• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定毒蕈中6種鵝膏毒肽類和鬼筆毒肽類毒素

    2021-09-11 00:58:21薛康胡江濤俞凌云劉菲馬麗龔婷婷華燚陳佳玥
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年17期
    關(guān)鍵詞:串聯(lián)質(zhì)譜法超高效液相色譜

    薛康 胡江濤 俞凌云 劉菲 馬麗 龔婷婷 華燚 陳佳玥

    摘要 [目的]建立一種基于超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)快速測(cè)定野生毒蕈中6種鵝膏毒肽和鬼筆毒肽類毒素的分析方法。[方法]將采集的四川野生毒蕈子實(shí)體低溫烘干,用甲醇超聲提取,40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干,加水復(fù)溶,Oasis HLB固相萃取小柱凈化,經(jīng)Waters HSS T3色譜柱分離,ESI正離子模式下多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方式分析。[結(jié)果]6種毒肽在50~1 000 μg/kg具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均大于0.99,方法檢出限為30 μg/kg。α-鵝膏毒肽、β-鵝膏毒肽、γ-鵝膏毒肽、二羥鬼筆毒肽、羧基二羥鬼筆毒肽、羧基三羥鬼筆毒肽在低、中、高3個(gè)濃度的平均回收率在93.1%~117.5%,變異系數(shù)(CV)在1.49%~7.77%。[結(jié)論]該方法能準(zhǔn)確、靈敏地測(cè)定野生毒蕈中6種毒肽,適用于野生菌中毒肽毒素的測(cè)定。

    關(guān)鍵詞 野生毒蕈;鵝膏毒肽;鬼筆毒肽;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

    中圖分類號(hào) R155.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

    文章編號(hào) 0517-6611(2021)17-0182-04

    doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2021.17.048

    Abstract [Objective]To establish a method for rapid determination of 6 kinds of amanitins and phallotoxins in wild poisonous mushrooms by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS).[Method]The wild mushrooms samples collected in Sichuan were dried at low temperature, the amanitins and phallotoxins in samples were extracted with methanol by ultrasonic extraction, then 40 ℃ rotary evaporation drying ,water redissolution, purified by HLB solid phase extraction column and separated on Waters HSS T3 column,lastly detected by electrospray(ESI+) in MRM mode. [Result] The 6 kinds of amanitins and phallotoxins had good linear relationships in the range of concentration 50-1000 μg/kg with the correlation coefficient value greater than 0.99.The detection limits of 6 kinds of amanitins and phallotoxins were 30 μg/kg.The average recovery rates of α-amanitin, β-amanitin,γ-amanitin, phalloidin, phallacidin and phallisacin at 3 spiked levels were 93.1%-117.5%. The coefficients of variation were 1.49%-7.77%. [Conclusion]The method can accurately and sensitively determine 6 kinds of amanitins and phallotoxins in poisonous mushrooms, which is suitable for the detection of amanitins and phallotoxins in wild mushrooms.

    Key words Wild poisonous mushrooms;Amanitins;Phallotoxins;UPLC-MS/MS

    毒蕈即日常所說(shuō)的毒蘑菇,是指不同類型的含有毒素的大型野生真菌,由于有些毒蕈在外觀上與食用菌沒(méi)有明顯區(qū)別,導(dǎo)致誤食毒蕈而引發(fā)中毒的事件時(shí)有發(fā)生,且在群體性食物中毒中,毒蕈中毒的致死率極高,其中肝損傷型毒蕈中毒致死率高達(dá)90%~100%[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì),我國(guó)毒蕈中毒事件中,95%是由鵝膏菌屬引起的[2]。因?yàn)轾Z膏菌中含有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定且毒性極強(qiáng)的鵝膏多肽類毒素,該類毒肽耐高溫、干燥和酸堿環(huán)境,一般的烹調(diào)加工不會(huì)破壞其毒性,不幸誤食后,毒肽就會(huì)通過(guò)消化系統(tǒng)進(jìn)入肝臟,對(duì)肝臟造成嚴(yán)重的損傷,最終引發(fā)多器官功能衰竭而死亡[3-5]?,F(xiàn)階段,國(guó)內(nèi)外一般采用高效液相色譜法、高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜法和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)毒肽毒素[6-11],我國(guó)還沒(méi)有檢測(cè)毒肽毒素的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。因此,該研究建立了一種利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定野生毒蕈中6種毒肽毒素的檢測(cè)方法,以期為野生菌毒素檢測(cè)提供一種高效的檢測(cè)方法。

