（溴甲基）苯24m（300 mg,0.91 mmol）、碳酸鉀（190 mg,1.38 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后加入水(100 mL),然后用乙酸乙酯萃?。?0 mL×3）,合并有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（PE 與EA 體積比為5：1）得黃色固體中間體25m。后續(xù)步驟同合成27f 類似，得目標(biāo)化合物27m，總收率為41%，純度為98.0%。1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 9.93 (s,1H),8.43—8.31 (m,1H),7.90 (d,J=9.4 Hz,1H),7.73 (t,J=1.6 Hz,1H),7.63 (d,J=7.6 Hz,1H),7.58—7.51 (m,4H),7.45 (t,J=7.9 Hz,1H),7.39 (d,J=1.6 Hz,2H),7.29 (d,J=8.2 Hz,1H),7.12 (d,J=7.9 Hz,1H),7.01 (d,J=7.6 Hz,1H),6.72 (d,J=3.0 Hz,1H),5.45 (s,2H),5.05 (s,2H).13C NMR (101 MHz,DMSO-d6)) δ 166.89,153.97,143.51,136.95,134.60,132.83,130.63,129.40,128.76,127.92,127.03,126.53,125.86,125.41,123.07,122.33,122.26,121.06,112.26,107.16,106.00,99.98,67.98,48.35 ppm.HRMS:m/z calcd for C27H20BrN2O2[M+H]+562.9964,found 562.9975。

5.9 N-（1-芐基-1H-吲哚-4-基）-2-（萘-1-基氧基）乙酰胺（27n）的合成及表征

將4-硝基吲哚23（237 mg,1.46 mmol）、卞溴24n（500 mg,2.92 mmol）、碳酸鉀（604 mg,4.38 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后加入水(100 mL)，然后用乙酸乙酯萃?。?0 mL×3），合并有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（PE 與EA 體積比為5∶1）得黃色固體中間體25n。后續(xù)步驟同合成27f 類似，得目標(biāo)化合物27n，總收率為45%，純度為98.3%。1H NMR (400 MHz,DMSOd6) δ 9.24 (s,1H),8.37—8.35 (m,1H),7.91—7.89(m,1H),7.62 (d,J=7.6 Hz,1H),7.56—7.53 (m,3H),7.48 (d,J=3.2 Hz,1H),7.43 (t,J=8.0 Hz,2H),7.31—7.17 (m,6H),7.06 (t,J=8.0 Hz,1H),6.99 (d,J=8.0 Hz,1H),6.70 (d,J=2.8 Hz,1H),5.42 (s,2H),5.05 (s,2H) ppm.HRMS:m/z calcd for C27H22N2O2[M+H]+407.1754,found 407.1749。

5.10 2-（萘-1-基氧基）-N-（1-（噻吩-2-基甲基）-1H-吲哚-4-基）乙酰胺（27o）的合成及表征

將2-噻吩甲醇（500 mg,4.38 mmol）用二氯甲烷（10 mL）溶解在反應(yīng)瓶中，緩慢加入二氯亞砜（1.5 mL,21.9 mmol）繼續(xù)常溫下攪拌1 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后，旋干溶劑，得中間體粗產(chǎn)品2-氯噻吩。將4-硝基吲哚23（309 mg,1.90 mmol）、2-氯噻吩（500 mg,3.80 mmol）、碳酸鉀（787 mg,5.70 mmol）稱入到反應(yīng)瓶中，用N,N 二甲基甲酰胺DMF（10 mL）溶解后，升溫至80 ℃下回流反應(yīng)2 h 左右。經(jīng)TLC 檢測(cè)反應(yīng)完全后經(jīng)相似后處理得黃色固體中間體25o。后續(xù)步驟同合成27f 類似，得目標(biāo)化合物27o，紅色固體，總收率34%，純度為98.2%。1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 9.90(s,1H),8.37—8.35 (m,1H),7.91—7.89 (m,1H),7.72 (t,J=2.4 Hz,1H),7.62 (d,J=7.6 Hz,1H),7.58—7.52 (m,4H),7.44 (d,J=8.0 Hz,1H),7.38(d,J=1.6 Hz,2H),7.28 (d,J=8.0 Hz,1H),7.10 (t,J=8.0 Hz,2H),7.00 (d,J=7.6 Hz,1H),6.72 (d,J=3.2 Hz,1H),5.61 (s,2H),5.05 (s,2H) ppm.13C NMR(101 MHz,DMSO-d6) δ 166.85,153.98,141.13,136.84,134.61,130.54,128.22,127.93,127.33,127.04,126.80,126.53,126.21,125.87,125.42,122.32,121.95,121.70,121.07,112.06,107.27,106.00,99.69,68.00,44.61 ppm.HRMS:m/z calcd for C25H20N2O2S [M+H]+413.1318,found 413.1305。

6 總結(jié)與展望

本文以化合物14a 為先導(dǎo)化合物，根據(jù)生物電子等排體原理將吲唑環(huán)的2-位N 原子用C 原子代替而成吲哚環(huán)，然后再在吲哚環(huán)1-N 上引入疏水基團(tuán)，從而合成了10 個(gè)新型吲哚類目標(biāo)化合物。其中，抑制效果較好的是化合物27m，其在10 μmol·L?1下其抑制率為42%，在100 μmol·L?1下為56%，這可能是溴原子的電負(fù)性降低了苯環(huán)電子云密度，與SIRT2 的靜電效應(yīng)增強(qiáng)使得結(jié)合更牢固。本文通過合理藥物設(shè)計(jì)并合成了一系列全新SIRT2 抑制劑，通過酶水平活性評(píng)價(jià)獲得了較好抑制活性的化合物27m，為靶向SIRT2 的抗腫瘤藥物研究提供了更多的SIRT2 新骨架選擇，并為課題后期進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)修飾奠定了基礎(chǔ)。