    1 材料與方法

    1.1 儀器

    UPLC lclass-XEVOTQ-XS超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Waters公司);3H20RI離心機(jī)(中國(guó)赫西);AE240電子天平(瑞士梅特勒);XW-80A旋渦混合器(中國(guó)HUXI);B8510E-DTH超聲波清洗器(美國(guó)必能信);Mili-Q Integral 3超純水儀(美國(guó)Millipore公司);ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm,美國(guó)Waters公司)。

    1.2 試劑 甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨、氯仿,HPLC級(jí),美國(guó)Fisher公司。標(biāo)準(zhǔn)品:α-鵝膏毒肽(α-amanitin,純度≥90%,瑞士Alex);β-鵝膏毒肽(β-amanitin,純度≥90%,瑞士Alex);γ-鵝膏毒肽(γ-amaniyin,純度≥90%,瑞士Alex);羧基三羥鬼筆毒肽(phallisacin,50 μg/mL,上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司);羧基二羥鬼筆毒肽(phallacidin,純度≥95%,瑞士Alex);二羥鬼筆毒肽(phalloidin,純度≥90%,瑞士Alex)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。

    1.3.1.1 α-鵝膏毒肽、β-鵝膏毒肽、γ-鵝膏毒肽、二羥鬼筆毒肽、羧基二羥鬼筆毒肽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制。 分別精確稱取α-鵝膏毒肽、β-鵝膏毒肽、γ-鵝膏毒肽、二羥鬼筆毒肽、羧基二羥鬼筆5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1 mg,精確至萬(wàn)分之一,甲醇定容至10 mL,濃度為100 μg/mL。-20 ℃存儲(chǔ)。

    1.3.1.2 鵝膏毒肽和鬼筆毒肽混合標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制。分別準(zhǔn)確吸取1.0 mL α-鵝膏毒肽、β-鵝膏毒肽、γ-鵝膏毒肽、二羥鬼筆毒肽和羧基二羥鬼筆毒肽儲(chǔ)備液以及2.0 mL羧基三羥鬼筆毒肽標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,濃度為10 mg/L。

    1.3.1.3 6種毒肽混合標(biāo)準(zhǔn)系列的配制。分別吸取50、100、200、400、600、1 000 μL,用初始流動(dòng)相定容至10 mL,配制成濃度為50、100、200、400、600、1 000 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

    1.3.2 樣品前處理。

    1.3.2.1 提取。將新鮮野生菌樣品烘干(烘干溫度小于50 ℃)并打成粉末,精密稱取干燥粉末0.2 g,置于50 mL離心管中,加入甲醇10 mL,振蕩渦旋1 min,超聲提取10 min,以10 000 r/min離心10 min后,移取上清液于另一離心管中。殘?jiān)性偌尤?0 mL甲醇,渦旋混合均勻,再次超聲提取10 min后以10 000 r/min離心,合并上清液。40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干,加2 mL水溶解,洗滌3次,得提取液。

    1.3.2.2 凈化。分別用2 mL甲醇和純水淋洗活化Prime Oasis HLB固相萃取柱(3 mL,60 mg),再將以上提取液過(guò)柱,用2 mL含5%甲醇的水溶液淋洗2次,最后用2 mL甲醇-乙腈混合溶液(V∶V=3∶2)洗脫。將洗脫液在40 ℃水浴中氮吹近干,用1 mL初始流動(dòng)相[甲醇-5 mmol/L 乙酸銨(0.1%甲酸)=90∶10]溶解定容,溶液過(guò)0.2 μm濾膜后,待上機(jī)測(cè)定。

    1.3.3 分析條件。

    1.3.3.1 色譜條件。色譜柱為HSS T3色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm,Waters公司);流動(dòng)相 A為5 mmol/L乙酸銨-0.1%甲酸水溶液, B為甲醇溶液;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量1.0 μL;洗脫程序見表1。

    1.3.3.2 質(zhì)譜條件。電噴霧ESI正離子模式;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);離子源溫度150 ℃;毛細(xì)管電壓2.83 kV;脫溶劑溫度550 ℃;脫溶劑氣流量1 000 L/h;其他質(zhì)譜參數(shù)見表2。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

    鵝膏毒肽屬雙環(huán)八肽,鬼筆毒肽是一類環(huán)狀七肽,其支鏈上有較多的羥基和甲基,容易接受電子而被離子化,故常采用正離子模式進(jìn)行分析[6,12]。分別將6種毒肽的標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇稀釋成500 ng/mL,質(zhì)譜儀直接進(jìn)樣,在ESI正離子MS1Scan模式下,發(fā)現(xiàn)6種毒肽都有較強(qiáng)的M+1離子峰的出現(xiàn),因此選定M+1為母離子,在Daughter Scan模式下,分別找到每種毒肽的2個(gè)最佳子離子。最后優(yōu)化錐孔電壓、碰撞能、脫溶劑氣流量、脫溶劑氣溫度等質(zhì)譜參數(shù),使離子化效率更高、離子強(qiáng)度最大。具體6種毒肽的母離子和子離子見表2。

    2.2 色譜條件的優(yōu)化 試驗(yàn)選擇了UPLC HSS T3色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),此色譜柱是與100%水相相兼容的C18柱,對(duì)保留和分離極性有機(jī)小分子具有較為理想的效果。該試驗(yàn)選擇研究了4組流動(dòng)相(A組水-乙腈;B組水-甲醇;C組0.1%甲酸水-甲醇;D組5 mmol/L乙酸銨(0.1%甲酸)-甲醇)的分離效果,試驗(yàn)表明,甲醇的分離效果比乙腈好,且使用5 mmol/L乙酸銨(0.1%甲酸)作為水相時(shí),目標(biāo)物的離子峰強(qiáng)度較高,峰形較好。6種毒肽的標(biāo)準(zhǔn)提取離子圖詳見圖1。

    2.3 樣品前處理方法的優(yōu)化

    由于野生菌中成分復(fù)雜,脂肪、磷脂、肽類等雜質(zhì)含量較高,該試驗(yàn)采用了先溶劑提取、再固相萃取柱凈化的方法,先后比較了甲醇、水、乙腈3種溶劑的提取效果,結(jié)果表明,甲醇的提取效果較好,回收率高。

    試驗(yàn)考察了在使用HLB固相萃取柱凈化過(guò)程中,5%甲醇-氯仿和5%甲醇-水淋洗液的淋洗效果,結(jié)果表明,5%甲醇-氯仿淋洗液對(duì)HLB小柱中吸附的脂肪、磷脂等雜質(zhì)具有較好的洗脫效果,但回收率較差。綜合考慮,該試驗(yàn)采用5%甲醇-水作為淋洗液。

    2.4 線性范圍與檢出限 6種毒肽的線性方程、線性范圍和線性相關(guān)系數(shù)見表3。以3倍信噪比(S/N≥3)估算檢出限(LOD),6種毒肽的檢出限為30 μg/kg。

    2.5 方法回收率和精密度

    取1份樣品,分別對(duì)6種毒肽進(jìn)行低(50 μg/kg)、中(200 μg/kg)、高(600 μg/kg)濃度加標(biāo)試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)(表4),平均回收率分別為α-鵝膏毒肽99.5%~

    117.5%,β-鵝膏毒肽93.4%~107.0%,γ-鵝膏毒肽94.2%~110.1%,二羥鬼筆毒肽108.5%~119.8%,羧基二羥鬼筆毒肽 93.5%~109.7%,羧基三羥鬼筆毒肽93.1%~106.5%;6次平行測(cè)定,變異系數(shù)(CV)在1.49%~7.77%。

    2.6 野生菌樣品檢測(cè) 按上述方法對(duì)采集到的10個(gè)四川野生菌樣品進(jìn)行前處理和檢測(cè)。在4號(hào)和6號(hào)樣品中檢出了α-鵝膏毒肽、β-鵝膏毒肽和二羥鬼筆毒肽3種毒蕈毒素,具體結(jié)果見表5,譜圖見圖2和圖3。

    3 結(jié)論

    該研究基于超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS/MS),采用甲醇提取, HLB固相萃取柱凈化,HSS T3 色譜柱分離,電噴霧ESI正離子模式和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方

    式對(duì)6種毒蕈毒素的目標(biāo)離子進(jìn)行監(jiān)測(cè),外標(biāo)法定量,建立了6種毒蕈毒素的快速、準(zhǔn)確、選擇性好的測(cè)定方法。該方法與傳統(tǒng)的色譜法的檢測(cè)時(shí)間(20 min)相比,大大縮短了檢測(cè)時(shí)間,同時(shí)具備更高的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異性,適用于野生菌中毒肽毒素的測(cè)定。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 魏佳會(huì),吳劍峰,陳佳,等.12種劇毒鵝膏菌的肽類毒素成分鑒定及其相對(duì)含量差異比較研究[J].分析化學(xué),2017,45(6):817-823.

    [2] 章鐵哲,孫承業(yè),李海蛟,等. 一起蘑菇致急性中毒事件的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查與鑒定[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2016,25(8):1012-1015.

    [3] 趙春艷,王婷婷,邰麗梅,等. 鵝膏菌肽類毒素的研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌,2014,33(4):9-11,13.

    [4] 陳作紅,胡勁松,張志光,等. 我國(guó)28種鵝膏菌主要肽類毒素的檢測(cè)分析[J].菌物系統(tǒng),2003,22(4):565-573.

    [5] 杜秀菊,杜秀云.毒蕈毒素及其應(yīng)用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(13):7172-7174.

    [6] 劉陽(yáng),欒杰,林佶. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定云南野生致命鵝膏菌中的毒傘肽和毒肽毒素[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2017,8(10):3756-3761.

    [7] 柳潔,丁文婕,何碧英,等. 超高效液相色譜-電噴霧離子化-四級(jí)桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜指紋圖譜檢測(cè)毒蕈中4種鵝膏肽類毒素[J].分析化學(xué),2013,41(4):500-508.

    [8] 劉思潔,方赤光. 蕈菌毒素檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2017,8(3):754-760.

    [9] 包海鷹,圖力古爾,李玉.7種鵝膏菌屬真菌肽類毒素的HPLC分析(英文)[J].菌物研究,2005,3(1):13-16.

    [10] 周貽兵,李磊,吳玉田,等.超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定野生蘑菇中的3種鵝膏毒肽[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2018,45(22):4144-4147.

    [11] 雒婉霞,王冉冉,王慶國(guó),等.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)毒蕈中5種鵝膏多肽類毒素[J].疾病預(yù)防控制通報(bào),2018,33(5):84-87.

    [12] 曹福祥,張志光,梁宋平.反相高效液相色譜法分離純化α-鵝膏毒肽[J].分析化學(xué),2003,31(5):562-565.

    猜你喜歡
    串聯(lián)質(zhì)譜法超高效液相色譜
    UPLC—MS/MS法測(cè)定雞蛋、雞肉中4種氟喹諾酮類藥物殘留
    水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物檢測(cè)結(jié)果不確定度的評(píng)定
    超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定豬尿液中30種不同種類“瘦肉精”藥物殘留
    氣相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定玩具產(chǎn)品中5種有機(jī)磷阻燃劑
    高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定益母草顆粒中鹽酸水蘇堿的含量
    醋酸艾司利卡西平片在比格犬體內(nèi)的相對(duì)生物利用度
    UPLC—MS/MS法同時(shí)測(cè)定葡萄中4種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑研究
    超高效液相色譜 串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞皮及脂肪組織中抗球蟲類藥物殘留
    食品罐內(nèi)壁涂料中雙酚 二縮水甘油醚的快速檢測(cè)和遷移規(guī)律
    超高效液相色譜 三重四極桿/復(fù)合線性離子阱質(zhì)譜測(cè)定水樣中三苯甲烷類及代謝物
    久久久国产欧美日韩av| 日本色播在线视频| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲精品日本国产第一区| 伊人久久国产一区二区| 精品酒店卫生间| 国产精品成人在线| 久久热在线av| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲丝袜综合中文字幕| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产成人精品婷婷| 久久国内精品自在自线图片| 国产一区有黄有色的免费视频| 色94色欧美一区二区| av免费观看日本| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 在线免费观看不下载黄p国产| 成人综合一区亚洲| 成年美女黄网站色视频大全免费| 亚洲综合色网址| 性色avwww在线观看| 亚洲精品456在线播放app| a级片在线免费高清观看视频| 交换朋友夫妻互换小说| 多毛熟女@视频| 在线 av 中文字幕| 秋霞伦理黄片| 美女大奶头黄色视频| 黑人高潮一二区| 精品久久久精品久久久| 一级爰片在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 十分钟在线观看高清视频www| 黑人欧美特级aaaaaa片| av在线播放精品| 久久韩国三级中文字幕| 青青草视频在线视频观看| 伦理电影免费视频| 视频中文字幕在线观看| 热re99久久国产66热| 欧美国产精品va在线观看不卡| av女优亚洲男人天堂| 热re99久久精品国产66热6| 九九爱精品视频在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 人妻 亚洲 视频| 深夜精品福利| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美精品一区二区大全| 2022亚洲国产成人精品| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品一品国产午夜福利视频| 日韩成人伦理影院| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 我的女老师完整版在线观看| 视频中文字幕在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久久a久久爽久久v久久| 成人免费观看视频高清| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产精品免费大片| 国精品久久久久久国模美| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 成年动漫av网址| 久久久久精品人妻al黑| 人体艺术视频欧美日本| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲欧洲国产日韩| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 免费大片18禁| 咕卡用的链子| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 在线天堂最新版资源| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 少妇 在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 久久久精品94久久精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 免费大片黄手机在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲四区av| 在线观看一区二区三区激情| 国产福利在线免费观看视频| 国产高清国产精品国产三级| 飞空精品影院首页| 大陆偷拍与自拍| 七月丁香在线播放| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产探花极品一区二区| 日本vs欧美在线观看视频| 嫩草影院入口| 51国产日韩欧美| 韩国精品一区二区三区 | 香蕉国产在线看| 99热网站在线观看| 精品第一国产精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| 丝袜在线中文字幕| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 成人手机av| 激情五月婷婷亚洲| 我要看黄色一级片免费的| 久热久热在线精品观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品不卡视频一区二区| 女人久久www免费人成看片| 男女边摸边吃奶| 成人国产麻豆网| 国产精品欧美亚洲77777| 91精品国产国语对白视频| 国产精品熟女久久久久浪| 午夜精品国产一区二区电影| 蜜桃在线观看..| 永久网站在线| 久久热在线av| av线在线观看网站| a级毛片在线看网站| 久久久久人妻精品一区果冻| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲成人av在线免费| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 少妇人妻 视频| 美国免费a级毛片| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲av国产av综合av卡| 男男h啪啪无遮挡| 免费黄频网站在线观看国产| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久午夜福利片| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品一区蜜桃| 2022亚洲国产成人精品| 毛片一级片免费看久久久久| 午夜福利乱码中文字幕| 人人妻人人澡人人看| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲,欧美精品.| 美女主播在线视频| 在线 av 中文字幕| 国产一区二区激情短视频 | 精品少妇内射三级| 午夜视频国产福利| 午夜av观看不卡| 丝袜美足系列| 国产精品国产av在线观看| 观看av在线不卡| 人妻人人澡人人爽人人| 精品一区二区三卡| 久久女婷五月综合色啪小说| 超色免费av| 一级a做视频免费观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 免费黄色在线免费观看| 老女人水多毛片| 国产成人一区二区在线| 国产精品 国内视频| 亚洲av男天堂| 热re99久久国产66热| 婷婷色av中文字幕| 免费看不卡的av| 一级片免费观看大全| 亚洲国产欧美在线一区| 久久午夜福利片| 久久久久久久大尺度免费视频| 精品人妻在线不人妻| 女性生殖器流出的白浆| 精品视频人人做人人爽| 国产永久视频网站| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲精品日本国产第一区| 一级爰片在线观看| 大陆偷拍与自拍| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 26uuu在线亚洲综合色| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲av免费高清在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 久久久久国产网址| 爱豆传媒免费全集在线观看| 青春草国产在线视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产一区二区在线观看av| 啦啦啦在线观看免费高清www| 两性夫妻黄色片 | 亚洲一区二区三区欧美精品| av片东京热男人的天堂| 国精品久久久久久国模美| 妹子高潮喷水视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 91精品三级在线观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 美女国产视频在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲经典国产精华液单| 国产激情久久老熟女| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品女同一区二区软件| 男人添女人高潮全过程视频| 日本wwww免费看| 下体分泌物呈黄色| 插逼视频在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品无大码| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲欧美成人精品一区二区| av播播在线观看一区| 国产成人av激情在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 国产色婷婷99| 99精国产麻豆久久婷婷| 最新中文字幕久久久久| 国产亚洲最大av| 久久精品夜色国产| 男人添女人高潮全过程视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 777米奇影视久久| 欧美国产精品va在线观看不卡| 最近中文字幕2019免费版| 九色成人免费人妻av| 久久久久久人人人人人| 2022亚洲国产成人精品| 下体分泌物呈黄色| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久影院123| 纯流量卡能插随身wifi吗| 美女大奶头黄色视频| 好男人视频免费观看在线| 宅男免费午夜| 一边亲一边摸免费视频| 久久久a久久爽久久v久久| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲国产色片| 精品熟女少妇av免费看| 午夜福利视频精品| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 中国国产av一级| 高清在线视频一区二区三区| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲五月色婷婷综合| 中文字幕人妻丝袜制服| 精品国产国语对白av| 熟女av电影| 精品久久蜜臀av无| 91成人精品电影| 日本午夜av视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产熟女欧美一区二区| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 777米奇影视久久| 丝瓜视频免费看黄片| av播播在线观看一区| 曰老女人黄片| 免费观看av网站的网址| 丰满少妇做爰视频| 亚洲成色77777| 亚洲情色 制服丝袜| 国产又爽黄色视频| 99热国产这里只有精品6| 一边摸一边做爽爽视频免费| 男的添女的下面高潮视频| 咕卡用的链子| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日韩成人伦理影院| 欧美精品av麻豆av| 秋霞伦理黄片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 日本黄色日本黄色录像| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 亚洲国产av新网站| 成年av动漫网址| 成人手机av| 97人妻天天添夜夜摸| 在线天堂最新版资源| 高清不卡的av网站| www.av在线官网国产| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 青春草视频在线免费观看| 国产一区二区在线观看av| 黄色 视频免费看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品第一国产精品| 亚洲精品456在线播放app| 老司机影院毛片| 中国三级夫妇交换| 一本大道久久a久久精品| 在线观看免费视频网站a站| 日韩av不卡免费在线播放| 国产综合精华液| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产高清不卡午夜福利| 高清av免费在线| 国产69精品久久久久777片| 在线天堂中文资源库| 我的女老师完整版在线观看| a 毛片基地| 国产在线视频一区二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 老司机亚洲免费影院| 人妻 亚洲 视频| av免费观看日本| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产福利在线免费观看视频| 国产片特级美女逼逼视频| 九九在线视频观看精品| 亚洲欧美清纯卡通| 免费观看av网站的网址| 亚洲四区av| 熟女电影av网| 欧美人与性动交α欧美软件 | 欧美日韩av久久| 永久网站在线| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 欧美日韩av久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品日本国产第一区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久精品国产综合久久久 | 男人爽女人下面视频在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 2021少妇久久久久久久久久久| 人体艺术视频欧美日本| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 美女福利国产在线| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品久久久久久av不卡| 国产高清不卡午夜福利| 日韩免费高清中文字幕av| 夫妻性生交免费视频一级片| 一本久久精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲人成77777在线视频| 国产av国产精品国产| 不卡视频在线观看欧美| 黄色毛片三级朝国网站| 免费av不卡在线播放| 丝袜美足系列| 在线天堂最新版资源| 美国免费a级毛片| 99精国产麻豆久久婷婷| 大香蕉97超碰在线| 永久免费av网站大全| 久久久久网色| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产精品一二三区在线看| 18在线观看网站| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲欧美一区二区三区国产| 超色免费av| a级毛色黄片| 欧美日韩成人在线一区二区| 婷婷成人精品国产| 久久精品国产自在天天线| 欧美日韩亚洲高清精品| 婷婷色综合大香蕉| av线在线观看网站| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 男女午夜视频在线观看 | kizo精华| 日本av手机在线免费观看| 99re6热这里在线精品视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 大香蕉久久网| 99九九在线精品视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 中国国产av一级| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产极品天堂在线| 丰满少妇做爰视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产 一区精品| 国产乱来视频区| 成人手机av| 国产成人欧美| 亚洲欧洲国产日韩| 午夜福利视频在线观看免费| 九色成人免费人妻av| 久久久精品免费免费高清| 国产亚洲最大av| 亚洲国产精品999| 色视频在线一区二区三区| 成年人免费黄色播放视频| 国产av国产精品国产| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 美女内射精品一级片tv| 午夜福利在线观看免费完整高清在| www日本在线高清视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 蜜桃在线观看..| 亚洲国产av新网站| 激情视频va一区二区三区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品无大码| 中文字幕亚洲精品专区| 久久久久精品久久久久真实原创| av黄色大香蕉| 九色成人免费人妻av| 热99久久久久精品小说推荐| 久久久久久久精品精品| 看十八女毛片水多多多| 青青草视频在线视频观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 大片电影免费在线观看免费| 97超碰精品成人国产| 黄片播放在线免费| 少妇高潮的动态图| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产亚洲一区二区精品| 亚洲美女视频黄频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 国产探花极品一区二区| 午夜91福利影院| av.在线天堂| 国产 精品1| 免费高清在线观看视频在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 日韩制服骚丝袜av| 亚洲三级黄色毛片| 9色porny在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩一本色道免费dvd| 国产69精品久久久久777片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国内精品宾馆在线| 伊人亚洲综合成人网| 久久99热6这里只有精品| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲四区av| 亚洲精品aⅴ在线观看| 人妻系列 视频| 欧美bdsm另类| 日本欧美视频一区| 欧美性感艳星| 久久久久久久久久久免费av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 中文字幕制服av| 最近最新中文字幕免费大全7| 日韩一区二区视频免费看| 青青草视频在线视频观看| 亚洲经典国产精华液单| 曰老女人黄片| 男人操女人黄网站| 久久久国产欧美日韩av| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲在久久综合| 嫩草影院入口| av网站免费在线观看视频| 欧美3d第一页| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产成人精品久久久久久| 咕卡用的链子| 老司机影院毛片| 丰满少妇做爰视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 午夜福利乱码中文字幕| av免费在线看不卡| 久久精品国产亚洲av天美| 99热国产这里只有精品6| 丝袜在线中文字幕| 免费人妻精品一区二区三区视频| 韩国精品一区二区三区 | 中国美白少妇内射xxxbb| 国产免费视频播放在线视频| 男女下面插进去视频免费观看 | 桃花免费在线播放| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲成人手机| 久久免费观看电影| 久久久久久人人人人人| 亚洲av福利一区| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 最后的刺客免费高清国语| 久久久亚洲精品成人影院| 中文字幕制服av| 亚洲国产欧美在线一区| 在线精品无人区一区二区三| 99久久精品国产国产毛片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久精品国产a三级三级三级| 少妇的逼好多水| 欧美+日韩+精品| 久久午夜福利片| 美女大奶头黄色视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产成人精品婷婷| 国产在线视频一区二区| 老司机亚洲免费影院| 91aial.com中文字幕在线观看| 男女午夜视频在线观看 | 国产精品一区二区在线观看99| 老司机影院成人| 街头女战士在线观看网站| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产成人精品婷婷| 久久久久国产网址| 成年人午夜在线观看视频| 波多野结衣一区麻豆| 久久久久久久亚洲中文字幕| 视频中文字幕在线观看| 永久网站在线| 香蕉精品网在线| 大码成人一级视频| 亚洲精品美女久久av网站| 在现免费观看毛片| 观看av在线不卡| 成人综合一区亚洲| 亚洲精品av麻豆狂野| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产在线免费精品| 熟女人妻精品中文字幕| 一区二区av电影网| 久久久精品免费免费高清| 男男h啪啪无遮挡| 日韩av不卡免费在线播放| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 伦理电影免费视频| 人体艺术视频欧美日本| 久久精品久久久久久久性| 爱豆传媒免费全集在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 美女国产高潮福利片在线看| 久久久久精品久久久久真实原创| 成人午夜精彩视频在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 18在线观看网站| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 性色av一级| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 伦精品一区二区三区| 一级毛片我不卡| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久精品夜色国产| 久久久久久久国产电影| 亚洲熟女精品中文字幕| 18禁动态无遮挡网站| 草草在线视频免费看| 乱码一卡2卡4卡精品| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久这里有精品视频免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 捣出白浆h1v1| 一本久久精品| 伊人亚洲综合成人网| 妹子高潮喷水视频| 一区二区av电影网| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久ye,这里只有精品| 女人久久www免费人成看片| 热99国产精品久久久久久7| 久久免费观看电影| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 日韩一本色道免费dvd| 亚洲人与动物交配视频| 国产黄频视频在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲综合色惰| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 2018国产大陆天天弄谢| 蜜桃在线观看..| 国产成人免费无遮挡视频| 免费高清在线观看日韩| 国产精品嫩草影院av在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品久久久久久久久免| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久久精品94久久精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 成人无遮挡网站| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 超碰97精品在线观看| 久久这里只有精品19| 亚洲国产看品久久| 国产综合精华液| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久久久精品性色| 成人手机av| av黄色大香蕉| 欧美另类一区| 国产成人精品福利久久| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 视频在线观看一区二区三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日韩大片免费观看网站| 国产av一区二区精品久久| 国精品久久久久久国模美| 亚洲欧美一区二区三区黑人 |